一、不同+G_z暴露后大鼠脑皮层HSP70 mRNA表达水平的变化（论文文献综述）
代海滨[1]（2019）在《基于冷休克蛋白低温对蛛网膜下腔出血早期和延迟继发性脑损伤的保护及机制研究》文中指出背景:蛛网膜下腔出血（Subarachnoid hemorrhage,SAH）是由于脑部的血管破裂出血,血液侵入蛛网膜下腔所致的一类高死亡率和高致残率的疾病,分原发性和继发性SAH。,近十几年来临床上对于SAH后血管痉挛的治疗已经有了很大的进步,但是对于SAH的预后改善尚无明显进展,常引起严重的神经功能损伤,包括脑炎性反应等引起的继发性脑损伤会直接影响到SAH患者的生活质量和生存率。SAH发生后72小时内出现的全脑直接损伤（即早期脑损伤）包括早期脑水肿、氧化应激性损害、神经细胞凋亡以及脑梗死。因此,本研究针对早期脑损伤相关的因子CIRP、及抑制剂C23蛋白、延迟继发性脑损伤相关的因子RBM3在神经细胞中的表达反应,以及如何调节此类反应因子和减轻神经元损伤的机制进行研究。方法:本课题首先从C57BL/6小鼠上获取神经元细胞,通过培养建立稳定的神经元细胞培养系,建立细胞SAH模型。通过视交叉池注血法,建立大鼠SAH模型。通过大鼠SAH模型,观察脑部颞叶皮层神经细胞的免疫荧光染色,确定CIRP和RBM3在脑内神经细胞的分布特点,使用real-time PCR和Western Blot法检测神经元细胞在SAH后不同时间点的mRNA相对表达和蛋白表达水平。利用CIRP功能抑制剂C23蛋白抑制大鼠脑内CIRP的功能,应用免疫组化、尼氏染色法、TUNEL细胞凋亡法和大鼠转棒实验,评估大鼠神经功能的损伤和恢复,观察SAH后凋亡相关蛋白、神经元凋亡和运动功能等指标的变化,探讨低温对SAH后神经细胞中CIRP和RBM3因子表达的影响和神经功能的保护作用。结果:大鼠SAH后颞叶皮层脑组织CIRP在建模后12h、1d mRNA和蛋白呈高表达,RBM3在建模后3d和7d mRNA和蛋白呈高表达,与细胞凋亡相关的Bcl-2蛋白呈低表达,Bax,caspase-3,caspase-9蛋白以及细胞色素c呈高表达。经过低温治疗后SAH大鼠都可在7天后,上述指标恢复到对照组（sham组）水平,而低温本身对正常Sham组大鼠,具有提高神经元细胞凋亡率、增加脑部组织损伤的作用。但是,SAH组的低温处理,反而抑制了神经细胞凋亡与脑组织损伤。通过免疫荧光染色,我们发现CIRP、RBM3主要在神经元细胞中表达,而星形胶质细胞只有小部分表达。因此,大鼠神经元细胞是CIRP的主要表达细胞。低温治疗过的SAH大鼠神经元细胞凋亡率明显减少,免疫组化DAB染色显示SAH+低温组的CIRP表达明显减少,尼氏染色和电镜检查都表明低温对SAH大鼠具有降低神经元细胞凋亡和恢复线粒体功能,以及提高转棒功能的作用。同时,我们发现CIRP的拮抗剂C23蛋白对于CIRP与细胞表面受体结合具有抑制作用,此抑制作用可以有效降低SAH引起的脑部神经元凋亡、减轻炎性反应,有助于恢复大鼠的运动功能。并且,从C23不同剂量组的实验结果,我们发现SAH后给予C23蛋白的最高剂量,对CIRP的抑制效果最好。结论:脑组织神经细胞内的CIRP和RBM3分别在SAH后早期和延迟继发性脑损伤时表达升高,并引起凋亡相关蛋白表达变化,诱导了神经元凋亡。低温可减少脑组织CIRP和RBM3表达,并减少凋亡相关蛋白表达,抑制神经元凋亡。在大鼠SAH模型,高剂量的C23可以减轻CIRP诱导的脑组织炎性反应,减少细胞凋亡,改善运动功能。
何根林[2]（2018）在《HSP90 β调节小胶质细胞M1型活化在热射病中枢炎症中的作用及机制研究》文中研究指明研究背景和意义热射病（heat stroke,HS）是热病（heat illness）中对机体损伤最严重、危害最大的一种疾病,其临床症状主要是体温过高和中枢神经系统功能障碍,并伴有横纹肌溶解、弥散性血管内凝血（disseminated intravascular coagulation,DIC）、全身多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome,MODS）、全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome,SIRS）等严重并发症,其死亡率1550%。由于中枢神经损害是热射病主要临床特征,大脑成为热射病公认的主要损伤靶器官之一,因此热射病中枢神经系统损伤机制及防治措施研究备受关注。有关热射病中枢神经损伤机制目前普遍认为主要是高热对中枢神经细胞的直接打击以及热射病过程中脑水肿、脑缺血、缺氧导致中枢神经细胞继发性损伤。热射病脑损伤的防治措施主要包括高压氧和降温等物理手段,以及靶向功能蛋白干预和干细胞移植等生物手段。随着热射病发病机理的不断探索,近年来研究发现热射病中枢神经系统（central nervous system,CNS）炎症的发生发展与脑损伤程度密切相关。但由于对热射病中枢神经炎症的分子机制还缺乏深入系统研究,也限制了针对神经炎症开展热射病脑损伤的临床救治。小胶质细胞作为中枢神经系统炎症调控的重要效应细胞,在脑外伤、脑缺血以及神经退行性变等诸多神经系统疾病中被激活,呈现出M1型表型活化,具有促炎症反应的致伤特性。但小胶质细胞参与热射病中枢神经系统炎症发生及中枢神经损伤的具体机制目前仍不清楚。因此,揭示小胶质细胞M1型活化在热射病中枢神经系统炎症发生及中枢神经系统损伤中的机理,有望为以小胶质细胞为靶标治疗热射病中枢神经损伤提供参考,对探寻有效神经保护性药物,维护普通人群和职业人群健康具有重要作用。热休克蛋白（heat shock protein,HSP）是细胞在高温、缺氧、寒冷、创伤、感染等应激原诱导下所生成的一组遗传保守的应激蛋白。小胶质细胞热应激后必不可免地会产生热休克蛋白,近年来很多研究已证实热休克蛋白参与调节免疫和控制炎症反应,因此,在高热诱导小胶质细胞M1型活化过程中,极有可能受HSP的调控。而HSP90是已报道最为广泛的促炎相关调控因子,在脓毒症、关节炎、肠炎、多发性硬化症、红斑狼疮等多种炎性疾病中可募集多种炎症信号分子,诱导促炎症因子的产生。HSP90生物学功能的发挥有赖于其HSP90α和HSP90β两种亚型的作用。研究发现,HSP90α可能与肿瘤发生、增强的细胞周期调节、细胞应激时的快速保护等有关;而HSP90β可能与癌症、炎症等细胞功能调整有关。因此,我们推测热射病过程中HSP90β可能参与调控高热刺激小胶质细胞M1型活化。因此,本课题通过构建热射病小鼠模型,观察热射病后中枢神经系统病理改变和炎症反应,检测小胶质细胞M1型活化标志物的表达规律;并在离体小胶质细胞热休克模型上,观察了M1型活化标志物、炎症因子和HSPs三者的表达规律及相关性;采用抑制剂干预证明HSP90及其亚型在调控热休克小胶质细胞M1型活化中的作用,并从MAPK、STAT3、NF-κB炎症信号通路探讨HSP90β调控小胶质细胞M1型活化的机制,为临床靶向HSP90β干预热射病中枢神经系统炎性损伤的治疗提供实验基础。研究方法1,取雄性健康BALB/c小鼠,12周龄,在设定温度42.0℃,湿度60%的环境模拟舱中,持续暴露至小鼠核心温度达到42.7℃,完成热射病小鼠模型的构建。小鼠分成正常对照组（Con）、热射病后恢复即刻0 h组（HS-0h）、恢复3 h组（HS-3h）、恢复6 h组（HS-6h）、恢复24 h组（HS-24h）、恢复72 h组（HS-72h）、Ganetespib组（Gan）和Gan+HS组（恢复后6 h）。观测各组小鼠核心温度和体重变化,纪录死亡情况。于相应时相点取材脑组织,行HE染色病理观察。分析中枢神经系统炎症反应与脑组织损伤之间的相关性。2,对各组小鼠各取一边大脑皮层组织分别提取总RNA和蛋白。对各组细胞分别提取总RNA和蛋白。qRT-PCR法检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、COX-2和mPGES-1的mRNA表达。ELISA/EIA检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和PGE2蛋白分泌情况。探讨热射病小鼠和热休克小胶质细胞促炎症反应恢复变化的规律,以及抑制剂和esiRNA干预后炎症反应变化。3,取各组小鼠和细胞蛋白提取物,免疫印迹检测M1表型分子CD45、CD68、CD64和CD16蛋白表达,流式细胞术和免疫组织荧光检测CD45和CD68表达及定位情况。探讨热射病小鼠和热休克小胶质细胞M1型活化的变化规律,以及抑制剂和esiRNA干预对M1型活化的调控效应。4,取各组小鼠和细胞蛋白提取物,免疫印迹检测HSP70、HSP90α和HSP90β蛋白表达,ERK、JNK、p38、JAK2、STAT3、IκB-α和p65蛋白表达及磷酸化情况。免疫组织荧光检测Iba-1、HSP90β和p-STAT3荧光定位表达情况。从MAPK、STAT3和NF-κB炎症信号通路探讨HSP90β调控小胶质细胞M1型活化的内在机制。结果1,以42.0℃热暴露、小鼠核心温度达到42.7℃为阈值成功构建热射病模型小鼠,热射病小鼠恢复期3 h进入明显的低体温期,热射病恢复期6 h内脑组织病理明显改变、体重丢失显着、炎症因子mRNA表达和蛋白分泌增多、M1表型标志物表达增加;24h后仍有未完全恢复。表明热射病小鼠出现明显中枢神经病理损伤、中枢神经炎症以及小胶质细胞M1型活化。2,选取热暴露强度适中的42℃1.5 h热休克处理N9小胶质细胞,发现热休克小胶质细胞恢复期3 h和6 h炎症因子mRNA表达和蛋白分泌、M1表型标志物增加明显,随后均有所下降,但到12 h仍有部分指标仍未完全恢复。HSP27、HSP70和HSP90表达在热休克后12 h内均有不同程度增加,抑制剂分别干预HSP27、HSP70和HSP90,小胶质细胞促炎M1活化仅受HSP90抑制剂Gan调控影响。3,HSP90抑制剂Gan干预后热休克N9小胶质细胞信号转导分子ERK、JAK2和STAT3增强的磷酸化表达水平明显被抑制。ERK抑制剂干预对热休克N9小胶质细胞的炎症因子分泌无影响,而JAK2和STAT3磷酸化抑制剂可明显减少热休克N9小胶质细胞产生的炎症因子。esiRNA瞬时沉默HSP90α和HSP90β基因后结果发现,沉默HSP90β而非HSP90α,能显着抑制热休克N9小胶质细胞炎症因子的mRNA和蛋白表达的增加,并能显着消除热休克小胶质细胞JAK2和STAT3磷酸化表达水平的增加。4,脑立体定位注射Gan靶向HSP90β干预后,热射病小鼠大脑皮层组织脑水肿和炎性等病理损伤得以减轻,炎症因子mRNA表达和蛋白分泌、M1表型标志物荧光强度、STAT3磷酸化荧光强度和入核程度明显低于热射病小鼠,提示在体Gan干预能通过HSP90β–STAT3通路抑制小胶质细胞M1型活化减轻热射病中枢神经系统炎性损伤。全文结论1、热射病小鼠出现明显脑组织损伤病理改变,大脑皮层大量炎症因子产生、小胶质细胞特异M1型标志物激活,提示热射病中枢神经损伤与中枢神经炎症、小胶质细胞M1型活化密切相关。2、热休克诱导N9小胶质细胞炎症因子及M1活化表型分子的mRNA和蛋白表达都增加,表明热应激可直接刺激小胶质细胞出现M1型活化。HSP27、HSP70和HSP90表达在N9小胶质细胞热休克后12 h内均有不同程度增加,HSP90抑制剂Gan能有效抑制热休克对小胶质细胞炎症因子和M1表型标志物的增加,提示HSP90在调节热休克小胶质细胞促炎M1型活化中具有关键作用。3、HSP90抑制剂Gan明显抑制ERK、JAK2和STAT3的磷酸化表达水平增加,应用抑制剂分别干预ERK、JAK2和STAT3的磷酸化激活,结果发现只有JAK2–STAT3信号通路参与了Gan调节小胶质细胞M1型活化促炎反应。通过esiRNA分别沉默HSP90α和HSP90β,发现Gan通过调节HSP90β而不是HSP90α,逆转热休克诱导的N9小胶质细胞的炎症因子分泌增加和下游促炎信号通路蛋白激活。因此,结果提示HSP90β通过STAT3信号通路调节热休克N9小胶质细胞M1型活化产生促炎反应。4、Gan靶向干预HSP90β明显减轻热射病小鼠病理变化、炎症因子与M1表型标志物表达以及STAT3磷酸化,结果表明干预HSP90β可有效抑制小胶质细胞M1型活化,减轻热射病中枢神经系统炎症及中枢神经损伤,进一步证明热射病小鼠小胶质细胞M1型活化产生促炎反应主要受HSP90β-STAT3调控。
