一、干细胞疗法有望治愈中风（论文文献综述）
李莉,肖贞林[1]（2021）在《修复大脑 造福人类——记暨南大学粤港澳中枢神经再生研究院教授陈功及其团队》文中研究说明大脑是人体最复杂、最精密的器官,交织着无数细密的血管和大约1000亿个神经元细胞,一旦脑疾病发生,神经元死亡后便很难再生,大脑功能也由此受损。脑疾病离我们并不遥远,脑中风、老年痴呆症、帕金森综合征、亨廷顿舞蹈症等都属于脑疾病的范畴。在中国,有几千万病人正承受着脑疾病带来的痛苦,而全世界的患者数量,已达到数亿。然而,即便现代医学水平发展至今,疗效显着的药物却寥寥无几。暨南大学粤港澳中枢神经再生研究院教授陈功带领团队研发的革命性新技术——大脑原位神经再生技术,为脑疾病患者带来了新希望。此项技术是人类攻克脑损伤与脑疾病征途的一个重大突破,其将大脑内应激型胶质细胞,在原位直接转化为功能性神经元,从而恢复患者的行为能力,有望治疗脑损伤、脑中风、老年痴呆症和帕金森病等一系列中枢神经系统疾病。
王筱淇[2]（2021）在《供者来源靶向CD19 CAR-T细胞治疗CD19+急性B淋巴细胞白血病造血干细胞移植后复发的临床研究》文中指出目的:伴随生物工程技术的不断发展,生物治疗在肿瘤治疗领域也开始受到关注,且取得良好的效果,逐渐经成为癌症领域的主要疗法之一。癌症生物治疗有很多种,其中常用如过继性细胞治疗、免疫疫苗、免疫调节剂等,各有一定的适用范围。嵌合抗原受体T细胞（chimeric antigen receptor-T,CAR-T）疗法近年来开始应用于癌症治疗领域,且避免了传统细胞治疗的缺陷,通过基因编辑技术将结合肿瘤表位的CAR受体基因通过转染等的方式导入正常T细胞后,体外扩增后把足够数量的CAR-T细胞回输,通过嵌合抗原识别并清除肿瘤细胞达到杀伤肿瘤细胞的目的。近年来,以免疫细胞为基础的精准靶向治疗取得重大突破,CAR-T相关的临床试验在全世界范围内大规模开展,其中以靶向CD19 CAR-T细胞为代表的第二代CAR-T技术在血液系统肿瘤的治疗中应用最多,治疗难治/复发血液系统B细胞肿瘤有效率可达60-90%。CAR-T细胞根据T细胞来源分为自体、异体、干细胞诱导型,现在较常用的是自体T细胞。而对于移植后复发的患者,因为移植后强烈免疫抑制剂的使用,采集患者自身T细胞进行CAR-T制备,其活性可能受到影响导致白血病杀伤效能降低;同时,对于复发的患者,在采集单个核细胞的时候容易混入急性淋巴细胞白血病细胞可能影响制备效果。而采用HLA相合或者半相合的供者的T细胞则有许多优势,供者来源的T细胞是一种“健康”的T细胞,采集方便,质量可以保障,也是制备CAR-T细胞的重要来源。其优点在于:容易获得,避免肿瘤细胞污染,杀伤肿瘤能力强,尚需要观察的是其安全性,如移植物抗宿主病（graft versus host disease,GVHD）、细胞因子释放综合征（cytokine releasing syndrome,CRS）等。急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblasticc leukemia,ALL）作为一种发病高的恶性血液病,占白血病中的15%,而在急性白血病当中以儿童最为常见,占据总体的80%,成人占30-40%。ALL诱导化疗之后的完全缓解率（complete remission,CR）达70-90%,3-5年无病生存率（disease free survival,DFS）30-60%。造血干细胞移植是目前治愈ALL的主要方法之一,但是,即便进行造血干细胞移植仍有30-60%的患者预后不良,而这也是导致ALL患者死亡的一个重要影响因素。由于各方面因素制约,当前对于难治/复发（Refractory/relapsed,R/R）ALL没有特别有效的治疗方法,目前的方法包括化疗,供者淋巴细胞输注（Donor Lymphocyte Infusion,DLI）和二次移植。但DLI对于ALL的效果并不显着,反而有很大可能诱发GVHD;二次移植的安全性需要考虑,挽救性二次移植的预后也相对不良且花费不菲。研究报道,复发后DLI和二次移植后1年总生存率仅20.74%和23%,因而很有必要探索新的有效治疗方案。供者来源靶向CD19 CAR-T细胞治疗复发ALL有望成为此领域的重点疗法。本研究针对移植后复发的急性B淋巴细胞白血病患者开展供者来源CD19 CAR-T细胞治疗,以期提高缓解率,延长长期生存率。此项研究得到了陆军军医大学伦理委员会的批准,并在中国临床试验注册中心获批临床研究号:Chi CTR-OOC-16008447和Chi CTR-OIC-17012374。伦理委员会批件文号:Chi ECRCT-20160022和XYFY2017-KL033-01。方法:收集2015年7月至2019年3月国内9个移植中心共43例（我中心入组18例）确诊急性B淋巴细胞白血病患者,接受造血干细胞移植（HSCT）治疗且出现复发的患者,给于供者来源靶向CD19 CAR-T细胞治疗,研究主要终点是有效性,次要终点是与安全性和有效性相关的协变量安全性,监测不良反应细胞因子释放综合征（cytokine releasing syndrome,CRS）、免疫效应细胞相关神经毒性综合征（immune effector cell-associated neurotoxicity syndrome,ICANS）、移植物抗宿主病（graft versus host disease,GVHD）,累积复发发生率（cumulative incidence of relapse,CIR）、无事件生存期（event-free survival,EFS）和总生存期等。中位随访时间18个月（范围为6-47个月）。结果:纳入本研究统计的43例CD19表达阳性的HSCT后复发B-ALL患者采用了供者来源CD19 CAR-T细胞治疗,其中29例男性,患者中位年龄24岁（4-60岁）,按照供者类型不同分为接受人类白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLA）全相合供者来源CAR-T细胞治疗的17例,HLA半相合供者来源的26例。复发情况为:微小残留病检测（measurable residual disease,MRD）0.01–5%13例,原始细胞5-50%20例,原始细胞>50%10例患者。从复发到CD19 CAR-T输注中位时间为42天（35-59天）。复发后患者的治疗包括停止免疫抑制（12例）,DLI（7例）,化疗（19例）,DLI联合化疗（5例）。CAR-T细胞输注前预处理方案包括以下三种:方案一:氟达拉滨,30mg/m2/d,持续2-4天,环磷酰胺,200mg/m2/d,持续2天;方案二:氟达拉滨,30mg/m2/d,3天,环磷酰胺,350mg/m2/d,,2天,阿糖胞苷,100mg/m2/d,4天;方案三:环磷酰胺500mg/m2/d,共3天。43例患者中,34例患者接受方案一,5例肿瘤负荷重的年轻患者接受方案二,方案三用于4例老年患者。根据CAR-T细胞共刺激分子的不同,接受CD19–28z CAR-T细胞18例,CD19-BBz CAR-T细胞25例。输注CD19 CAR-T细胞的中位数为1.76×106/kg。34例患者达到完全缓解（79.07%）。1年EFS及生存率是43.33%,达到完全血液学缓解且没有接受第二次移植的患者中1年的EFS和生存率为59.01%,1年CIR为41.0%。不良反应发生率:38例患者发生CRS（88.37%）,其中7例患者CRS≥3级;9例患者发生ICANS（20.93%）,均≤2级;2例患者出现了≤2级急性GVHD（4.65%）。2例患者出现CAR-T细胞治疗相关的严重CRS和多器官衰竭而导致死亡。此外,临床治疗时还易出现发热、粒细胞减少、贫血相关的副反应,而神经系统毒性包括头痛、有患者出现畏光症状,但是没有发生严重的脑水肿。有患者则出现恶心、纳差,肝酶升高（包括转氨酶及乳酸脱氢酶升高）、电解质紊乱、凝血常规异常（活化部分凝血酶原时间activated partial thromboplastin time,APTT延长）之类的毒副作用。CD19 CAR-T细胞输注后第9天数量达到高峰。输注后检测到的CAR-T细胞的中位间隔时间为89天,输注CAR-T细胞后,CAR-T细胞的峰值是4.85×105/L。结论:供者来源靶向CD19 CAR-T细胞是治疗移植后复发CD19+B-ALL的有效手段之一。