樊尚华[3]（2017）在《一种新型偏头痛—癫痫共病大鼠模型的建立及机制研究》文中指出目的:1.建立大鼠偏头痛-癫痫共病模型,观察其行为学表现。2.检测三叉神经脊束核尾侧亚核（Sp5C）区域c-Fos蛋白以及海马CA3区域热休克蛋白-70（HSP-70）和BDNF蛋白表达的改变,探讨共病模型是否成功建立。3.检测血浆降钙素基因相关肽（CGRP）和脑源性神经营养因子（BDNF）浓度改变对偏头痛-癫痫共病的互相影响,检测酸敏感离子通道（ASIC）1a、ASIC3和CACNA 1A的表达,探讨偏头痛-癫痫共病的可能机制。方法:1.暴露大鼠上矢状窦旁硬脑膜,给予相应化学物质刺激硬脑膜,建立大鼠偏头痛模型;腹腔注射氯化锂-匹鲁卡品,建立大鼠痫性发作模型。将大鼠随机分为四组,即对照组、偏头痛组、痫性发作组、偏头痛-癫痫共病组（简称共病组）。2.比较对照组、偏头痛组和共病组的偏头痛行为学变化,包括挠头次数和痛觉敏感度;比较对照组、痫性发作组和共病组的癫痫行为学变化,包括痫性发作的潜伏期和Racine分级评分。3.通过酶联免疫法检测颈静脉CGRP和BDNF浓度,免疫组化检测c-Fos蛋白、HSP70蛋白和BDNF蛋白浓度,定量聚合酶链反应（qPCR）和Western Blot检测ASIC1a、ASIC3和CACNA1A表达,比较对照组、偏头痛组、痫性发作组和共病组的变化。结果:1.与偏头痛组比较,共病组大鼠的挠头次数明显增多,痛觉敏感度明显降低;与痫性发作组比较,共病组大鼠痫性发作的潜伏期明显减少,癫痫发作级别达到5级以上比例明显增加。2.与偏头痛组比较,共病组大鼠的血浆CGRP浓度变化无统计学意义;与痫性发作组比较,共病组大鼠的血浆BDNF浓度变化无统计学意义。3.与偏头痛组比较,共病组大鼠的三叉神经尾状核c-Fos表达明显增加;与痫性发作组比较,共病组大鼠的海马CA3区HSP70表达变化无统计学意义,而BDNF表达明显增加。结论:1.化学物质刺激上矢状窦可导致大鼠挠头次数,痛觉敏感度增加,Sp5C区c-Fos表达升高,提示偏头痛模型建立成功;痫性发作组大鼠发作级别达到4级及以上提示痫性发作组模型建立成功。2.共病组大鼠较单纯偏头痛组的挠头次数和痛觉敏感度增加,较单纯痫性发作组的潜伏期减少且发作达到5级以上比例增加,证明共病模型建立成功。3.偏头痛合并癫痫大鼠Sp5C区c-Fos表达较单纯偏头痛大鼠上升,提示癫痫可能加重偏头痛发作,可解释偏头痛合并癫痫患者其头痛发作次数更多、程度更重。4.偏头痛合并癫痫大鼠海马CA3区BDNF表达较单纯癫痫大鼠上升,提示偏头痛可能加重痫性发作,可解释癫痫合并偏头痛患者,其痫性发作程度更重。
祝一飞[4]（2016）在《大鼠组织中HIF1和RPS3在低氧习服中的作用研究》文中进行了进一步梳理平原人群快速进入高原后易受高原低氧影响,引发高原反应甚至高原疾病。高原低氧明显影响氧化应激系统的功能,对脑组织和骨骼肌等耗氧量大的组织产生损伤。在人体中,脑组织对氧气的变化最为敏感,低氧时脑功能损伤发生最早,引发机体出现睡眠障碍和头痛等症状。骨骼肌是机体运动的主要器官,低氧会降低肌肉组织的能量储存,低氧对骨骼肌的损伤使平原人群进入高原后出现疲惫、乏力等症状,降低了进入高原人群的活动能力和进驻高原部队的战斗力。因此,高原低氧会对机体的生理和健康产生很大的影响,甚至造成损伤。HIF1是低氧调控中的一个中心调节器,Rps3p具有抗氧化应激的作用,本课题将对不同低氧刺激后的大鼠进行生理病理学及分子生物学研究,从基因调控水平探究HIF1信号通路基因和RPS3基因在低氧习服中对脑组织和骨骼肌的作用。本课题通过低压低氧模拟舱模拟不同低氧刺激,实验将大鼠随机分为空白组、间歇性低氧组（IH组）、急进5500m组（AH组）和间歇性低氧后急进5500m组（IH-AH组）。本课题主要从以下几个部分进行研究:（1）考察不同低氧刺激对大鼠生理病理的影响。分析常氧和不同低氧刺激后大鼠动脉血气指标、静脉血生化和血常规指标;摘取大鼠脑组织和骨骼肌,HE染色观察组织病理改变;（2）探究HIF1信号通路基因和RPS3基因在低氧习服过程中对大鼠脑组织的影响。采用Real-time PCR技术,检测不同低氧刺激后,大鼠脑组织HIF1相关基因和RPS3基因mRNA水平表达变化差异;（3）探究HIF1和RPS3基因在低氧习服中对大鼠骨骼肌的保护机制。检测不同低氧刺激后,大鼠骨骼肌HIF1相关基因、RPS3基因水平的表达差异;检测大鼠L6骨骼肌细胞低氧刺激后RPS3基因水平和Rps3p蛋白水平的表达差异,初步探讨低氧习服对骨骼肌的保护机制。第一部分研究表明:不同低氧刺激后大鼠ALP、ALT、AST、尿酸未发生显着性变化,肌酐值在生理范围内变动,不同低氧刺激未对大鼠的肝、肾造成损伤。间歇性低氧、急进5500m低氧和间歇性低氧后急进5500m低氧均引起大鼠脑组织水肿、核固缩,损伤程度依次加重。骨骼肌经不同低氧刺激后未发生明显的病理改变。血液生理指标分析得,急进5500m低氧环境后,大鼠pO2、SO2%、pCO2、HCO3-、BB、BE显着性降低,提示大鼠出现呼吸性碱中毒合并代谢性酸中毒,未经间歇性低氧预处理急进低氧的大鼠表现为轻度的低氧血症,经间歇性低氧预处理再急进的大鼠,pO2和SO2%值较急进5500m组有所提高,且酸碱平衡指标变化较小。间歇性低氧和急进5500m低氧后大鼠红细胞数、红细胞压积和血红蛋白较空白组相比显着性增加,提示机体在低氧刺激后通过增加血红蛋白浓度,代偿性地提高了组织的氧气供应;间歇性低氧处理后再急进5500m组大鼠红细胞数、血红蛋白和红细胞压积更接近常氧水平。第二部分研究表明:从基因表达水平看,在大鼠脑组织中,间歇性低氧诱导VEGFA、VEGFB、NOS3基因上调,EPO基因下调;急进低氧后大鼠脑组织HSPA1B、NOS1、VEGFB明显下调;间歇性低氧后急进低氧HSPA1B、NOS3、VEGFB基因下调,EPO和HSPA1A上调。不同低氧刺激促进HIF1信号通路上游基因EGLN1和VHL的表达,HIF1A表达减少;但RPS3基因未发生显着性变化。第三部分研究表明:在骨骼肌中,EPO、HSPA1A和HSPA1B基因经急性低氧刺激后表达量显着上升,间歇性低氧和急进低氧均促进大鼠骨骼肌NOS1、NOS2和NOS3基因的大量表达。间歇低氧预处理后再急进低氧的大鼠骨骼肌组织、低氧刺激后的大鼠L6骨骼肌细胞中,大鼠RPS3基因表达显着升高。本研究通过考察不同低氧刺激对大鼠生理病理的影响,探究大鼠脑组织和骨骼肌HIF1信号通路基因和RPS3基因在低氧习服中的作用,可得出以下结论:1、不同低氧刺激会对大鼠的生理产生不同的影响,间歇性低氧预处理后再急进低氧环境可促进大鼠低氧习服,相对提高大鼠pO2和SO2%,较小地改变大鼠机体生理变化,使大鼠的生理指标更接近常氧水平,改善了急性低氧环境下机体氧气的供应;间歇性低氧预处理同时促进大鼠骨骼肌组织对高原低氧习服,但会引起脑组织损伤;2、间歇性低氧预处理未促进大鼠脑组织对高原低氧习服,不同低氧刺激均造成大鼠脑损伤,与不同低氧刺激引起VEGF、NOS、EGLN1、VHL、HIF1A等HIF1相关基因表达变化有关,间歇性低氧对脑组织的损伤程度最小;3、间歇性低氧预处理后急进低氧促进大鼠骨骼肌对高原低氧习服,保护大鼠骨骼肌免受低氧损伤。不同低氧刺激均诱导HIF1目的基因NOS1、NOS2、NOS3基因上调,急进低氧诱导EPO、HSPA1A、HSPA1B基因上调,间歇性低氧预处理后再急进低氧骨骼肌组织中、低氧刺激后大鼠L6骨骼肌细胞中RPS3基因上调,是间歇性低氧预处理促进大鼠骨骼肌高原低氧习服的可能机制。
李鹏跃[5]（2014）在《基于MD-MS技术研究葛根总黄酮及葛根素静脉和鼻腔给药的药动学差异》文中提出脑中风学名脑卒中,是严重危害人类健康和生命安全的常见难治疾病,具有发病率高、致残率高、复发率高、死亡率高、预后差、经济负担重的特点,在严重影响患者本人生活质量的同时,也给家庭、社会带来了沉重的负担。葛根为治疗脑中风的常用中药。目前,其主要成份葛根素已有4种相关静脉注射制剂上市,在治疗缺血性脑血管疾病方面疗效确切。葛根素作用机制与扩张脑血管、清除自由基、抗氧化、抑制炎症反应等作用有关。同时,现代药理研究亦表明,除葛根素外,葛根总黄酮中其余成分同样具有脑保护作用,能够明显缩小大脑中动脉栓塞（Middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型大鼠脑梗死体积、降低脑水肿程度、提高超氧化物歧化酶的活性、降低丙二醛水平,目前已有葛酮通络胶囊及愈风宁心系列口服制剂上市。然而,上述制剂均存在一定的缺陷。葛根素注射剂自1993年上市以来,临床不良反应时有发生,严重者甚至导致死亡;而口服制剂存在吸收差、生物利用度低的问题,并且对于中风病人而言,吞服困难,给药顺应性较差。这些问题均限制了上述制剂在临床中的应用。传统中医学理论和现代医学研究均证明鼻腔给药是治疗脑病的有效途径。因此,本课题基于“鼻通脑络”中医理论,在前期研究的基础上,选择鼻腔作为给药途径,采用微透析取样技术,对葛根素及自制葛根总黄酮经不同途径给药后的药动学差异进行了研究。具体研究内容如下:1葛根总黄酮的提取纯化工艺研究以葛根素和总黄酮提取率为指标,通过正交试验对葛根总黄酮的提取工艺进行了研究,最优工艺为12倍量水,提取3次,每次1.5h,所得工艺便捷可行,目标成分提取率达到90%以上。对葛根水提液进行了醇沉处理,最佳醇沉工艺为提取液浓缩至0.5g药材/ml,加95%乙醇,调节醇浓度为60%,醇沉24h,进一步提高了浸膏中目标成分的纯度。在此基础上,运用单因素考察法对大孔吸附树脂纯化工艺进行了优化,最佳树脂为HPD200A,上样液浓度为0.25g药材/ml,大孔树脂柱径高比为1:5,上样量为0.5g药材/ml树脂,上样流速为1ml/min,水洗2BV,水洗流速为0.5ml/min,30%乙醇洗脱4BV,醇洗流速为0.5ml/min。最终产物的出膏率约为10%,葛根素的纯度在30%以上,总黄酮的纯度在70%以上。对葛根总黄酮的树脂纯化工艺进行放大实验研究,所得提取物纯度基本稳定,工艺可行。对提取物中各成分进行质谱分析,初步推断其中5种主要成分分别为:3’-羟基葛根素、葛根素、葛根素木糖苷、3’-甲氧基葛根素、大豆苷。以Bcl-2 mRNA为指标对葛根素及提取物的抗凋亡作用进行了比较,实验结果显示,提取物组效果更好,提示提取物中有成份能够促进抗凋亡基因Bcl-2mRNA的高表达,更有助于抑制细胞在缺氧环境下的凋亡。2葛根素微透析及HPLC-MS/MS方法的建立体外透析实验及反渗透实验显示,葛根素的探针传递率及回收率分别为:63.37%和71.52%,两者之间存在显着差异,而不同浓度药液对探针回收率（或传递率）并无影响,通过探针清除率实验,证实了葛根素与探针膜材料之间不存在吸附;同时研究表明,药物回收率、传递率以及两者之间的差值会随着探针外药液搅拌速度的升高而增加;在灌流液中添加适当的添加剂能够有效的提高回收率,降低传递率,同时亦使两者之间的差异增大;随着探针膜长的增加,药物的传递率及回收率均有显着提高,但两者之间的差值亦随之而增大。上述结果提示,如果需要求得体内的真实药物浓度,以探针的在体传递率替代在体回收率是不可行的,故采用零净通量法对探针的在体回收率进行了计算。脑探针的定位按照大鼠脑立体定位图谱结合脑组织切片,确定嗅球的位置为以前囟为基点,AP:+8mm,ML:±1mm处定位,血液探针沿向心室方向植入颈静脉,以生理盐水为灌流液,采用零净通量法测定探针在血液及嗅球部位的在体回收率,分别为:17.52%,29.13%。建立了透析液中葛根素及内标柚皮苷的HPLC-MS/MS测定方法。色谱条件为C18色谱柱（Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 column（3.5μm,4.6 × 1Omm,USA））;HPLC条件:甲醇-水,0-8min,24:76,8-15min,60:40;MS/MS条件:离子源:ESI负离子模式,监测离子:415/295（葛根素）,579/271（柚皮苷）。葛根素在0.002-0.111 μg/mL和0.111-8.9 μg/mL范围内线性关系良好。回归方程分别为y=0.23816x-0.0001（r=0.998）和y=0.25562x-0.01582（r=0.999）。精密度、稳定性均符合要求。定量限以标准曲线最低点计。3葛根素经不同途径给药大鼠体内药动学研究以雄性SD大鼠为实验动物,将血液探针埋植于颈静脉,脑探针埋植于嗅球部位,葛根素按照7mg/kg的剂量分别静脉推注、静脉滴注、鼻腔给药,微透析取样,20min收集样品一次,HPLC-MS/MS检测透析液中药物浓度。以Kinetica药动学软件非房室模型处理体内数据。血药动力学结果显示:各组的血药峰浓度Cmax分别为30.89±10.69μg/ml（i.v.）、9.31±3.99μg/ml（i.v.gtt）、3.82±1.03 μg/ml（i.n.）,各组的血药 AUC0-5h 分别为 1524.63±584.05μg/ml.min（i.v.）、1037.18±501.70 μg/ml·min（i.v.gtt）、623.12±170.86 μg/ml.min（i.n.）,各组的 tmax分别为 20min（i.v.）、100min（i.v.gtt）、68±10.95min（i.n.）,各组的平均滞留时间分别为 44.20±8.97min（i.v.）、87.24±7.84min（i.v.gtt）、140.27±7.86min（i.n.）。与静脉给药相比,鼻腔给药组各参数均有显着性差异。嗅球部位药动学结果显示:各组的药物峰浓度Cmax分别为0.29±0.07μg/ml（i.v.）、0.0523μg/ml（i.v.gtt）、0.50±0.16μg/ml（i.n.）,各组的嗅球部位 AUC0-5h 分别为 28.44 ±6.89μg/ml·min（i.v.）、8.30±4.85μg/ml·min（i.v.gtt）、86.84±23.50μg/ml.min（i.n.）,各组的 tmax分别为 20min（i.v.）、132±36min（i.v.gtt）、212±30.33 min（i.n.）,各组的平均滞留时间分别为 81.76±11.46min（i.v.）、162.63±19.00min（i.v.gtt）、186.43±6.25min（i.n.）。各组的脑靶向指数分别为1.87%、0.80%、13.94%。鼻腔给药虽然血药浓度较低,但嗅球部位药物浓度得到了很大的提高,脑靶向性显着提高。4葛根素经不同途径给药MCAO模型大鼠体内药动学研究为了进一步模拟葛根素的临床用药对象和给药方式,以雄性SD大鼠为实验动物,制备大鼠大脑中动脉栓塞模型,对病理状态下,葛根素经不同途径给药后的药动学行为进行了研究。血药动力学结果表明:各组的血药峰浓度Cmax为13.84±2.45μg/ml（i.v.gtt）、4.36±1.06μg/ml（i.n.）,各组的血药 AUC0-5h分别为 1416.68±249.74μg/ml·min（i.v.gtt）、533.48±136.75μg/ml·min（i.n.）,各组的 tmax分别为 100 min（i.v.gtt）、80±31min（i.n.）,各组的平均滞留时间分别为88.85±6.34 min（i.v.gtt）、115.61±13.82min（i.n.）。鼻腔给药的绝对生物利用度为37.66%,与正常大鼠相比,静脉滴注时MCAO模型大鼠具有较高的血药AUC,鼻腔给药时MCAO模型大鼠血药AUC与正常大鼠组无显着性差异。嗅球部位药动学结果表明:各组的药物峰浓度Cmax为0.19±0.12μg/ml（i.v.gtt）、1.54±0.43μg/ml（i.n.）,各组的嗅球部位的 AUC0-5h 分别为 24.50±16.74μg/ml·min（i.v.gtt）、255.96±87.74μg/ml·min（i.n.）,各组的 tmax 分别为 104±38 min（i.v.gtt）、92±11min（i.n.）,各组的平均滞留时间分别为141.72±12.68 min（i.v.gtt）、136.57±17.12min（i.n.）,各组的脑靶向指数为1.73%和47.98%。鼻腔给药组的Cmax、AUC均显着高于静脉滴注组,脑靶向系数更是高达静脉滴注组的27倍,充分体现了鼻腔给药的优越性。与正常大鼠相比,静脉滴注和鼻腔给药时,MCAO大鼠嗅球部位药物峰浓度和AUC显着增加,并且曲线形态发生明显变化,这种现象可能是由于血脑屏障的破坏或脑缺血对嗅黏膜和嗅神经的影响所导致的。5葛根总黄酮经不同途径给药MCAO模型大鼠体内药动学研究以雄性SD大鼠为实验动物,制备MCAO模型大鼠,自制葛根提取物按照20mg/kg的剂量分别静脉滴注、鼻腔给药,微透析取样,HPLC-MS/MS检测透析液中药物浓度。以Kinetica药动学软件非房室模型处理体内数据。血药动力学结果表明:各组的血药峰浓度Cmax为14.96±3.97μg/ml（i.v.gtt）、0.75±0.30μg/ml（i.n.）,各组的血药 AUC0-5h 分别为 1707.02±457.88μg/ml·min（i.v.gtt）、134.72±37.61μg/ml.min（i.n.）,各组的 tmax 分别为 104±9 min（i.v.gtt）、68±18min（i.n.）,各组的平均滞留时间分别为90.28±15.18 min（i.v.gtt）、139.41±12.11min（i.n.）,鼻腔给药的绝对生物利用度为7.89%,但药物在血浆中的MRT显着长于静脉滴注组。与葛根素单独给药相比,静脉滴注时两者血药AUC并无显着差异,提示在该药物浓度下提取物中其余黄酮类成分并未对葛根素的代谢产生影响;但鼻腔给药时提取物组的血药AUC显着降低,仅为葛根素组的25%,这种现象可能是由于提取物中多种成分在透过鼻黏膜时发生竞争所致。嗅球部位药动学结果表明:各组的药物峰浓度Cmax为0.060±0.03μg/ml（i.v.gtt）、0.37±0.11μg/ml（i.n.）,嗅球部位的 AUC0-5h分别为 7.38±4.65μg/ml-min（i.v.gtt）、58.60±14.48μg/ml·min（i.n.）,鼻腔给药组嗅球部位药物浓度持续升高,并且下降趋势不明显,各组的DTI分别为:0.43%和43.50%。与葛根素单独给药相比,静脉滴注时提取物组嗅球部位AUC仅为葛根素组的30%,这可能是由于透过血脑屏障时黄酮类成分发生竞争所致,鼻腔给药也发生相似的现象。尽管葛根素组和提取物组鼻腔给药后血液和嗅球部位AUC存在显着差异,但二者的DTI分别为47.98%和43.50%,较为接近,进一步证明了黄酮类成分在经鼻转运入脑过程中存在竞争。
朱怀成[6]（2014）在《+G暴露对大鼠肝脏HSP70 mRNA及蛋白表达的影响》文中认为研究背景当代高性能战斗机及航天事业的快速发展，飞行员要在执行任务的同时要暴露在正加速度环境下。已有相关研究表明正加速度暴露下脑组织HSP70及HSP70mRNA表达增高，并保护脑组织。研究关于在正加速度暴露下HSP70和HSP70mRNA在肝胆系统相关脏器的表达情况，进一步了解正加速度暴露对肝胆系统的影响。为保障预防飞行员在正加速度暴露环境下工作的身体健康。该实验已进行预实验，并已取得阳性支持结果后进行该项研究。目的观察+Gz暴露条件下大鼠肝脏中热休克蛋白70（HSP70）及HSP70mRNA的变化，探讨+Gz暴露诱导肝脏产生HSP70mRNA及HSP70的病理生理学意义。方法100只大鼠，随机分为4组，每组25只，一组作为空白对照，其余三组分别进行+2Gz，+6Gz和+1O Gz暴露，峰值作用时间3min，加速度增长率1G/s。然后，分别于暴露后的6h、12h、24h、48h和96h麻醉大鼠，立即处死后取肝脏组织，利用相对定量法和Western blot蛋白印记技术检测HSP70mRNA及HSP70的表达情况，对实验结果进行统计学分析。结果与对照组相比，+Gz暴露后6h、12h、24h、48h，HSP70mRNA及HSP70表达水平升高（P<0.05），+Gz暴露后96h，HSP70mRNA及HSP70表达水平无升高（P>0.05）。+Gz暴露后6h，HSP70mRNA及HSP70开始升高，+Gz暴露后12h，HSP70mRNA及HSP70达到高峰，而对照组没有这一变化趋势。在同一时间点上，不同+Gz暴露之间比较，+6Gz组HSP70及HSP70mRNA表达最高，+2Gz组次之，+1OGz最少（P<0.05）。在+Gz暴露12h，+2Gz组、+6Gz组、+10Gz组HSP70及HSP70mRNA表达水平的变化趋势具有一致性。实验数据符合正态分布，利用方差分析、q检验及秩检验进行统计学分析。结论+Gz暴露增加大鼠肝脏HSP70mRNA及HSP70表达水平，+Gz暴露环境下机体可能通过代偿机制增加HSP70表达实现对肝脏的保护。