谢俊豪[3]（2021）在《人乳牙牙髓干细胞治疗STZ诱导糖尿病大鼠的疗效观察及机制研究》文中研究说明糖尿病（Diabetes Mellitus,DM）是一种全球性慢性代谢性疾病。据国际糖尿病联盟（International Diabetes Federation,IDF）报告显示,到2040年,糖尿病人口预计将从2015年的4.15亿增加到6.42亿。1型糖尿病（Type 1 Diabetes Mellitus,T1DM）的病例以每年3%-5%速度稳步增加,全世界患有T1DM的青年人数（<20岁）超过100万人,按照目前的趋势发展,预计每年将增加10万人。胰岛素终生替代疗法是目前临床T1DM的主要治疗方法,但其不能遏制胰岛功能进行性衰竭,也无法有效阻止T1DM相关并发症的发生和进展。近年来,干细胞疗法有望通过胰岛β细胞替代或再生,保护甚至重建内源性胰岛素分泌系统,从而改善疾病进程与预后,是T1DM治疗领域备受关注的研究方向。而人乳牙牙髓干细胞（stem cells from pulps of human exfoliated deciduous teeth,SHED）的应用逐步显示其潜在优势。SHED较其他间充质干细胞来源丰富、获取简单、增殖能力强、低免疫原性、低致瘤风险,且不存在伦理问题,有更好的免疫调节作用,较好的生物学稳定性和良性特征,较低的凋亡性和衰老性。已证明SHED可诱导为胰岛β细胞,显示其运用于未来T1DM治疗的巨大潜力。目前,其应用于DM的研究正逐步开展,尚未见其治疗T1DM恢复β细胞功能相关基础及临床研究的报道,其发挥作用的机制也有待阐明。一、研究目的（一）通过尾静脉和胰背动脉两种途径移植SHED,探究不同移植途径对SHED治疗STZ诱导DM大鼠疗效的影响。（二）皮下注射胰岛素,维持DM大鼠血糖于不同水平,通过尾静脉多次移植SHED,探究不同血糖水平DM大鼠多次输注SHED疗效差异。（三）通过动物和细胞实验,探究SHED治疗DM的可能机制。二、研究方法180-200g雄性SD大鼠,适应性喂养后,予60mg/kg STZ腹腔注射构建糖尿病模型。（一）SHED经不同输注途径治疗DM大鼠随机选取48只STZ诱导DM大鼠,分为DM对照组（DM组,diabetes mellitus group,n=14）,尾静脉输注组（CV组,Caudal vein infusion SHED group,n=16）,胰背动脉输注组（DPA组,Dorsal pancreatic artery infusion SHED group,n=18）。对照大鼠12只为正常对照组（NC组,Normal control group,n=12）。成模后,CV组和DPA组皮下注射胰岛素降糖治疗,一周左右至目标血糖后开始干细胞治疗,胰岛素降糖治疗持续至治疗结束。每周监测大鼠食量、体重、空腹血糖,每天监测CV组和DPA组大鼠随机血糖,记录胰岛素注射剂量。治疗前及SHED治疗2周后,行口服葡萄糖耐量试验（Oral glucose tolerance test,OGTT）评价糖代谢情况,并留取血清标本检测C肽、糖化血清蛋白（glycated serum protein,GSP）等。干细胞治疗2周后,处死大鼠留取器官进行后续研究。（二）SHED治疗不同血糖水平DM大鼠36只STZ诱导DM大鼠分为DM对照组（diabetes mellitus group,DM组,n=6）,胰岛素治疗组（n=12）和干细胞治疗组（n=18）,其中胰岛素治疗组又分为中糖组（Middle glycemic group,MG组）和低糖组（Low glycemic group,LG组）;干细胞治疗组又分为高糖干细胞组（High glycemic SHED group,HGSHED组）、中糖干细胞组（Middle glycemic SHED group,MGSHED组）和低糖干细胞组（Low glycemic SHED group,LGSHED组）,每组各6只。未造模大鼠为正常对照组（normal control group,NC组,n=6只）。MG组、MGSHED组、LG组和LGSHED组大鼠均给予胰岛素治疗,2周内达到目标血糖后开始干细胞治疗,胰岛素降糖治疗持续至治疗结束。每周监测食量、体重、空腹血糖,每天监测MG组、MGSHED组、LG组和LGSHED组大鼠随机血糖,记录胰岛素注射量。治疗前和第3次输注干细胞2周后,分别对所有大鼠行OGTT试验,评价糖代谢情况,并留取血清检测C肽、GSP等。干细胞治疗5周后,处死大鼠留取器官进行后续研究。（三）SHED治疗DM大鼠机制研究苏木精-伊红染色（hematoxylin and eosin staining,HE染色）观察胰腺病理变化,透射电镜观察胰岛β细胞内部结构变化,免疫组织化学和免疫荧光双标染色探究β/α胰岛细胞比例、胰岛素和胰高血糖素分泌情况。冰冻切片活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）染色及氧化应激相关指标检测评价各组大鼠胰腺氧化应激情况,蛋白质印迹法（Western-Blot,WB）分析胰腺Keap1/Nrf2抗氧化信号通路、p-Erk激活情况和抗凋亡相关蛋白Bcl-2表达情况。（四）SHED改善STZ诱导胰岛RIN-m5F细胞损伤的效应观察及机制探究1、细胞模型的构建予不同浓度STZ（50mM、20 mM、10 mM、7.5 mM、5 mM、2.5 mM、1.25 mM、1 mM）刺激胰岛RIN-m5F细胞不同时间（2h、6h、12h、24h）,行Cell-Counting Kit-8检测,选择抑制率为50%的浓度和时间为后续细胞实验造模条件,在该浓度和时间检测ROS,确定DM氧化应激细胞模型构建成功。2、SHED培养上清液刺激实验按照不同处理分为正常对照组（normal control group,NC组）、SHED培养上清液处理组（culture medium treatment group,CM组）、STZ组、STZ+SHED培养上清液处理组（STZ+CM组）。各组进行ROS荧光染色及流式细胞检测,氧化应激相关指标检测,凋亡流式细胞检测,Ed U-594细胞增殖荧光染色及流式细胞检测,荧光定量PCR确定Keap1、Nrf2、抗凋亡蛋白Bcl-2、凋亡相关蛋白Bax和Caspase-3、增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA）m RNA表达量变化。3、关键作用细胞因子确定及siRNA干扰查阅文献确定HGF为本研究细胞因子,SHED改善STZ诱导的DM胰岛β细胞功能可能与其分泌较高量的HGF密切相关,并对SHED的HGF基因进行siRNA干扰。4、SHED培养上清液与siRNA-HGF SHED培养上清液刺激对比实验按照不同处理分为STZ组、STZ+SHED培养上清液处理组（STZ+CM组）、STZ+siRNA干扰SHED培养上清液处理组（STZ+siRNACM组）及STZ+重组肝细胞生长因子处理组（STZ+HGF组）。各组进行相关检测,包括ROS荧光染色及流式细胞检测,氧化应激相关指标检测,凋亡流式细胞检测,Ed U-594细胞增殖荧光染色及流式细胞检测,荧光定量PCR检测Keap1、Nrf2、抗凋亡蛋白Bcl-2、凋亡相关蛋白Bax和Caspase-3、PCNA m RNA表达量变化。并进一步通过Western Blot探索HGF在细胞模型中对Keap1、Nrf2、p-Erk、p-Akt及凋亡相关蛋白的影响。三、研究结果（一）SHED经不同输注途径治疗DM大鼠干细胞治疗后,CV组和DPA组大鼠每周日均食量明显少于DM组（均P<0.01）,且CV组小于DPA组（P<0.01）。CV组和DPA组大鼠体重明显大于DM组（P<0.01）（P<0.05）,CV组大鼠体重也明显大于DPA组大鼠（P<0.01）。治疗后1周,两组空腹血糖均值相同（15.68mmol/L）,且治疗后2周,两组空腹血糖均明显低于DM组（均P<0.01）。CV组和DPA组日均胰岛素注射量较治疗前（第5周）均明显减少（P=0.001,P=0.001）。治疗后,CV组和DPA组血糖AUC0-120min均明显低于DM组（均P<0.01）。CV组和DPA组大鼠C肽AUC0-120min水平较治疗前明显升高（P=0.004）（P=0.001）,且CV组明显高于DM组和DPA组（均P<0.01）。DM组大鼠GSP水平明显高于NC组、CV组和DPA组（均P<0.01）,但三组之间无明显差异（P>0.05）。CV组大鼠GSP治疗前后无明显变化（P=0.309）,DPA组大鼠GSP较治疗前降低（P=0.001）。（二）SHED治疗不同血糖水平DM大鼠干细胞治疗后,MGSHED组、LG组和LGSHED组大鼠日均食量均明显小于DM组、HGSHED组和MG组（P<0.05）（P<0.01）。