武岳[7]（2013）在《+Gz对大鼠学习记忆功能和脑自噬的影响及中药的防护作用》文中研究指明现代高性能战斗机做机动飞行，尤其是特技飞行时，所产生的正加速度（+Gz）具有G值高、作用时间长并可反复出现等特点，对机体产生广泛的影响，其中，对脑功能的影响尤为突出，对飞行安全也会造成严重危害。近年来，很多致死性的飞行事故都是由持续性加速度引起的。因此，深入探讨持续性+Gz对机体的影响，特别是对脑组织结构与功能的影响及其机制，对于研究新的有效防护措施有着十分重要的意义，也是当今航空医学界面临的重要课题之一。当机体暴露于+Gz环境时，一方面由于加速度的作用，引起血液从上半身向下半身转移，头部血压会降低，脑血流量也会随之减少，使得脑部出现缺血缺氧的状态，从而引起学习记忆功能障碍。以往研究表明，大鼠在受到加速度作用后，其兴奋性及认知功能障碍受到了严重损害，学习与记忆能力均明显减弱，并且随着G值的增加，加速度暴露对大鼠学习能力的影响更加严重。另一方面，在+Gz暴露条件下，由于血液的转移，脑组织应力增加，引起脑组织发生形变，进而脑血管也会因为受压而变形，从而脑组织的血液供应严重不足，使得缺血缺氧状态更加严重，当其超过脑组织所能承受的正常生理限度时，即可导致脑组织的病理性损伤。近年来研究发现，自噬是一种有助于细胞存活的机制，它能够在机体饥饿、细胞分化及正常生长的情况下，通过降解破损细胞器及大分子物质维持正常细胞新陈代谢和内环境稳态。自噬性细胞死亡是区别于程序性坏死和凋亡的不同的一种程序性细胞死亡方式，它是指从粗面内质网的无核糖体附着区脱落的双层膜包裹部分胞质和细胞内需要降解的细胞器、蛋白质等成分形成自噬体的细胞过程。自噬参与了细胞稳定状态的维持和一些疾病的发生过程。细胞既可以作为一种防御机制来抵御环境变化对细胞造成的损伤，又可作为一种死亡机制诱导细胞发生一种异于凋亡的程序性细胞死亡。既往研究表明，脑缺血再灌注损伤会导致脑自噬相关基因表达的增强，过度的自噬活动会导致细胞的死亡。然而，持续性+Gz暴露所产生的类似于脑缺血再灌注损伤是否能诱导自噬激活及其作用尚未见报道。根据中医学理论，飞行人员受到的高+Gz应激可致使机体气血、阴阳虚损甚至耗散，最终导致机体抗应激耐受能力下降；高+Gz引起的脑功能异常则属于较典型的“血瘀证”。中医学历来强调“正气存内，邪不可干”，“髓海有余，则轻劲多力，自过其度”。通过采用复方制剂调节机体多系统功能，可增强人的体质，进而增强对各种应激条件的适应性、耐受性及受损后的恢复能力。研究发现，红景天、人参等可提高机体对不利环境因素的耐受性，使机体的生命活动保持在正常水平，提高机体非特异性抵抗力；而基于祖国医学理论研制的复方中药制剂则具有更加明显的效果。大量研究已证实，益气、活血、通经络这三种功效的复方中药对“血瘀证”具有十分明显的疗效，并已得到了广泛的临床应用。“天芪航力方”是空军航空医学研究所研制的一种复方中药，初步研究已证实，该药对高+Gz应激致大鼠脑损伤具有一定的保护作用，但其效果需进一步确证，相关作用机制也有待深入探讨。本研究从功能学与形态学两方面入手，利用动物离心机模拟+Gz环境，通过Y-型迷宫和旷场分析两种最经典的行为学研究方法，观察了+Gz暴露后大鼠学习记忆能力和行为的变化及复方中药“天芪航力方”提取物的防护作用；再采用RT-PCR、Western-Blot等实验技术方法观察了+Gz暴露后大鼠脑自噬相关基因Beclin-1和LC3的变化，进一步揭示自噬在+Gz致脑损伤中的作用。本研究的主要结果及发现如下：1.+Gz致大鼠学习记忆功能障碍及“天芪航力方”的防护作用观察+10Gz/3min暴露后大鼠学习记忆功能和行为的变化及复方中药“天芪航力方”提取物的防护效果。结果表明，Y-型迷宫实验显示，+10Gz/3min组大鼠与对照组相比，正确反应次数明显减少（P <0.01），反应时显着延长（P <0.01），且在暴露后的第6d仍没有恢复到对照水平；而药物组大鼠在暴露后各时间点的正确反应次数和反应时与对照组均无显着性差异，较+10Gz/3min组显着改善（P <0.01）。旷场分析实验显示，+10Gz/3min组大鼠中央格停留时间在暴露后即刻和2d较对照组显着延长（P <0.05），而药物组无显着改变；+10Gz/3min组和药物组的总得分在暴露后即刻较对照组均显着降低（P <0.01）。结果提示，+10Gz/3min暴露可引起大鼠显着的学习记忆功能障碍，复方中药“天芪航力方”提取物对+10Gz/3min致大鼠学习记忆功能障碍具有明显的防护作用，对暴露后即刻的行为改变也有一定的防护作用。2.+Gz致大鼠脑皮层自噬相关基因Beclin-1和LC3表达的变化探讨+Gz暴露后大鼠脑皮层自噬相关标志物Beclin-1和LC3表达的变化。结果表明，与对照组相比，+10Gz/3min和+10Gz/5min两组大鼠在暴露后6h脑皮层Beclin-1和LC3mRNA及蛋白表达均显着增强（P <0.01），暴露后24h其表达量仍显着增加（P <0.05）。+10Gz/5min组较+10Gz/3min组表达增加更为明显（P <0.05）。以上结果提示，+10Gz暴露可诱导脑皮层自噬相关标志物Beclin-1和LC3的高表达，说明高+Gz应激促进了脑皮层自噬的发生，且随着暴露时间的延长，自噬表达更显着。总之，本研究观察了+Gz暴露后大鼠学习记忆功能和脑皮层自噬相关基因Beclin-1和LC3表达变化，并探讨了复方中药“天芪航力方”提取物对+Gz暴露致大鼠学习记忆功能障碍的防护效果，主要阐明了以下问题：+10Gz暴露可引起大鼠学习记忆功能障碍，并促进脑皮层自噬的发生；复方中药“天芪航力方”提取物对+Gz致大鼠学习记忆障碍具有明显的防护作用。本研究对进一步阐明高G暴露对脑的影响及其发生机制具有一定意义，也为高G防护提供了新的思路。
孙志芳[8]（2013）在《逆灸对力竭大鼠Ghrelin的影响及能量代谢相关机制的研究》文中研究指明“逆针灸”是中医“治未病”的重要手段之一,具有防病治病、保健延衰的作用。“逆灸”是其中最为常用和易用的方式。我们通过对逆灸现代研究的学习,发现逆灸对机体的调节作用非常广泛,涉及到大量基础的指标,具有良性、广泛性和潜伏性的作用特点。中医理论认为逆灸通过扶助正气、增强身体素质,从而增强机体对抗疾病的能力。我们认为正气的核心是机体的自稳调节能力。艾灸适宜的刺激是一种良性应激原,提前给予艾灸处理,能够使机体产生适度预应激,能够针对潜隐性的功能紊乱进行调整,提高机体的自稳调节能力,使机体的应激耐受力增强,以抵抗随后过度应激对机体的伤害。我们前期实验观察到逆灸可以减轻随后的“疾病状态”大鼠（佐剂性关节炎、痛经模型）的发病率与疾病程度,也对“亚健康状态”雌性大鼠机体（更年期模型）有良性的调节作用。我们想进一步观察逆灸对“健康”机体的作用。结合逆灸的作用特点,我们需要一个能体现机体综合素质的指标,以全面概括逆灸的“良性预应激”作用。运动能力是动物的基本能力之一,体现机体的生命力,需要各个系统的全面配合,是机体综合素质的体现。强大的运动能力可以说是机体整体健康程度的一种外在表现,也可以说是机体“正气充足”的体现。我们可以通过观察逆灸对动物运动耐力的影响,进而推测逆灸是如何通过“扶助”正常机体的“正气”而达到防病保健的效果。极限运动耐力属于运动能力的一种,可以使机体将自身潜力充分发挥出来,更能体现出机体的生命潜力。同时,极限耐力运动属于过度应激,与逆灸的适度应激相对应,两者一前一后可以体现出两种应激叠摞后的效应。能量代谢是动物所有功能活动的基础,应激是机体内环境面对自身及外环境的变动而产生的变化,两者的稳定对维持整个机体的稳定具有重要意义。极限耐力运动需要持续的能量供应,同时也是一种会造成机体过度应激反应的不良应激原,因此极限耐力运动能够很好地将应激与能量代谢联系起来。Ghrelin由于其特殊的脑肠肽特性,可能在应激与能量代谢系统甚至其他系统之间的稳态调节都起到关键因子的作用。应激、能量代谢与Ghrelin水平三者可能互相影响,互相调节,共同维持着机体的稳态。我们认为这些指标能够反映机体的自稳调节能力,可以通过观察这些指标在极限耐力运动中的变化探讨逆灸对身体素质的改善作用。关元穴和命门穴是传统保健穴,联系人体的元气,作用比较基础、广泛,并且在穴性方面比较有代表性（一阴一阳）。选用两穴进行比较,一方面可以体现逆灸的共同效应,一方面又能反映逆灸不同穴位的特异性。目的：通过观察逆灸关元穴和逆灸命门穴对大鼠极限运动耐力的提升作用,探讨逆灸的扶助正气、增强身体素质的效果。通过观察逆灸、力竭和逆灸+力竭对大鼠肝糖原、血乳酸、心肌和血清NOS、 HPA轴应激激素、HPG轴相关激素、下丘脑和血清Ghrelin水平等指标的影响,探讨逆灸对力竭运动大鼠Ghrelin的调节作用及其与能量代谢的相关性,进而探究逆灸提高机体运动耐力的部分机制,进一步揭示逆灸防病保健的科学内涵,或为运动医学提供参考。方法：将48只SD雄性大鼠分为：空白对照组、逆灸关元组、逆灸命门组、力竭对照组、逆灸关元+力竭组和逆灸命门+力竭组。逆灸关元组、逆灸命门组、逆灸关元+力竭组和逆灸命门+力竭组分别行关元穴和命门穴艾条灸法,隔天1次,每次10min,连续10次；空白对照组和力竭对照组与上述组同时人工抓取但不灸,如此连续10次。第20天,即最后一次艾灸24h后,力竭对照组、逆灸关元+力竭组和逆灸命门+力竭组混合后随机抽取进行温水力竭游泳并记录游泳至力竭的时间。力竭即刻与空白对照组、逆灸关元组和逆灸命门组一同处死取材。观察逆灸关元穴和命门穴对大鼠力竭游泳时间的影响。采用生化法检测各组大鼠肝糖原、血乳酸、心肌和血清NOS活性、HPA轴应激激素水平（下丘脑CRH、垂体ACTH血清CORT）、HPG轴相关激素（下丘脑GnRH、血清睾酮）、中枢及外周Ghrelin水平。结果：1力竭时间逆灸关元+力竭组和逆灸命门+力竭组的游泳力竭平均时间都明显长于力竭对照组（P<0.01,P<0.05）；两个逆灸+力竭组之间无显着差异（P>0.05）。2肝糖原含量逆灸关元组和逆灸命门组的肝糖原含量与空白对照组相比没有显着变化（P>0.05）。力竭对照组的肝糖原含量较空白对照组极显着减少（P<0.01）。逆灸关元+力竭组与逆灸命门+力竭组的肝糖原较力竭对照组均有极显着或显着升高（P<0.01,P<0.05）。两个逆灸+力竭组之间无显着差异（P>0.05）。3血乳酸含量逆灸关元组和逆灸命门组的血乳酸含量与空白对照组相比均没有明显变化（P>0.05）。力竭对照组的血乳酸较空白对照组极显着升高（P<0.01）。逆灸关元+力竭组与逆灸命门+力竭组的血乳酸与力竭对照组相比均有极显着的降低（P<0.01）。两个逆灸+力竭组之间无差异（P>0.05）。