MG组、MGSHED组、LG组和LGSHED组大鼠体重均明显大于同期DM组和HGSHED组（均P<0.01）。MG组、MGSHED组、LG组和LGSHED组大鼠空腹血糖均明显低于同期DM组和HGSHED组,且MG组、MGSHED组和LGSHED组空腹血糖与NC组无明显差异（P>0.05）。MG组、MGSHED组、LG组和LGSHED组大鼠日均胰岛素使用量较干细胞治疗前均明显减少（P<0.05）（P<0.01）。治疗后,MG组、MGSHED组、LG组和LGSHED组血糖AUC0-120min较治疗前逐渐降低（均P<0.01）,且均明显低于DM组和HGSHED组（均P<0.01）。DM组C肽AUC0-120min较治疗前明显降低（P<0.01）,而HGSHED组治疗前后无明显变化。DM组、HGSHED组和MG组大鼠C肽AUC0-120min水平均明显低于NC组（P<0.05）（P<0.01）;MG组、MGSHED组、LG组和LGSHED组大鼠C肽AUC0-120min水平明显高于DM组和HGSHED组（P<0.01）。治疗后,MG组、MGSHED组、LG组和LGSHED组GSP水平均明显低于DM组和HGSHED组（均P<0.01）。（三）SHED治疗DM大鼠机制研究1、HE染色,MG组、MGSHED组、LG组和LGSHED组胰岛体积较DM组和HGSHED组明显增大,胰岛细胞明显增多,细胞核染色清晰度明显增加,空泡细胞和玻璃样变减少,炎性细胞浸润明显减少。MGSHED组较MG组、LGSHED组较LG组体积增大,改善更明显。其中,MGSHED组胰岛体积最大,但小于NC组。2、胰腺电镜结果显示,各治疗组胰岛β细胞状态不同程度改善,MGSHED组改善最为明显。胰岛免疫组织化学和荧光双标染色均显示,各治疗组β/α细胞比例增大,胰岛素分泌增多,而胰高血糖素分泌不同程度减少。3、ROS染色,DM组平均荧光强度最大,各治疗组大鼠较DM组平均荧光强度一定程度降低。其中,MGSHED组平均荧光强度最小。4、各治疗组大鼠胰腺总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）不同程度升高,而丙二醛（MDA）、一氧化氮合成酶（NOS）分型尤其是i NOS一定程度降低。5、Western Blot蛋白分析,DM组大鼠胰腺Nrf2蛋白表达较NC组明显减少,各治疗组均有不同程度增加,其中MGSHED组Nrf2蛋白表达增加最多。而DM组大鼠胰腺Keap1蛋白表达较NC组明显增加,各治疗组一定程度减少,MGSHED组Keap1蛋白表达最少。DM组p-Erk、抗凋亡蛋白Bcl-2明显减少,各治疗组一定程度增加,MGSHED组明显大于MG组,LGSHED组明显大于LG组。（四）SHED改善STZ诱导胰岛RIN-m5F细胞损伤的效应观察及机制探究1、STZ浓度为5mM、时间为12h,作为后续细胞实验造模条件。ROS荧光强度明显增强表明氧化应激细胞模型构建成功。2、SHED培养上清液刺激实验STZ+CM组较STZ组ROS平均荧光强度减小,抗氧化相关指标T-AOC、SOD、GSH升高,脂质过氧化产物MDA减少,细胞凋亡率明显降低,增殖率明显升高（p<0.01）。STZ+CM组Nrf2m RNA表达量明显高于STZ组（p<0.01）,而STZ+CM组Keap1表达量明显低于STZ组（p<0.01）。STZ+CM组Bcl-2和PCNA m RNA表达量明显大于STZ组（p<0.01）,而Bax和Caspase-3明显小于STZ组（p<0.01）。3、关键作用细胞因子确定及siRNA干扰siRNA-HGF干扰SHED,HOMO-HGF-2能明显抑制SHED细胞中HGF基因m RNA（抑制率约71.78%）（p<0.01）和蛋白表达。Elisa法检测SHED培养上清液中HGF浓度,siRNA-HGF2组明显低于NC组和siRNA-NC组（p<0.05）（P<0.01）。4、SHED培养上清液与siRNA-HGF SHED培养上清液刺激对比实验STZ+CM组ROS平均荧光强度明显小于STZ+siRNACM组（p<0.01）,STZ+siRNACM组T-AOC明显小于STZ+CM组（p<0.01）,细胞增殖率（p<0.05）、Nrf2（p<0.01）,Bcl-2、PCNA m RNA表达量明显低于STZ+CM组（p<0.01）,而Caspase-3m RNA表达量明显高于STZ+CM组（p<0.01）。5、Western Blot检测确定HGF作用相关蛋白发现,重组HGF能激活Nrf2、p-Erk、p-Akt,下调Keap1,增加抗凋亡蛋白Bcl-2表达,减少凋亡相关蛋白Caspase-3表达。四、研究结论1、不同输注途径及不同血糖水平SHED治疗对DM大鼠症状、糖代谢相关指标及胰岛分泌功能均有不同程度的改善作用。2、不同输注途径移植SHED,输注相同次数,在相同糖代谢水平,观察相同时间,对血糖改善作用类似。3、多次尾静脉移植SHED,对不同血糖水平DM大鼠疗效不同。MGSHED组DM大鼠症状、糖代谢及胰岛功能整体改善效果较好,表明维持血糖平稳控制于合适的水平,更利于SHED体内存活迁移及相关细胞因子分泌,达到更好的治疗效果。4、控制血糖水平后,多次静脉移植SHED,可明显改善糖尿病症状,降低空腹血糖水平、改善胰岛储备与分泌功能、减少胰岛素使用剂量,且三次移植效果优于一次。5、SHED移植治疗DM大鼠,可能启动胰腺内源性氧化应激系统,增强其抗氧化能力,调节氧化应激可能是其发挥作用重要机制之一。最重要的抗氧化信号通路Keap1/Nrf2与调控密切相关。且与p-Erk激活相关的细胞增殖及Bcl-2家族蛋白的活化减轻细胞凋亡相关。6、体外研究发现,SHED减少STZ诱导胰腺RIN-m5F细胞氧化应激、促进其存活与其分泌大量HGF密切相关。可能通过HGF激活p-Erk、p-Akt及Keap1/Nrf2抗氧化信号通路,启动内源性抗氧化途径,从而影响氧化应激相关指标,并减少凋亡蛋白,促进抗凋亡及增殖相关蛋白表达,保护β细胞,从而在抗糖尿病中发挥重要作用。
马懿迪[4]（2021）在《基于间充质干细胞的生物工程补片促进恒河猴阴道壁组织修复能力的组织工程学研究》文中指出研究背景及研究目的盆腔脏器脱垂（Pelvic Organ Prolapse,POP）是一种由于盆底支持结构薄弱导致盆腔器官脱入或脱出阴道的“盆底疝”,该疾病严重影响了当代女性的身心健康并增加了医疗经济负担。在POP的手术治疗当中,植入网片的盆底重建术被广泛应用以降低术后的脱垂复发率。然而,严重的网片相关并发症的发生限制了其广泛应用。2019年美国食品药品监督管理局（Foodand Drug Administration,FDA）已宣布停止使用经阴道植入网片。因此,急需开发POP的新型疗法。近些年,组织工程和再生医学在疾病中的应用获得了广泛关注。尤其是间充质干细胞（Mesenchymal stem cell,MSCs）,由于具有修复受损组织能力并可抑制移植物引起的异物反应,已作为修复POP的有效工具而引起相当大的关注。小肠粘膜下基质补片（Small intestine submucosa,SIS）作为一种生物支架为细胞扩散、迁移和建立细胞与细胞间连接提供了微环境,并可进一步为薄弱的盆底组织提供一定程度的机械支撑。将生物支架的机械和生化性能与MSCs的治疗潜能相结合,以优化对POP的治疗效果,是目前的研究热点。在本研究的第一部分中,我们在体外将MSCs种植在SIS补片上进行培养,形成SIS和MSCs结合的生物工程补片,分别对比了 MSCs在普通培养板上和SIS补片上的生长情况、分化能力以及分泌功能。研究方法1.利用组织块法提取人脐带间充质干细胞（Human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMSCs）,并进行流式鉴定;2.将HUMSCs种植在SIS补片上,利用CellTiter-blue获得细胞的增殖曲线,选择合适的培养时间,利用扫描电镜比较细胞种植前后SIS补片的表面形态;3.分别比较HUMSCs在普通培养板和SIS补片上通过生长因子诱导向平滑肌及成纤维细胞分化的能力;4.比较HUMSCs在普通培养板和SIS补片上转录组差异,并对一些与细胞外基质分泌与重建基因和一些关键的生长因子的mRNA进行了 q-PCR验证。研究结果1.成功分离出HUMSCs并经过流式细胞检测其表达MSC相应的表面标志物;2.将成功分离出的HUMSCs种植在SIS补片上获得生物工程补片,HUMSCs可在SIS补片上良好增殖,并且在第5天时保持较高的增殖速度且种植密度较为适中,扫描电镜图显示HUMSCs及其分泌的细胞外基质填补了 SIS补片表面的裂隙,这为后续的体内植入提供了依据;3.