4心肌和血清NOS活性与空白对照组相比,逆灸关元组和逆灸命门组的心肌NOS活性没有明显变化（P>0.05）,力竭对照组的心肌NOS活性极显着升高（P<0.01）；与力竭对照组比较,逆灸关元+力竭组心肌NOS活性没有明显变化（P>0.05）,逆灸命门+力竭组心肌NOS活性极显着下降（P<0.01）。两个逆灸+力竭组之间有显着统计学差异（P<0.05）。各组血清NOS活性和心肌NOS活性的变化情况一致。5下丘脑CRH含量与空白对照组比较,逆灸关元穴组和逆灸命门穴组大鼠的下丘脑CRH含量均无明显变化（P>0.05）。力竭对照组大鼠的下丘脑CRH含量较空白对照组有极显着升高（P<0.01）。与力竭对照组比较,逆灸关元+力竭组大鼠的下丘脑CRH含量没有变化（P>0.05）；逆灸命门+力竭组大鼠的下丘脑CRH含量极显着降低（P<0.01）。两个逆灸+力竭组之间有极显着统计学差异（P<0.01）。6垂体ACTH含量与空白对照组比较,逆灸关元穴组和逆灸命门穴组大鼠的垂体ACTH含量均无明显变化（P>0.05）。力竭对照组大鼠的垂体ACTH含量较空白对照组有极显着升高（P<0.01）。与力竭对照组比较,逆灸关元+力竭组大鼠的垂体ACTH含量没有变化（P>0.05）；逆灸命门+力竭组大鼠的垂体ACTH含量极显着降低（P<0.01）。两个逆灸+力竭组之间有极显着统计学差异（P<0.01）。7血清CORT含量与空白对照组比较,逆灸关元穴组和逆灸命门穴组大鼠的血清CORT含量均无明显变化（P>0.05）。力竭对照组大鼠的血清CORT含量较空白对照组有极显着升高（P<0.01）。与力竭对照组比较,逆灸关元+力竭组大鼠的血清CORT含量没有变化（P>0.05）；逆灸命门+力竭组大鼠的血清CORT含量极显着降低（P<0.01）。两个逆灸+力竭组之间有极显着统计学差异（P<0.01）。8下丘脑GnRH含量与空白对照组相比,逆灸命门穴组大鼠的下丘脑GnRH含量无明显变化（P>0.05）,力竭对照组大鼠的下丘脑GnRH极显着升高（P<0.01）。与力竭对照组比较,逆灸关元+力竭组大鼠下丘脑GnRH含量没有明显变化（P>0.05）；逆灸命门+力竭组大鼠下丘脑GnRH含量极显着降低（P<0.01）。两个逆灸+力竭组之间的下丘脑GnRH含量有显着统计学差异（P<0.05）。9血清睾酮含量与空白对照组相比,逆灸命门穴组大鼠的血清睾酮含量无明显变化（P>0.05）,力竭对照组大鼠的血清睾酮极显着升高（P<0.01）。与力竭对照组比较,逆灸关元+力竭组大鼠血清睾酮含量没有明显变化（P>0.05）；逆灸命门+力竭组大鼠血清睾酮含量极显着降低（P<0.01）。两个逆灸+力竭组之间的血清睾酮含量差异有显着统计学意义（P<0.05）。10下丘脑和血清Ghrelin含量与空白对照组相比,逆灸命门穴组大鼠的下丘脑Ghrelin含量无明显变化（P>0.05）,力竭对照组大鼠的下丘脑Ghrelin含量极显着升高（P<0.01）。与力竭对照组比较,逆灸关元+力竭组大鼠下丘脑Ghrelin含量没有明显变化（P>0.05）；逆灸命门+力竭组大鼠下丘脑Ghrelin含量极显着降低（P<0.01）。两个逆灸+力竭组之间的下丘脑Ghrelin含量有显着统计学差异（P<0.05）。各组血清Ghrelin和下丘脑Ghrelin含量的变化情况一致。结论：1逆灸对机体是一种适度的应激,对机体的调节作用不会预先在单个生化指标上体现出来。但却能显着改善机体的健康程度,提高机体对不良应激的抵抗力。2力竭运动是一种能够引起机体过度应激反应的不良应激原。力竭导致机体应激轴过度激活,过分调动了能源储备,能量代谢处于紊乱状态。3我们认为“正气”的核心是机体的“自稳调节能力”。逆灸正是通过提高机体的自稳调节能力以扶助正气,进而增强机体素质,提高运动耐力。这可能能够为运动医学提供一定的参考。其具体机制可能与调节应激激素,能量代谢相关因子和Ghrelin水平等有关。4关元穴与命门穴的效应有所不同。关元穴在延长大鼠游泳时间、调节糖原储备和乳酸代谢方面与命门穴无异,但对应激激素、性激素、NOS活性及Ghrelin水平的调节效应不明显,关元穴对这些指标的效应可能具有滞后性,也可能其对大鼠体能的提升作用以及对能量代谢的调节作用是通过其他途径实现的。两穴差别有待我们进一步研究探讨。
冯书芳[9]（2010）在《电针预处理对+Gz暴露大鼠学习和记忆的影响及机制的研究》文中进行了进一步梳理实验一:+Gz对大鼠学习和记忆的影响目的:持续性正加速度（+Gz）可使血液向下半身转移,引起脑组织缺血缺氧,飞行员意识丧失（+G induced loss of consciousness,G-LOC）。动物实验表明, +Gz暴露可引起大鼠认知功能损害,但由于G值参数的不统一,评价学习和记忆的实验方法不同,得出的结论也不一致。因此我们很难评价+Gz暴露后认知功能。故在本实验中,我们结合前期的实验确定的G值参数,采用Morris水迷宫探讨+10Gz/5min暴露对大鼠学习和记忆能力的影响。方法:16只雄性SD大鼠随机分为两组+1Gz/5min对照组（Sham）, +10Gz/5min暴露（n=8）。两组动物于暴露后2h,采用Morris水迷宫进行空间搜索实验和定位航行实验,自动视频分析系统记录大鼠逃避潜伏期（Escape Latency）,游泳距离（Pathlength to the platform）,游泳速度（Swimming Speed）,目标象限所占时间百分比（Percentage of target quadrant）,穿越站台的次数（Number of crossing the platform）。结果:Morris水迷宫实验结果显示:①.定位航行实验中, +Gz组逃避潜伏期及游泳路程于第二﹑第三天较Sham组明显延长。逃避潜伏期及游泳路径[F （1, 14） = 4.98, P<0.01],[F （1, 14） = 5.93, P<0.01],游泳速度两组之间无明显统计差异[F （1, 14） = 1.95, P>0.05 ];②.空间探索实验中,+Gz组大鼠目标象限的百分比较Sham组相比明显缩短（44.15±2.35 V 27.45±1.65, P < 0.01）,跨越原平台位置的次数较对照组相比也明显减少（4.25±0.67 V 1.73±0.75, P < 0.01）。结论:Morris水迷宫实验可以用来作为评价+Gz暴露后学习和记忆的实验方法,该测试方法稳定可靠。+10Gz/5min暴露并不影响大鼠的运动能力,但可以造成大鼠学习和记忆能力障碍。实验二:电针预处理对+Gz暴露大鼠学习和记忆的影响目的:采用电针刺激“百会穴”预处理,探讨电针预处理是否能够改善正加速度（+Gz）造成的大鼠学习和记忆能力损伤。方法:40只雄性SD大鼠随机分为5组（n=8）+1Gz对照组（Sham）、戊巴比妥钠（Con）组、电针预处理组（EA）、+Gz （+Gz）组和电针预处理-+Gz （EA-+Gz）组。除Sham组和+Gz组外其余各组动物每只均腹腔注射（ip） 2%戊巴比妥钠40mg/kg麻醉,连续5d;+1Gz对照组仅给予+1Gz/5min;EA组电针刺激百会穴30 min/d,连续5d,最后一次预处理后24h给予+1Gz/5min;Con组和+Gz暴露组给予+10Gz/5min暴露;EA-+Gz组接受电针刺激百会穴30min/d,连续5d,最后一次预处理后24h给予+10Gz/5min。所有动物于暴露后2h,采用Morris水迷宫实验探讨大鼠的空间学习和记忆的变化情况。视频自动分析系统记录空间搜索实验和定位航行实验,记录如实验一中各项指标。结果:定位航行实验中,五组大鼠逃避潜伏期和路程[F （4, 35） = 5.98, P<0.01],[F (4, 35 = 6.32, P<0.01]。Sham组、EA组无明显统计差异,与上述两组相比,+Gz组及Con组的逃避潜伏期及游泳路径于暴露后第二天及第三天明显延长（P<0.05）,而EA-+Gz组大鼠的逃避潜伏期及游泳路径较+Gz组有所缩短,但仍然长于其余两组（P<0.05）;五组之间游泳速度相似,无统计差异[F （4, 35） = 1.65, P>0.05]。②.空间探索实验中,+Gz组及Con组大鼠的目标象限活动的时间百分比占总时间百分比明显下降,显着低于Sham组（P< 0.01）。EA-+Gz组与+Gz组相比时间有所增加,但仍低于Sham组( （P < 0.05）。+Gz组穿越站台的次数较Sham组也明显减少,EA-+Gz组较+Gz组有所增加,但仍低于Sham组和EA组（P < 0.05）。结论:连续5天,每天30min电针“百会穴”预处理可以在一定程度上改善+Gz暴露所造成的学习和记忆能力障碍;仅给予连续5天电针预处理及戊巴比妥钠不会影响大鼠学习和记忆能力。实验三:电针预处理抑制+Gz暴露后神经元细胞凋亡改善大鼠认知功能障碍目的:探讨凋亡及相关分子在电针预处理改善+Gz暴露后大鼠学习和记忆中的作用。方法:45只雄性SD大鼠随机分为3组（n=15）: +1Gz对照组（Sham）、+Gz组（+Gz）和电针预处理-+Gz暴露组（EA-+Gz）。Sham组仅给予+1Gz/5min作为对照;+Gz组给予+10Gz/5min暴露;EA-+Gz组接受电针刺激百会穴30min/d,连续5d,最后一次预处理后24h给予+10Gz/5min。选取暴露后不同时间点（6h,12h,24h）进行HE和TUNEL染色分析大鼠海马CA1区细胞形态及凋亡情况,并通过检测凋亡共同通路下游分子Caspase-3活性验证神经元凋亡,通过免疫组化,RT-PCR,Western Blotting检测凋亡上游分子P53情况,从而进一步验证形态学观察的可靠性。结果:+Gz暴露后的早期阶段（6-12h）海马锥状神经元细胞主要以水肿为主,胞浆浅染,有极少数细胞核深染的凋亡细胞;暴露后24h,凋亡细胞及形态改变细胞数目增多,主要分布在海马CA1区。给予电针预处理后,可以减少神经元细胞凋亡。除此之外,+10Gz/5min可以诱导海马CA1区Caspase-3活性升高,6h较为显着,并持续到12h。而电针预处理可以减少Caspase-3活性升高。通过免疫组化,RT-PCR, Western Blotting发现电针预处理还可显着减少+Gz暴露引起的P53mRNA及蛋白表达升高。结论:电针预处理可以有效减轻海马神经元病理损害,减少海马CA1区神经元细胞凋亡,减少+Gz暴露后Caspase-3活性增加以及P53mRNA及蛋白表达上调,改善+Gz暴露后大鼠学习和记忆能力。实验四:电针预处理对+Gz暴露后大鼠脑红蛋白表达的影响目的:探讨电针“百会穴”预处理对+Gz暴露后脑红蛋白的表达影响。方法:15只雄性SD大鼠随机分为3组（n=5）: +1Gz对照组（Sham）、+Gz组（+Gz）和电针预处理-+Gz暴露组（EA-+Gz）。Sham组仅给予+1Gz/5min作为对照;+Gz暴露组给予+10Gz/5min暴露;EA-+Gz组接受电针刺激百会穴30min/d,连续5d,最后一次预处理后24h给予+10Gz/5min。所有动物于暴露后24h处死,利用免疫组化,间接免疫荧光,以及Western Blotting等方法观察电针预处理后,+Gz暴露后大鼠脑组织不同区域脑红蛋白（NgB）表达及分布情况。结果:+Gz暴露后24h,顶叶梨状皮质NgB蛋白表达升高,不同区域升高不同;海马NgB表达下降;丘脑NgB表达类似颅顶,但部分细胞形态改变较大。电针预处理可以进一步增强皮层NgB的表达升高,但对海马区域NgB影响不大。结论: +Gz暴露本身能够上调NgB蛋白的表达,而电针预处理进一步升高该蛋白的表达,推测电针通过上调NgB表达减少+Gz暴露引起的脑组织损伤。