通过额外施加生长因子进行诱导分化,HUMSCs在SIS补片上可分别分化为平滑肌细胞和成纤维细胞并表达相应的表面标志物;4.RNA-seq及q-PCR揭示了与种植在普通培养板上相比,种植在SIS补片上的HUMSCs可分泌较高水平的血管内皮生长因子（p<0.05）,GO富集分析亦说明HUMSCs中上调的基因多集中在与细胞外基质重塑相关通路上,说明HUMSCs种植在SIS补片上经历了细胞外基质重塑的过程。研究结论HUMSCs可在SIS补片上良好增殖,在第5天时种植密度适中;HUMSCs可在SIS补片上维持其向平滑肌及成纤维细胞分化的潜能;与种植在普通培养板相比,种植在SIS补片上改善了 HUMSCs的分泌功能。研究目的我们将第一部分得到的生物工程补片通过经腹骶前固定术的方式植入卵巢切除的恒河猴体内,最大程度的模拟实际临床手术过程,以观察和评估该生物工程补片的生物相容性和对阴道壁组织的修复潜能,为组织工程技术在治疗POP的临床应用转化提供临床前实验数据。研究方法建立恒河猴的卵巢切除模型,分为3组:假手术组、SIS组和SIS+HUMSCs组。分别实施单纯子宫切除、以骶前固定术的方式植入SIS补片或生物工程补片,并在植入后3个月取全长全层阴道组织进行分析:1.Masson染色分析阴道壁各层结构及厚度改变,利用天狼星红染色对阴道壁固有层的Ⅰ/Ⅲ型胶原含量进行比较,利用EVG染色对固有层的弹性纤维进行统计比较;2.利用α-SMA免疫组化对上层肌束的直径（miniferet）进行统计比较;3.利用vWF荧光免疫对阴道壁固有层血管数量进行统计,以比较各组组织血管化程度;4.利用q-PCR对细胞外基质组成及重建基因和一些关键生长因子的mRNA进行了验证;5.利用单轴生物力检测阴道壁的生物力学性能。以上指标均为评估生物工程补片对受损阴道壁组织的修复作用。研究结果1.与假手术组和SIS组相比,我们发现了 SIS+HUMSCs组的阴道壁固有层拥有较高含量的Ⅰ型胶原蛋白（假手术组:p=0.048;SIS组:p=0.027）和与假手术组相比含量较低的Ⅲ型胶原蛋白（p=0.014）,且与假手术组相比弹性纤维含量明显增高（p=0.042）;2.SIS+HUMSCs组的阴道组织有较厚的平滑肌层（假手术组:p=0.02;SIS:p=0.036）,并且与假手术组和SIS组相比产生较为粗壮和规律的肌束（假手术组:p=0.001;SIS 组:p=0.01）;3.与假手术组和SIS组相比,SIS+HUMSCs组阴道壁组织固有层含有较为丰富的血管（假手术组:p=0.001;SIS组:p=0.005）;4.q-PCR结果显示,SIS+HUMSCs组较假手术组和SIS组表达较高水平的平滑肌肌动蛋白（假手术组:p=0.007;SIS组:p=0.008）,血管内皮生长因子表达高于假手术组（p=0.016）;5.单轴生物力学检测显示SIS+HUMSCs组阴道壁组织的弹性模量显着高于假手术组（p=0.031）。研究结论基于MSCs的生物工程补片显着改善了阴道壁组织的平滑肌及结缔组织的结局,并改善了其生物力学性能,表明其可能成为用于促进POP阴道修复的一种新方法。据我们所知,这是首个基于干细胞的生物工程补片用于修复恒河猴受损阴道壁的研究,该研究结果为POP的治疗提供了新思路并为其临床应用转化提供了临床前实验数据。
韩艳煦[5]（2021）在《磁化脐带间充质干细胞外泌体对特发性肺纤维化的治疗研究》文中认为新冠肺炎（COVID-19）在中国的疫情已经得到了控制。通过对已经治愈的患者随访发现,多数患者出院后肺部都有不同程度的纤维化,其中重症患者肺纤维化程度尤为严重,表现为特发性肺纤维化（Idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）的特征。IPF是一种慢性、进行性、纤维化性肺部疾病,病变局限于肺部。间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）具有较高的分化潜能和较低的免疫原性,可以限制肺部炎症的发展,已经应用于多种肺部疾病的治疗,于是本实验沿用MSCs治疗IPF。已有研究证实,MSCs的治疗机制之一是旁分泌,其释放的外泌体（Exosomes,EXOs）是旁分泌因子重要组分之一,部分EXOs可以代替其来源细胞MSCs发挥相似的治疗某些疾病的功能。IPF发病组织局限于肺部,为了增强EXOs治疗的靶向性,我们采用Fe3O4@PDA磁化EXOs,通过施加外部磁场吸引EXOs在靶向部位富集。我们首先鉴定了h UCMSCs以及EXOs的表征确定所分离提纯的物质是h UCMSC-EXOs后,利用TGF-β1诱导腺癌人类肺泡基底上皮细胞A549和博来霉素诱导小鼠构造了IPF体外与体内模型。随后采用分离提取的EXOs对IPF体外和体内模型分别进行了治疗。结果表明,早期输注Fe3O4@PDA磁化的h UCMSC-EXOs可以缓解博来霉素诱导的实验性IPF,在体内模型的治疗效果优于h UCMSC-EXOs。本研究通过磁靶向（Magnetic argeting,MT）技术增强了MSC-EXOs的靶向性,为IPF治疗提供了新策略,为无细胞生物治疗提供新的思路。
白洁琼[6]（2020）在《基于近红外二区探针的间充质干细胞生物学行为研究及应用》文中认为由于近红外第二窗口（NIR-Ⅱ,1000-1700 nm）的生物成像有较高的空间分辨率和组织穿透深度,且受到更少的吸收、散射和自荧光的影响,使得生物成像在NIR-Ⅱ成为指导疾病诊断和治疗有潜力的技术手段。同时干细胞在治疗一些难以治愈的疾病方面有极佳的潜能。之前各种报道都集中在活体内监测移植的干细胞的生物学功能或以BMSCs为载体联合引入抗肿瘤药物的治疗中。然而,关于改善移植干细胞的归巢/嗜性过程的策略的报道仍然很少。本论文针对这些问题,设计合成了一种核/壳结构的介孔二氧化硅包覆共轭聚合物纳米作为一种新型的NIR-Ⅱ探针ZS1000,搭载间充质干细胞（BMSCs）,作为增强NIR-Ⅱ成像中移植的BMSCs的向性/归巢效果的有力工具。更重要的是,借助ZS1000,我们成功地实时监控并可视化了在几种关键病理状况以及影像学指导的肿瘤手术中所经历的BMSCs的动态发展。本文的具体研究主要分为以下两方面内容:（1）我们通过硅烷化设计合成具有NIR-Ⅰ区域发射峰的以共轭聚合物PCPDTBT为核,介孔二氧化硅壳（mSiO2）为中间层。聚乙二醇（PEG）链位为最外层的CP@mSiO2-PEG纳米粒子。高度接枝的PEG链使该纳米粒子良好的水溶性和生物相容性,所合成的CP@mSiO2-PEG具有均匀的球形结构,表面分布着均匀的孔隙,且具有良好的单分散性。纳米粒子的粒径也分布在40-50 nm之间。通过测定在近红外二区纳米粒子的荧光光谱,有较强的荧光信号,荧光拖尾长达1500 nm。这种理想的NIR-Ⅱ探针ZS1000具有良好的光学性质和生物相容性。通过实验证明利用ZS1000加载BMSCs,ZS1000会诱导BMSCs缺氧,BMSCs用ZS1000标记后BMSCs CXCR4的表达增强。通过借助ZS1000,实时监控并可视化了近红外二区指导的肿瘤手术中所经历的BMSCs的动态发展。在新型NIR-Ⅱ探针ZS1000的存在下,BMSCs的归巢效果可以得到加速,负载ZS1000的BMSCs积聚在肿瘤区域而标记有Ag2S的BMSCs并没有清晰勾勒出肿瘤的轮廓,实验证明肿瘤被彻底切除,降低肿瘤的复发率和死亡率。表明这种基于新型NIR-Ⅱ探针的成像策略指导手术比传统方法更有利。（2）干细胞疗法对骨骼修复、软骨缺损再生、皮肤伤口愈合,淋巴疾病治疗以及肝损伤的治疗有很重要的应用前景。本章我们利用上一章节开发的新的NIR-Ⅱ ZS1000荧光探针以BMSCs作为生物载体,因其内在特性可能会诱导低氧状态并证明了NIR-Ⅱ纳米探针的发展对干细胞归巢到靶位点的追踪显着贡献。通过实现了对受伤/缺损组织（包括肝脏,骨骼,软骨,皮肤以及淋巴系统）的更精确的实时监控,这证实了ZS1000独特的理想特性加速了BMSCs的向性效应,加速了近红外纳米探针成像联合BMSCs多功能化治疗从而增强干细胞疗法。而载有Ag2S的BMSCs同样条件下却无法实现对受伤/缺损组织（包括肝脏,骨骼,软骨,皮肤以及淋巴系统）的更精确监测以及对干细胞归巢到靶位点的追踪。这些实验证明新型NIR-Ⅱ探针加载在BMSCs作为增强NIR-Ⅱ成像中移植的BMSCs的向性/归巢效果的有力工具,对受损组织修复重建具有极佳应用前景。