施昱丞[10]（2007）在《针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞影响的实验研究》文中指出研究目的:近年来脑血管病的发病率呈现较快的上升趋势,该类疾病的致残率和病死率较高。动脉粥样硬化是脑血管病的基本病因之一,而血脂代谢紊乱可致动脉粥样硬化,这在国内外许多研究报道中已证实;血脂异常与脑血管疾病密切相关。高脂血症是引起和加重动脉粥样硬化的病理基础,是导致脑血管疾病的重要危害因素;高脂血症约占整个脑卒中发病率的1/3,因此,降低血脂对减少脑血管疾病的发病率具有重要的意义。在临床上脑血管病患者大多有高脂血症,而高脂血症患者在脑卒中后,会因原本的血脂代谢紊乱,更加重脑缺血后损伤,比单纯性脑缺血损伤更严重;有效地调节血脂水平就可预防脑血管疾病的发生。因此寻找适当有效的早期干预防治措施是针灸临床与实验研究的重要课题之一。研究方法:（1）首先以高脂饲料喂养大鼠造成高脂血症大鼠后,采用氯化铁（FeCl3）化学诱导大脑中动脉血栓闭塞模型法,将高脂血症大鼠造成高血脂合并脑缺血模型,将动物随机分为八组,电针术前干预及脑缺血后全程治疗;（2）应用生化法观察高血脂大鼠脑缺血后血脂四项变化及针刺的影响;（3）应用神经行为学指标观察治疗前后神经症状的改善情况;应用形态学方法观察缺血侧及海马区大脑病理改变状况及针刺的作用;（4）采用免疫组化方法观察针刺前后大鼠缺血侧及海马区星形胶质细胞表达GFAP、HSP70、S-100β、vimentin等的变化;（5）通过双抗夹心ABC-ELISA法,测定脑匀浆中神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的含量。结果:1.经典高脂配方饲料喂养所致的高血脂模型较为理想,然后采用氯化铁（FeCl3）化学诱导大脑中动脉血栓闭塞模型法,将高脂血症大鼠造成高血脂合并脑缺血模型。以大鼠血脂四项的变化,可以作为大鼠高血脂模型检测的方法之一。2.大鼠在造成脑缺血损伤后,1-2h的神经行为症状均有阳性反应,各脑缺血模型组神经行为症状评分显着高于正常对照组和高血脂模型组,脑缺血模型各组行为症状评分总体高于各针刺组,针刺各组有减少评分趋势。提示针刺可以降低大鼠神经行为症状评分,改善神经功能缺损体征。3.针刺可以通过降低总胆固醇、低密度脂蛋白,升高高密度脂蛋白的含量,有效地调节血脂水平。4.在单纯高血脂大鼠海马区、缺血区,与正常对照组比较,高血脂模型组的GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的阳性细胞个数、面密度、光密度减少,经针刺治疗7d后,与高血脂模型组比较,高血脂治疗组的GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的阳性细胞个数、面密度、光密度增加。而在脑缺血损伤发生后,在大鼠海马区、缺血区GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的阳性细胞个数、面密度、光密度显着增加;经针刺治疗7d后,与脑缺血模型组比较,脑缺血治疗组的GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的阳性细胞个数、面密度、光密度增加。在高脂血症大鼠造成高血脂合并脑缺血模型后,与脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血模型组在大鼠海马区、缺血区GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的阳性细胞个数、面密度、光密度降低。而与高血脂合并脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组、Ⅱ组GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的阳性细胞个数、面密度、光密度升高均有极显着差异, p<0.01;与高血脂合并脑缺血治疗Ⅱ组比较,高血脂合并脑缺血Ⅰ组GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的各项升高均有极显着差异,p<0.01;5.NGF、BDNF及bFGF的含量:脑缺血治疗组>脑缺血模型组>正常对照组;正常对照组>高血脂治疗组>高血脂模型组。与正常对照组比较,高血脂模型组及高血脂合并脑缺血模型组的NGF、BDNF及bFGF含量均极显着低于正常对照组（P<0.01）;与高血脂合并脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组及高血脂合并脑缺血治疗Ⅱ组的NGF及bFGF含量均极显着高于高血脂合并脑缺血模型组（P<0.01） ;高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组的BDNF含量极显着高于高血脂合并脑缺血模型组（P<0.01）,高血脂合并脑缺血治疗Ⅱ组的BDNF含量高于高血脂合并脑缺血模型组,但二者无差异（P>0.05）;高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组及高血脂合并脑缺血治疗Ⅱ组的NGF及BDNF含量均极显着高于高血脂合并脑缺血模型组（P<0.01） ;高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组的bFGF含量高于高血脂合并脑缺血治疗Ⅱ组。结论:1.本实验首先选用经典高脂饲料喂养大鼠6周造成高血脂模型后,接着再用FeCl3化学诱导大脑中动脉血栓闭塞模型法造成局灶性脑缺血,最终二种模型结合造成高血脂合并脑缺血模型。高血脂合并脑缺血模型建立成功,将可为往后的针刺对高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞影响的各种实验研究及探究高血脂合并脑缺血的发病机理提供正确的动物模型。2.脑缺血损伤过程中,高脂血症可加重脑缺血损伤程度;3.针刺可以通过降低总胆固醇、低密度脂蛋白,升高高密度脂蛋白的含量,有效地调节血脂水平。4.持续电针治疗可使星形胶质细胞表达GFAP、HSP70、S-100β、vimentin及大脑中神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的含量,在相当长时间内保持较高水平,有利于受损神经元的修复;电针介入治疗时间点有其重要性,电针早期介入治疗可能是治疗高血脂合并脑缺血疾病的良策,而电针持续增高星形胶质细胞表达GFAP、HSP70、S-100β、vimentin及持续增高大脑中神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的含量,可能是电针抗高血脂合并脑缺血损伤的重要机制之一。
二、不同+G_z暴露后大鼠脑皮层HSP70 mRNA表达水平的变化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、不同+G_z暴露后大鼠脑皮层HSP70 mRNA表达水平的变化（论文提纲范文）
（1）基于冷休克蛋白低温对蛛网膜下腔出血早期和延迟继发性脑损伤的保护及机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 第一节 蛛网膜下腔出血早期脑损伤的临床特征和治疗现状 |
| 1.1.1 蛛网膜下腔出血发病特征,病因和发病率 |
| 1.1.2 蛛网膜下腔出血早期脑损伤治疗现状 |
| 1.1.3 蛛网膜下腔出血并发症及治疗 |
| 第二节 蛛网膜下腔出血后血脑屏障破坏机制和治疗靶点 |
| 1.2.1 蛛网膜下腔出血后血脑屏障破坏的特点 |
| 1.2.2 蛛网膜下腔出血后血脑屏障破坏的机制 |
| 1.2.3 内皮细胞功能障碍或细胞凋亡作为潜在目标 |
| 1.2.4 破坏紧密连接 |
| 第三节 蛛网膜下腔出血早期脑损伤低温保护机制和出血后继发脑损伤炎性反应抑制在临床上的作用 |
| 1.3.1 低温在蛛网膜下腔出血中的脑损伤治疗进展 |
| 1.3.2 CIRP在中枢神经系统疾病的研究进展 |
| 1.3.3 RBM3在中枢神经系统疾病的研究进展 |
| 1.3.4 C23在疾病治疗中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二章 低温影响CIRP表达在蛛网膜下腔出血早期脑损伤中的保护作用研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与方法 |
| 2.2.1 主要实验仪器 |
| 2.2.2 主要实验试剂 |
| 2.2.3 主要试剂的配制方法 |
| 2.2.4 主要实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 大鼠分组建模后死亡率及脑组织形态 |
| 2.3.2 大鼠颞叶皮层CIRP mRNA和蛋白的表达 |
| 2.3.3 大鼠颞叶皮层凋亡相关蛋白的表达(线粒体凋亡途径) |
| 2.3.4 CIRP主要表达在神经元细胞,在星形胶质细胞中只有少部分表达 |
| 2.3.5 凋亡染色(四组大鼠建模后1d,冰冻切片TUNEL染色) |
| 2.3.6 免疫组化DAB染色(四组大鼠建模后1d,石蜡切片) |
| 2.3.7 尼氏染色(四组大鼠建模后3d,石蜡切片Nissl染色) |
| 2.3.8 电镜结果(四组大鼠建模后1d,电镜超薄切片) |
| 2.3.9 转棒实验 |
| 2.3.10 神经元的体外实验中Western blot检测CIRP和Caspase3的表达 |
| 2.3.11 原代培养神经元细胞的凋亡染色 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 治疗性低温对正常大鼠产生强烈的应激损伤,运动功能下降 |
| 2.4.2 治疗性低温减轻了SAH大鼠线粒体途径的细胞凋亡,改善了运动功能 |
| 2.4.3 CIRP是新发现的重要促炎因子,治疗性低温降低了SAH大鼠脑部皮层CIRP的表达,减轻了早期脑损伤 |
| 2.5 结论 |
| 2.6 参考文献 |