邵亚丽[7]（2020）在《梓醇延迟给药对局灶性永久性脑缺血大鼠的效应及促神经新生作用研究》文中研究指明背景梓醇是中药地黄的主要有效成分之一,既往研究表明,梓醇在脑缺血急性期给药具有神经保护作用,能够改善脑缺血大鼠神经行为学功能,促进缺血区周围血管新生和成体神经干细胞增殖存活,但梓醇延迟给药对于脑缺血大鼠的效应以及对神经干细胞的分化作用暂未研究。基于治疗脑缺血疾病药物匮乏的现状,且目前唯一公认有效的静脉溶栓药物组织型纤溶酶原激活剂（tissue plasminogen activator,t PA）的治疗时间窗狭窄（3-4.5 h）,该时段内极大多数患者不能及时就医。梓醇作为缺血性脑损伤的潜在保护剂,如果在t PA治疗时间窗外能够保护缺血脑区及周围组织,研究其药效学作用及对新生神经干细胞的分化作用,具有重要的科学价值和临床意义。本课题受国家自然科学基金项目（81873034）资助。目的观察梓醇延迟给药对局灶性永久性脑缺血大鼠的神经行为学影响以及神经新生效应和神经干细胞分化作用研究。方法1.SD大鼠随机分为6组,分为假手术组,模型组,造模后6 h首次给药组（5 mg/kg和10 mg/kg）,造模后4 d首次给药组（5 mg/kg和10 mg/kg）,电凝法制备局灶性永久性脑缺血（permanent middle cerebral artery occlusion,p MCAO）模型,给药组腹腔注射梓醇,对照组注射同等剂量生理盐水,每日一次,连续7天。各组大鼠分别于给药后1,4,7,14,21,28天进行体重测量及Bederson评分,神经功能缺损评分（modified neurologic severity score,m NSS）,肌力测试评分（muscle strength）,对神经功能恢复进行评价。2.结合Brd U体内标记细胞增殖,梓醇给药7,14,21,28天后各组大鼠取材,免疫荧光双标Brd U/Nestin检测室管膜下区（subventricular zone,SVZ）神经干细胞增殖存活情况,Brd U/GFAP,Brd U/DCX和Brd U/Neu N荧光双标检测神经干细胞分化为星形胶质细胞及神经元情况;免疫印迹法（Western Blot,WB）检测各组损伤侧SVZ区Nestin/DCX以及损伤侧皮层GFAP和Neu N的蛋白表达。3.由于新生鼠SVZ数量少且难以分离,本研究选择原代培养24 h内新生鼠海马区神经干细胞,进行纯化鉴定,Brd U标记细胞增殖,cck-8检测不同浓度的梓醇对神经干细胞活力的影响,加入分化培养基诱导干细胞分化,免疫荧光MAP-2,GFAP,MBP检测细胞分化,WB检测分化表型相关蛋白的表达。结果1.成功制备局灶性脑缺血模型,梗死体积为9.62±2.43%。行为学实验结果表明,梓醇给药组不同程度促进脑缺血大鼠体重增长,降低脑缺血大鼠Bederson和神经功能缺损评分,提高肌力测试评分,6h,5mg/kg组肌力测评分在14天时有显着差异（P<0.05,vs model）,21天时各组神经功能基本恢复至假手术水平,各给药组间无显着差异（P>0.05,vs sham）。2.梓醇给药后不同时点促进局灶永久性脑缺血大鼠损伤侧SVZ区神经干细胞增殖存活,Brd U/Nestin荧光结果提示脑区成体神经干细胞存在的事实。脑缺血后7天及14天,星形胶质细胞数量显着增加（P<0.05,vs model）,新生神经干细胞与神经元数量与模型组相比显着增加（P<0.05,vs model）,14天时DCX表达增强,6 h,5 mg/kg剂量组与模型组相比有显着差异（P<0.05,vs model）,其余给药组与假手术相比有显着差异（P<0.05,vs sham）,21天时各给药组GFAP表达降低,Nestin,Neu N表达增强,与模型组相比有显着差异（P<0.05,vs model）,与行为学结果基本一致。3.海马神经干细胞培养7 d后可增殖为直径为200μm左右的神经球,神经球呈现Brd U/Nestin免疫双标阳性;cck-8筛选出促进神经干细胞生长的梓醇浓度为0.1,1,10,100μM;用不同浓度的梓醇诱导P3代神经干细胞分化7天,可见MAP-2阳性的神经元,GFAP阳性的星形胶质细胞及MBP阳性表达的少突胶质细胞;10μM梓醇促进NSCs向神经元方向分化,0.1μM促进向星型胶质细胞方向分化。结论1.梓醇延迟给药促进局灶性永久性脑缺血大鼠体重增长,改善神经行为学评分。2.梓醇延迟给药促进局灶性永久性脑缺血大鼠损伤侧SVZ区神经干细胞增殖,促进缺血区域附近神经元存活,减少星形胶质细胞增殖。3.原代培养的海马神经干细胞具有旺盛的自我增殖和多向分化潜能,梓醇对神经干细胞向神经元和胶质细胞分化的作用有剂量效应。
石茜[8]（2020）在《磁性纳米氧化铁药物标记神经干细胞及其在中频低强脉冲磁场下的增殖与分化研究》文中研究说明神经系统疾病的特征是人体中枢神经系统内细胞逐渐死亡缺失,从而导致神经系统功能不可逆转的损坏。药物治疗和手术干预对神经系统疾病的治疗效果有限,而基于干细胞移植的细胞疗法在临床研究方面展现了良好的治疗潜力。为了评价干细胞移植的安全性和治疗效果,需要对移植到体内的干细胞成像并追踪其在体内的迁移和分布。磁性纳米氧化铁药物生物相容性好,已获临床应用许可,具有独特的理化性质,可在磁共振影像（MRI）下对移植的细胞进行实时、无创、活体水平的示踪。因此纳米氧化铁药物标记的神经干细胞在临床上具有重要的研究价值和应用意义。脉冲磁场是已被应用于临床的神经系统调控和治疗手段,适宜频率与强度的脉冲磁场可以影响神经干细胞的增殖与分化。在细胞移植治疗中加入脉冲磁场的刺激调节作用,将有可能进一步增强治疗效果,产生新的治疗技术。因此本论文旨在研究磁性纳米氧化铁药物作为MRI示踪剂标记神经干细胞的方法及安全性,并初步探讨脉冲磁场刺激对干细胞增殖与分化的作用。本论文使用一种已获中国药品监督管理局临床试验许可的超顺磁性纳米氧化铁药物（商品名:瑞存）标记神经干细胞,对标记后的干细胞特性进行了详细表征,确认了瑞存可高效、安全地标记神经干细胞。进一步在外加中频低强脉冲磁场作用下,检测磁性纳米氧化铁药物标记对于神经干细胞的增殖与分化状况的影响。本论文的主要工作内容包括以下两个方面:1、在瑞存与神经干细胞共孵育培养过程中加入多聚赖氨酸,有效促进了神经干细胞对磁性纳米氧化铁的摄取。通过对瑞存标记神经干细胞的细胞形貌、细胞活率、细胞增殖与分化能力的检测,验证了多聚赖氨酸介导瑞存标记干细胞是一种安全高效的细胞标记方法,并具有浓度依赖性。2、研究了瑞存标记的神经干细胞在中频低强度（5k Hz/3.5m T）的脉冲磁场作用下的增殖与向神经元方向分化能力,检测了干细胞在脉冲磁场下的暴露时间对其增殖和分化能力的不同调控作用。证实瑞存标记的神经干细胞在5-10min的脉冲磁场刺激下增殖能力增强,且5min的脉冲磁场刺激对神经干细胞向神经元方向的分化有促进作用。证实脉冲磁场刺激具有调控神经干细胞增殖与分化的潜力。
薛刚[9]（2020）在《基于纵向数据的帕金森病发生发展分子机制解析及药物发现》文中指出帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是一种复杂的神经退行性疾病,虽然病理特征明显,但是病因仍不明确,目前也没有一种方法可以彻底治愈PD。组学技术的快速发展为理解PD发病的分子机制以及发现更加理性的治疗方法提供了机会和挑战。本文基于纵向临床数据、纵向血液RNA-seq数据以及基线血液DNA甲基化数据初步探索了PD的发生和发展机制。首先,本文通过转录组关联分析确认了血液中RNA-seq数据和PD患者临床表型的一致性。通过分析具有PD前驱症状的受试者转变为PD患者的过程,发现分子水平的嗅觉传导异常是PD发生的前兆,鉴别出可以预警PD发生的嗅觉受体OR8D1。进而发现醉茄素A有可能通过促进神经干细胞分化多巴胺能神经元的方式治疗早期的PD患者,并在细胞水平上进行了初步验证。其次,本文基于纵向转录组关联分析发现了325个与PD进展相关的基因。这些基因大多在PD进展的过程中下调表达,并和多巴胺能突触、铁死亡等通路显着相关,进一步根据这些基因推荐了适合治疗重度PD患者的药物。采用x Cell的方法,本研究推测出血液中神经细胞的比例也随着PD进展降低。最后,基于甲基化组关联分析,本文发现DNA甲基化没有及时地反应患者疾病状态,而是表现出一定的延迟性,它们可能通过长期调控基因的表达影响PD的进展。本文所得结果为PD的发病机制提供了一些新见解,对PD的临床诊断和治疗具有一定的应用价值。
刘安立[10]（2020）在《干细胞疗法是与非》文中认为干细胞疗法的确有望治愈某些疾病,但它有没有宣传的那么好呢?8岁的英国男孩杰伊很聪明,但他不幸罹患脑瘫,这导致他不能坐起来,双手也很不方便使用。他不能说话,但他能和家人一起玩耍,并且尽力做好自己力所能及的事。在杰伊还很年幼时,他的母亲茜帕就很想找到能帮助他的疗法。一天晚上,茜帕在互联网上查到一条信息:美国北卡罗来纳州杜克大学正在进行一项干细胞疗法实验,据说该疗法对脑瘫有效。不过,杰伊不符合该实验要求。
二、干细胞疗法有望治愈中风（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、干细胞疗法有望治愈中风（论文提纲范文）
（1）修复大脑 造福人类——记暨南大学粤港澳中枢神经再生研究院教授陈功及其团队（论文提纲范文）
| 大胆做出设想：一段奇妙旅程开启 |
| 寻找转录因子：Neuro D1带来的奇迹 |
| 加快成果转化：科学家走上创业路 |
| 打造一流团队：每个人都身怀绝技 |
| 梦想深植心中：做科研就是快乐人生 |
| 十年一个目标：为未来提前做规划 |
（2）供者来源靶向CD19 CAR-T细胞治疗CD19+急性B淋巴细胞白血病造血干细胞移植后复发的临床研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| abstract |
| 摘要 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 急性淋巴细胞白血病 |
| 1.2 嵌合抗原受体T细胞 |
| 1.3 CD19 靶点 |
| 1.4 自体CAR-T细胞治疗B-ALL |
| 1.5 供者来源CAR-T细胞治疗B-ALL |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 患者入组情况 |
| 3.2 患者接受造血干细胞移植情况 |
| 3.3 造血干细胞移植后复发及复发后治疗 |
| 3.4 CAR-T细胞输注情况 |
| 3.5 CAR-T细胞治疗安全性分析 |
| 3.6 CAR-T细胞治疗有效性分析 |
| 3.7 亚组分析 |
| 3.8 CAR-T细胞动力学 |
| 3.9 炎症因子变化 |
| 第四章 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 CAR-T在造血干细胞移植中的作用探讨 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
（3）人乳牙牙髓干细胞治疗STZ诱导糖尿病大鼠的疗效观察及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 人乳牙牙髓干细胞经不同输注途径治疗糖尿病大鼠的疗效观察 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、统计学分析 |
| 四、实验结果 |
| 五、讨论 |
| 第二部分 人乳牙牙髓干细胞治疗不同血糖水平糖尿病大鼠的疗效观察 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、统计学分析 |
| 四、实验结果 |
| 五、讨论 |
| 第三部分 人乳牙牙髓干细胞治疗糖尿病大鼠机制初探 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、统计学分析 |
| 四、实验结果 |
| 五、讨论 |
| 第四部分 SHED改善STZ诱导胰岛RIN-m5F细胞损伤的效应观察及机制探究 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、统计学分析 |
| 四、实验结果 |
| 五、讨论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 间充质干细胞治疗1型糖尿病的机制及研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文和参加科研工作情况说明 |
| 致谢 |
（4）基于间充质干细胞的生物工程补片促进恒河猴阴道壁组织修复能力的组织工程学研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 间充质干细胞在脱细胞基质补片上生长状态的研究 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验仪器 |
| 2.1.2 实验试剂及材料 |
| 2.1.3 试剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 人脐带间充质干细胞的提取分离 |
| 2.2.2 流式细胞仪鉴定 |
| 2.2.3 HUMSCs的多向分化 |
| 2.2.4 生物工程补片的制作 |
| 2.2.5 细胞活力及增殖的评估 |
| 2.2.6 扫描电镜评估生物工程补片表面特征 |
| 2.2.7 HUMSCs向平滑肌及成纤维细胞的诱导分化 |
| 2.2.8 免疫荧光鉴定 |
| 2.2.9 转录组二代测序 |
| 2.2.10 实时荧光定量PCR (real time PCR) |
| 第3章 结果 |
| 3.1 人脐带间充质干细胞在不同基质上的形态及增殖情况 |
| 3.1.1 应用组织块法分离提取HUMSCs |
| 3.1.2 HUMSCs的流式细胞鉴定 |
| 3.1.3 HUMSCs在不同基质上培养的形态 |
| 3.1.4 HUMSCs在SIS补片上的增长情况 |
| 3.1.5 HUMSCs在SIS补片上附着生长的扫描电镜图 |
| 3.2 人脐带间充质干细胞在SIS补片上向平滑肌细胞及成纤维细胞的分化及鉴定 |
| 3.2.1 HUMSCs向平滑肌细胞诱导后的形态学表现及表面标志物的鉴定 |
| 3.2.2 HUMSCs向成纤维细胞诱导后的形态学表现及表面标志物的鉴定 |
| 3.3 人脐带间充质干细胞在SIS补片上分泌功能的改变 |
| 3.3.1 HUMSCs种植在不同基质上基因表达谱的测序 |
| 3.3.2 HUMSCs种植在不同基质上的基因表达差异 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 基于间充质干细胞的生物工程补片植入卵巢切除恒河猴模型中对阴道组织修复作用的研究 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 手术过程 |
| 2.2.2 取材过程 |
| 2.2.3 石蜡包埋切片 |
| 2.2.4 HE染色 |
| 2.2.5 Masson染色 |
| 2.2.6 天狼星红染色 |
| 2.2.7 免疫组织化学染色 |
| 2.2.8 免疫荧光染色法检测vWF的表达情况 |
| 2.2.9 EVG染色检验弹性蛋白的表达情况 |
| 2.2.10 PCR.检测阴道后壁远段组织中基因表达情况 |
| 2.2.11 单轴生物力学特征检测 |
| 2.2.12 数据统计分析 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 阴道壁各层厚度变化 |
| 3.2 阴道壁胶原成分变化 |
| 3.3 阴道壁平滑肌束变化 |
| 3.4 阴道壁的弹性纤维含量改变 |
| 3.5 阴道壁的血管化改变 |
| 3.6 实时定量PCR对阴道壁的关键基因进行分析 |
| 3.7 阴道壁生物力学性能改变 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 间充质干细胞和支架材料在盆腔脏器脱垂治疗中的应用现状和研究进展 |
| 1. 干细胞在网片植入手术中的作用 |
| 1.1 间充质干细胞促进网片植入后的组织重塑 |
| 1.2 间充质干细胞调节网片植入后的炎症反应 |
| 2. 基质材料对间充质干细胞功能的影响 |
| 2.1 材料的生物化学性能及空间表现对细胞的行为的影响 |
| 2.2 材料的机械性能对干细胞行为的影响 |
| 3. 动物模型 |
| 4. 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 附录一 缩略词表 |
| 附录二 Real time PCR引物列表 |
| 附录三 博士研究生期间发表文章 |
| 致谢 |
（5）磁化脐带间充质干细胞外泌体对特发性肺纤维化的治疗研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 研究背景 |
| 一、特发性肺纤维化的研究进展 |
| (一)新冠肺炎与特发性肺纤维化 |
| (二)IPF概述 |