| 第三章 低温影响RBM3表达在蛛网膜下腔出血继发性脑损伤中的保护作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与方法 |
| 3.2.1 主要实验仪器 |
| 3.2.2 主要实验试剂 |
| 3.2.3 主要试剂的配制方法 |
| 3.2.4 主要实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 四组大鼠颞叶皮层RBM3蛋白和mRNA的表达 |
| 3.3.2 大鼠(建模三天后)脑组织中RBM3蛋白在神经元细胞和星形胶质细胞的表达 |
| 3.3.3 大鼠(建模三天后)脑组织切片RBM3免疫组化染色 |
| 3.3.4 四组大鼠颞叶皮层凋亡相关蛋白的表达(线粒体凋亡途径) |
| 3.3.5 大鼠(建模三天后)脑组织的细胞凋亡染色 |
| 3.3.6 大鼠(建模七天后)脑组织石蜡切片尼氏染色 |
| 3.3.7 四组大鼠的转棒实验 |
| 3.3.8 神经元细胞的体外培养及实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 3.6 参考文献 |
| 第四章 C23在蛛网膜下腔出血早期脑损伤中保护作用研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与方法 |
| 4.2.1 主要实验仪器 |
| 4.2.2 主要实验试剂 |
| 4.2.3 主要试剂的配制方法 |
| 4.2.4 主要实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 大鼠颞叶皮层CIRP的表达(WB检测,建模后1d) |
| 4.3.2 大鼠颞叶皮层凋亡相关蛋白的表达(线粒体凋亡途径,建模后1d) |
| 4.3.3 大鼠脑组织中IL-6、IL-1β、TNF-a的表达水平(建模后1d) |
| 4.3.4 凋亡染色结果(建模后1d) |
| 4.3.5 免疫组化染色结果(建模后1d) |
| 4.3.6 尼氏染色结果(建模后1d) |
| 4.3.7 转棒实验结果(建模后1d) |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 结论 |
| 4.6 参考文献 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
（2）HSP90 β调节小胶质细胞M1型活化在热射病中枢炎症中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 小胶质细胞活化参与热射病小鼠中枢神经系统炎症进程 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 HSP在热休克激活小胶质细胞中的表达及作用研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 HSP90β在调节热休克小胶质细胞促炎症反应中的作用及信号传导机制研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 干预HSP90β对热射病小鼠中枢神经系统炎症的影响 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述一炎症反应与中枢神经系统疾病 |
| 参考文献 |
| 文献综述二热休克蛋白与炎症调控 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（3）一种新型偏头痛—癫痫共病大鼠模型的建立及机制研究（论文提纲范文）
| 论文创新点 |
| 中文摘要 |
| Abstracts |
| 引言 |
| 第一部分 癫痫对偏头痛的行为学影响 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 偏头痛对癫痫的行为学影响 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 偏头痛-癫痫共病模型鼠血清CGRP和BDNF变化 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第四部分 偏头痛-癫痫共病模型鼠脑组织c-Fos、HSP70和BDNF变化 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第五部分 偏头痛-癫痫共病模型鼠脑组织ASICla、3和CACNA1A变化 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 综述⑴ 偏头痛与抑郁症共病 |
| 综述⑴ 参考文献 |
| 综述⑵ 偏头痛与癫痫共病相关机制及临床特点 |
| 综述(2) 参考文献 |
| 综述⑶ 酸敏感离子通道在神经系统疾病中的作用 |
| 综述⑶ 参考文献 |
| 基金项目 |
| 致谢 |
（4）大鼠组织中HIF1和RPS3在低氧习服中的作用研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.1.1 高原低氧低气压对机体的影响 |
| 1.1.2 间歇性低氧预处理及促高原习服的常用措施 |
| 1.1.3 低氧习服相关基因及其在低氧习服中的作用 |
| 1.2 研究目标和内容 |
| 1.3 技术路线 |
| 参考文献 |
| 第二章 不同低氧刺激对大鼠生理病理的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 试剂及仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物分组及低氧处理 |
| 2.2.2 大鼠血气指标测定 |
| 2.2.3 大鼠生化指标测定 |
| 2.2.4 大鼠血常规指标测定 |
| 2.2.5 大鼠组织固定及病理切片制备 |
| 2.2.6 统计学处理 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 不同低氧刺激对大鼠血气指标的影响 |
| 2.3.2 不同低氧刺激对大鼠生化指标的影响 |
| 2.3.3 不同低氧刺激对大鼠血常规指标的影响 |
| 2.3.4 不同低氧刺激对大鼠脑组织和骨骼肌病理的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 HIF1和RPS3 在低氧习服中对脑组织的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 试剂及仪器 |
| 3.1.3 实验引物设计与合成 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 实验动物分组及低氧处理 |
| 3.2.2 样品取材及处理 |
| 3.2.3 实验前用品处理 |
| 3.2.4 总RNA提取 |
| 3.2.5 RNA纯度和浓度测定 |
| 3.2.6 反转录反应 |
| 3.2.7 Real-Time PCR反应测定基因mRNA相对表达量 |
| 3.2.8 统计学处理 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 各组大鼠脑组织总RNA提取结果 |
| 3.3.2 低氧对大鼠脑组织各基因相对表达量的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 HIF1和RPS3 在低氧习服中对骨骼肌的保护机制 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物及细胞 |
| 4.1.2 试剂及仪器 |
| 4.1.3 实验引物设计与合成 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 实验动物分组及低氧处理 |
| 4.2.2 样品取材及处理 |
| 4.2.3 实验细胞培养 |
| 4.2.4 细胞低氧处理 |
| 4.2.5 Real-TimePCR测定大鼠骨骼肌组织和L6 骨骼肌细胞RPS3 基因mRNA相对表达量 |
| 4.2.6 Western Blot测定L6 骨骼肌细胞Rps3p蛋白相对表达量 |
| 4.2.7 统计学处理 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 各组大鼠骨骼肌组织和L6 骨骼肌细胞总RNA提取结果 |
| 4.3.2 低氧对大鼠骨骼肌各基因相对表达量的影响 |
| 4.3.3 低氧对大鼠L6 骨骼肌细胞RPS3 基因相对表达量的影响 |
| 4.3.4 低氧对大鼠L6 骨骼肌细胞Rps3p蛋白表达的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 结论 |
| 5.1 主要结论 |
| 5.2 研究展望 |
| 硕士期间发表的论文及参与的科研工作 |
| 致谢 |
（5）基于MD-MS技术研究葛根总黄酮及葛根素静脉和鼻腔给药的药动学差异（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 前言 |
| 第一章 葛根的提取纯化工艺研究及其对Bcl-2 mRNA表达的影响 |
| 第一节 葛根提取工艺研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二节 葛根纯化工艺研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三节 葛根纯化放大工艺研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第四节 葛根提取物的化学成分分析 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第五节 葛根素及葛根提取物对Bcl-2 mRNA表达的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二章 微透析及HPLC-MS/MS方法建立 |