| (三)IPF的治疗方式 |
| 二、间充质干细胞外泌体概述 |
| (一)MSCs的简介 |
| (二)MSCs与 EXOs |
| 三、磁化MSC-EXOs |
| (一)磁靶向技术 |
| (二)Fe_3O_4纳米颗粒 |
| (三)Fe_3O_4@PDA纳米颗粒磁化间充质干细胞外泌体 |
| 四、研究内容及意义 |
| (一)立题依据 |
| (二)研究内容及意义 |
| 第二部分 实验材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| (一)实验仪器 |
| (二)试剂 |
| (三)抗体 |
| (四)细胞系 |
| (五)实验动物 |
| 二、实验方法 |
| (一)细胞生物学实验方法 |
| (二)分子生物学实验方法 |
| (三)材料提取分析测试方法 |
| (四)IPF模型建立及临床病理实验 |
| (五)统计分析 |
| 第三部分 实验结果与分析 |
| 一、EXOs的鉴定 |
| (一)h UCMSCs的鉴定 |
| (二)EXOs的表征 |
| 二、EXOs对 IPF模型的治疗 |
| (一)IPF体外模型的构建及治疗 |
| (二)IPF体内模型的构建及治疗 |
| 第四部分 讨论 |
| 一、磁化EXOs治疗IPF的安全性 |
| 二、EXOs干预IPF的时期 |
| 三、h UCMSC-EXOs治疗IPF的潜在机制 |
| 结论 |
| 一、主要结论 |
| 二、主要创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（6）基于近红外二区探针的间充质干细胞生物学行为研究及应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 近红外量子点 |
| 1.2.1 在第一个近红外窗口中发射的量子点 |
| 1.2.2 在近红外第二窗口发射的量子点 |
| 1.3 稀土掺杂纳米粒子 |
| 1.3.1 上转换纳米粒子 |
| 1.3.2 NIR发射稀土掺杂的纳米颗粒 |
| 1.4 用于干细胞追踪的有机荧光纳米颗粒 |
| 1.4.1 NIR-Ⅰ发射荧光聚合物纳米颗粒 |
| 1.4.2 NIR-Ⅱ发光有机荧光纳米颗粒 |
| 1.5 其他近红外纳米颗粒 |
| 1.6 立题思想 |
| 1.7 本论文的设计思路 |
| 第二章 近红外二窗探针指导肿瘤切除手术及干细胞治疗 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 原料和试剂 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 实验模型 |
| 2.2.4 实验步骤 |
| 2.2.5 实验方案 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 CP@mSiO_2-PEG的表征 |
| 2.3.2 CP@mSiO_2-PEG的光学性能 |
| 2.3.3 对提取的BMSCs的鉴定 |
| 2.3.4 ZS1000在BMSCs中的内在化及其生物相容性 |
| 2.3.5 ZS1000 增强了BMSCs的迁移能力 |
| 2.3.6 NIR-Ⅱ成像引导手术切除肿瘤 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 干细胞疗法在组织工程中的应用 |
| 3.1 引言 |
| 3.1.1 原料和试剂 |
| 3.1.2 实验设备 |
| 3.1.3 实验模型 |
| 3.1.4 实验步骤 |
| 3.1.5 实验方案 |
| 3.2 体外成像 |
| 3.2.1 骨缺损再生的NIR-Ⅱ成像 |
| 3.2.2 骨软骨损伤再生的NIR-Ⅱ成像 |
| 3.2.3 全层皮肤缺损再生的NIR-Ⅱ成像 |
| 3.2.4 淋巴引流的NIR-Ⅱ成像 |
| 3.2.5 急性肝衰竭的NIR-Ⅱ成像 |
| 3.2.6 在缺氧条件和CXCR4 表达方面,ZS1000对BMSCs的增强作用 |
| 3.3 本章总结 |
| 第四章 总结与展望 |
| 4.1 总结 |
| 4.2 创新点 |
| 4.3 展望 |
| 参考文献 |
| 附录1 攻读硕士学位期间撰写的论文 |
| 附录2 攻读硕士学位期间申请的专利 |
| 附录3 攻读硕士学位期间参加的科研项目 |
| 致谢 |
（7）梓醇延迟给药对局灶性永久性脑缺血大鼠的效应及促神经新生作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第1章 梓醇延迟给药对局灶性脑缺血大鼠神经行为学影响 |
| 引言 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验主要试剂 |
| 1.1.2 实验主要仪器 |
| 1.1.3 主要试剂配制 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 实验动物 |
| 1.2.2 电凝法制备局灶性永久性脑缺血模型 |
| 1.2.3 药物干预 |
| 1.2.4 模型纳入标准 |
| 1.2.5 神经行为学评分 |
| 1.2.6 数据分析 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 电凝法制备局灶性脑缺血模型 |
| 1.3.2 脑缺血损伤模型大鼠神经功能缺失 |
| 1.3.3 梓醇延迟给药对脑缺血大鼠体重的影响 |
| 1.3.4 梓醇延迟给药对脑缺血大鼠Bederson评分的影响 |
| 1.3.5 梓醇延迟给药对脑缺血大鼠肌力的影响 |
| 1.3.6 梓醇延迟给药对脑缺血大鼠mNSS评分的影响 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 第2章 梓醇延迟给药对局灶性脑缺血大鼠缺血侧脑区神经干细胞分化作用研究 |
| 引言 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验主要试剂与材料 |
| 2.1.2 实验主要仪器 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 动物分组及药物干预 |
| 2.2.3 BrdU体内标记 |
| 2.2.4 脑组织取材 |
| 2.2.5 脑组织冰冻切片 |
| 2.2.6 免疫荧光染色 |
| 2.2.7 Western Blot检测相关蛋白表达 |
| 2.2.8 免疫荧光染色图像采集与量化分析 |
| 2.2.9 数据处理 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 梓醇对脑缺血大鼠SVZ区神经干细胞的影响 |
| 2.3.2 梓醇对脑缺血大鼠SVZ区未成熟神经元的影响 |
| 2.3.3 梓醇对脑缺血大鼠缺血周围区成熟神经元的影响 |
| 2.3.4 梓醇对脑缺血大鼠缺血周围区星形胶质细胞的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第3章 梓醇对离体神经干细胞分化作用研究 |
| 引言 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 主要实验试剂及材料 |
| 3.1.2 实验主要仪器 |
| 3.1.3 主要试剂配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 神经干细胞的分离培养 |
| 3.2.2 神经干细胞的传代培养 |
| 3.2.3 免疫荧光鉴定NSCs |
| 3.2.4 免疫荧光鉴定NSCs增殖 |
| 3.2.5 cck-8 检测NSCs细胞活力 |
| 3.2.6 免疫荧光检测细胞分化 |
| 3.2.7 WB检测细胞分化相关蛋白表达 |
| 3.2.8 数据分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 细胞形态观察 |
| 3.3.2 神经干细胞鉴定 |
| 3.3.3 神经干细胞增殖能力测定 |
| 3.3.4 神经干细胞分化能力测定 |
| 3.3.5 梓醇对神经干细胞细胞活力影响 |
| 3.3.6 梓醇对神经干细胞分化作用影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 全文总结 |
| 创新点及意义 |
| 思考与展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 神经干细胞移植治疗中枢神经系统疾病的研究现状 |
| 参考文献 |
| 硕士学位期间科研工作汇报 |
| 致谢 |
| 附:中英文缩略名词对照表 |
（8）磁性纳米氧化铁药物标记神经干细胞及其在中频低强脉冲磁场下的增殖与分化研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 神经干细胞治疗 |
| 1.2.1 体外培养神经干细胞来源 |
| 1.2.2 神经干细胞治疗机制 |
| 1.2.3 神经干细胞治疗临床研究进展 |
| 1.2.4 神经干细胞的体内示踪 |
| 1.3 磁性纳米氧化铁药物 |
| 1.3.1 细胞标记磁性纳米氧化铁药物的方式 |
| 1.3.2 磁性纳米氧化铁药物对细胞的影响 |
| 1.4 脉冲磁场的生物学应用 |
| 1.4.1 脉冲磁场治疗的机制 |
| 1.4.2 脉冲磁场在神经系统疾病治疗的临床应用与研究进展 |
| 1.5 本论文主要研究内容 |
| 第二章 神经干细胞标记磁性纳米氧化铁药物 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 原代神经干细胞的提取与培养 |
| 2.3.2 神经干细胞的表征与鉴定 |
| 2.3.3 神经干细胞标记磁性纳米颗粒 |
| 2.3.4 磁性纳米氧化铁药物标记的神经干细胞普鲁士蓝染色 |
| 2.3.5 磁性纳米氧化铁药物标记的神经干细胞的扫描电子显微镜形貌表征 |
| 2.3.6 透射电子显微镜检测神经干细胞内纳米铁颗粒 |
| 2.3.7 ICP-OES定量检测神经干细胞内化纳米铁的量 |
| 2.3.8 检测磁性纳米氧化铁药物标记的神经干细胞的细胞活率 |
| 2.3.9 磁性纳米氧化铁药物标记的神经干细胞增殖能力的检测 |
| 2.3.10 磁性纳米氧化铁药物标记的神经干细胞分化能力的检测 |
| 2.4 实验结果与讨论 |
| 2.4.1 神经干细胞的形貌表征 |
| 2.4.2 磁性纳米氧化铁药物标记的神经干细胞形貌表征 |
| 2.4.3 神经干细胞内铁含量检测 |
| 2.4.4 磁性纳米氧化铁药物对神经干细胞活率的影响 |
| 2.4.5 磁性纳米氧化铁药物对神经干细胞增殖能力的影响 |
| 2.4.6 磁性纳米氧化铁药物对神经干细胞分化能力的影响 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 磁性纳米氧化铁药物标记的神经干细胞在中频低强脉冲磁场刺激下的增殖与分化研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 脉冲磁场刺激对磁性纳米氧化铁药物标记的神经干细胞的增殖倍数的影响 |
| 3.3.2 脉冲磁场刺激对磁性纳米氧化铁药物标记的神经干细胞的活率的影响 |
| 3.3.3 脉冲磁场刺激对磁性纳米氧化铁药物标记的神经干细胞增殖能力的影响 |
| 3.3.4 脉冲磁场刺激对磁性纳米氧化铁药物标记的神经干细胞凋亡的影响 |
| 3.3.5 脉冲磁场刺激对磁性纳米氧化铁药物标记的神经干细胞分化的影响 |
| 3.4 实验结果与讨论 |
| 3.4.1 磁性纳米氧化铁药物标记的神经干细胞在脉冲磁场下的细胞活率 |
| 3.4.2 磁性纳米氧化铁药物标记的神经干细胞在脉冲磁场刺激下的细胞球尺寸变化 |
| 3.4.3 磁性纳米氧化铁药物标记的神经干细胞在脉冲磁场下的增殖 |
| 3.4.4 磁性纳米氧化铁药物标记的神经干细胞在脉冲磁场下的凋亡 |
| 3.4.5 磁性纳米氧化铁药物标记的神经干细胞在脉冲磁场下的分化状态 |
| 3.4.6 本章小结 |
| 第四章 总结与展望 |
| 4.1 总结 |
| 4.2 展望 |
| 4.2.1 本研究的临床应用转换 |
| 4.2.2 本研究的其他展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（9）基于纵向数据的帕金森病发生发展分子机制解析及药物发现（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 1 前言 |
| 1.1 帕金森病及其治疗概述 |
| 1.1.1 帕金森病简介 |
| 1.1.2 帕金森病的治疗 |
| 1.2 组学数据在帕金森病的应用 |
| 1.2.1 转录组学与帕金森病 |
| 1.2.2 表观遗传学与帕金森病 |
| 1.2.3 基因组学与帕金森病 |
| 1.3 纵向数据研究方法及应用 |
| 1.4 研究目的与策略 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料来源与说明 |
| 2.1.1 人群临床数据与组学数据 |
| 2.1.2 帕金森病药物和靶标收集 |
| 2.1.3 药物测试实验材料 |
| 2.1.3.1 实验动物 |
| 2.1.3.2 主要试剂耗材 |
| 2.1.3.3 主要仪器设备 |
| 2.2 数据预处理 |
| 2.2.1 临床数据预处理 |
| 2.2.2 RNA-seq数据预处理 |
| 2.2.3 DNA甲基化数据预处理 |
| 2.3 研究方法 |
| 2.3.1 转录组关联分析 |
| 2.3.2 鉴别预警基因 |
| 2.3.3 鉴别差异基因 |
| 2.3.4 基于LINCS的小分子药物发现 |
| 2.3.5 醉茄素A促进神经干细胞增殖与分化实验 |
| 2.3.5.1 试剂配制 |
| 2.3.5.2 大鼠胚胎神经干细胞分离培养 |
| 2.3.5.3 大鼠胚胎神经干细胞传代培养 |
| 2.3.5.4 神经干细胞鉴定 |
| 2.3.5.5 CCK8法分析醉茄素A对神经干细胞增殖的影响 |
| 2.3.5.6 醉茄素A对神经干细胞分化的影响 |
| 2.3.5.7 免疫荧光染色检测神经干细胞分化 |
| 2.3.5.8 醉茄素A对神经干细胞向多巴胺能神经元分化的影响 |
| 2.3.5.9 实验数据分析 |
| 2.3.6 基于纵向转录组数据的关联分析 |
| 2.3.7 基于xCell推断细胞富集分数 |
| 2.3.8 甲基化组关联分析 |
| 2.3.9 基因功能分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 血液RNA-seq数据的评估结果 |
| 3.2 帕金森病预警标志物的鉴定结果 |
| 3.3 早期帕金森病的药物发现 |
| 3.4 帕金森病进展基因的鉴定结果 |
| 3.5 推测与帕金森病进展相关的细胞比例变化 |
| 3.6 DNA甲基化与帕金森病进展的关联分析 |
| 4 讨论与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录A 附表 |
| 附录B 附图 |
| 附录C 作者简历及研究成果 |
| 致谢 |
四、干细胞疗法有望治愈中风（论文参考文献）
- [1]修复大脑 造福人类——记暨南大学粤港澳中枢神经再生研究院教授陈功及其团队[J]. 李莉,肖贞林. 科学中国人, 2021(16)
- [2]供者来源靶向CD19 CAR-T细胞治疗CD19+急性B淋巴细胞白血病造血干细胞移植后复发的临床研究[D]. 王筱淇. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021(01)
- [3]人乳牙牙髓干细胞治疗STZ诱导糖尿病大鼠的疗效观察及机制研究[D]. 谢俊豪. 中国人民解放军海军军医大学, 2021(01)
- [4]基于间充质干细胞的生物工程补片促进恒河猴阴道壁组织修复能力的组织工程学研究[D]. 马懿迪. 北京协和医学院, 2021(02)
- [5]磁化脐带间充质干细胞外泌体对特发性肺纤维化的治疗研究[D]. 韩艳煦. 东北师范大学, 2021(12)
- [6]基于近红外二区探针的间充质干细胞生物学行为研究及应用[D]. 白洁琼. 南京邮电大学, 2020(03)
- [7]梓醇延迟给药对局灶性永久性脑缺血大鼠的效应及促神经新生作用研究[D]. 邵亚丽. 西南大学, 2020(05)
- [8]磁性纳米氧化铁药物标记神经干细胞及其在中频低强脉冲磁场下的增殖与分化研究[D]. 石茜. 东南大学, 2020
- [9]基于纵向数据的帕金森病发生发展分子机制解析及药物发现[D]. 薛刚. 华中农业大学, 2020(02)
- [10]干细胞疗法是与非[J]. 刘安立. 大自然探索, 2020(05)