| 第一节 微透析探针回收率体外实验研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二节 微透析探针在体回收率研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三节 HPLC-MS/MS方法学的建立 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三章 葛根素不同途径给药大鼠血液及嗅球部位药动学研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第四章 葛根素不同途径给药MCAO模型大鼠血液及嗅球部位药动学研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第五章 葛根总黄酮不同途径给药MCAO模型大鼠血液及嗅球部位葛根素药动学研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第六章 葛根素鼻腔给药入脑机理研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）+G暴露对大鼠肝脏HSP70 mRNA及蛋白表达的影响（论文提纲范文）
| 英文缩略词 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 2 材料 |
| 3 研究方法 |
| 4 结果 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（7）+Gz对大鼠学习记忆功能和脑自噬的影响及中药的防护作用（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 实验一 +GZ暴露致大鼠学习记忆功能障碍及“天芪航力方”的防护作用 |
| 1 引言 |
| 2 材料 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验器材与实验试剂 |
| 3 方法 |
| 3.1 实验分组与给药方案 |
| 3.2 + Gz 暴露方法 |
| 3.3 Y-型迷宫实验 |
| 3.4 旷场分析实验 |
| 3.5 统计分析 |
| 4 结果 |
| 4.1 一般情况 |
| 4.2 + Gz 暴露后大鼠学习记忆能力的改变 |
| 4.3 + Gz 暴露后大鼠行为的改变 |
| 5 讨论 |
| 实验二 + Gz暴露致大鼠脑皮层 Beclin-1和 LC3的表达变化 |
| 1 引言 |
| 2 材料 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验器材 |
| 2.3 实验试剂 |
| 2.4 主要试剂的配制方法 |
| 3 方法 |
| 3.1 实验分组与模型建立 |
| 3.2 + Gz 暴露方法 |
| 3.3 免疫组化检测方法 |
| 3.4 RT-PCR 检测方法 |
| 3.5 Western-Blot 检测方法 |
| 3.6 统计分析 |
| 4 结果 |
| 4.1 + Gz 暴露后大鼠脑皮层 LC3 免疫组织化学实验结果 |
| 4.2 + Gz 暴露后大鼠脑皮层 Beclin-1 和 LC3 mRNA 表达的改变 |
| 4.3 + Gz 暴露后大鼠脑皮层 Beclin-1 和 LC3 蛋白表达的改变 |
| 5 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（8）逆灸对力竭大鼠Ghrelin的影响及能量代谢相关机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 综述一 逆针灸 |
| 一 逆针灸概述 |
| 二 正气与逆针灸 |
| 三 关元穴与命门穴 |
| 四 小结 |
| 综述一参考文献 |
| 综述二 运动耐力 |
| 一 运动耐力的现代研究进展 |
| 二 运动能力与正气 |
| 三 中医药提高运动能力的研究进展 |
| 四 小结 |
| 综述二参考文献 |
| 综述三 应激、能量代谢与Ghrelin |
| 一 应激概述 |
| 二 能量代谢简介 |
| 三 Ghrelin的研究概况 |
| 四 应激、能量代谢与Ghrelin |
| 五 小结 |
| 综述三参考文献 |
| 实验研究 |
| 实验研究前言 |
| 实验技术路线图 |
| 实验一 逆灸关元穴与逆灸命门穴对大鼠力竭游泳时间及体内糖原、乳酸含量的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验二 逆灸关元穴与逆灸命门穴对力竭大鼠心肌和血清NOS活性的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验三 逆灸关元穴与逆灸命门穴对力竭大鼠HPA轴的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验四 逆灸关元穴与逆灸命门穴对力竭大鼠HPG轴的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验五 逆灸关元穴与逆灸命门穴对力竭大鼠中枢及外周Ghrelin水平的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验结果综合讨论 |
| 实验部分参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）电针预处理对+Gz暴露大鼠学习和记忆的影响及机制的研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 正文 |
| 实验一 +GZ 暴露对大鼠学习和记忆的影响 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 电针预处理对+GZ 暴露大鼠学习和记忆的影响 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三 电针预处理通过减少神经元细胞凋亡改善大鼠认知功能障碍 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验四 电针预处理对+GZ 暴露后大鼠脑红蛋白表达影响 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（10）针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 针灸治疗高脂血症的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 针刺对实验性脑缺血损伤作用机理研究 |
| 参考文献 |
| 综述三 星形胶质细胞在脑缺血损伤后作用机理的研究 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 高血脂合并脑缺血大鼠模型的建立 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠治疗前后血脂含量变化的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经行为症状及病理改变的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验四 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞表达GFAP 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验五 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞表达HSP70 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验六 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞表达S-100β的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验七 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞表达vimentin 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验八 针刺干预后高血脂合并脑缺血大鼠NGF、BDNF、bFGF 含量的变化.. |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综合讨论 |
| 1. 高血脂合并脑缺血大鼠模型的建立 |
| 2. 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠治疗前后血脂的影响及机理研究 |
| 3. 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经行为症状及病理改变的影响 |
| 4. 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠海马、缺血区星形胶质细胞表达 GFAP、HSP70、S-100β 及 vimentin 等的影响研究 |
| 5. 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠 NGF、BDNF 及 bFGF 等表达的影响研究 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附图 |
四、不同+G_z暴露后大鼠脑皮层HSP70 mRNA表达水平的变化（论文参考文献）
- [1]基于冷休克蛋白低温对蛛网膜下腔出血早期和延迟继发性脑损伤的保护及机制研究[D]. 代海滨. 南京大学, 2019(01)
- [2]HSP90 β调节小胶质细胞M1型活化在热射病中枢炎症中的作用及机制研究[D]. 何根林. 中国人民解放军陆军军医大学, 2018(03)
- [3]一种新型偏头痛—癫痫共病大鼠模型的建立及机制研究[D]. 樊尚华. 武汉大学, 2017(07)
- [4]大鼠组织中HIF1和RPS3在低氧习服中的作用研究[D]. 祝一飞. 兰州大学, 2016(03)
- [5]基于MD-MS技术研究葛根总黄酮及葛根素静脉和鼻腔给药的药动学差异[D]. 李鹏跃. 北京中医药大学, 2014(04)
- [6]+G暴露对大鼠肝脏HSP70 mRNA及蛋白表达的影响[D]. 朱怀成. 安徽医科大学, 2014(11)
- [7]+Gz对大鼠学习记忆功能和脑自噬的影响及中药的防护作用[D]. 武岳. 第四军医大学, 2013(02)
- [8]逆灸对力竭大鼠Ghrelin的影响及能量代谢相关机制的研究[D]. 孙志芳. 北京中医药大学, 2013(08)
- [9]电针预处理对+Gz暴露大鼠学习和记忆的影响及机制的研究[D]. 冯书芳. 第四军医大学, 2010(06)
- [10]针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞影响的实验研究[D]. 施昱丞. 北京中医药大学, 2007(02)