一、试论免疫组织、细胞化学技术及其应用（论文文献综述）
张轩[1]（2021）在《产纳豆激酶和凝乳酶枯草芽孢杆菌的筛选及其在发酵乳中的应用》文中认为枯草芽孢杆菌广泛存在于传统发酵食品内,可产生多种对人体有益的生物活性物质。枯草芽孢杆菌发酵的纳豆因其富含具有抗血栓功能的纳豆激酶（Nattokinase）,作为一种风味食品受到部分消费者的青睐。枯草芽孢杆菌液体发酵生产的纳豆激酶也已被用于抗血栓功能食品或药品的制备。另外,也有报道,口服枯草芽孢杆菌可调节机体肠道菌群和免疫功能,发挥抗炎、抗肿瘤以及延缓衰老等作用。目前,纳豆激酶口服产品的剂型单一,且耐胃酸和肠道缓释能力较差;枯草芽孢杆菌益生菌制剂主要为冻干菌粉,食用人群局限。上述产品的局限性,限制了其应用范围。本研究针对上述产品的不足,利用筛选的同时产生纳豆激酶和凝乳酶的枯草芽孢杆菌菌株,研制了一种新型的枯草芽孢杆菌功能发酵乳和一种纳豆激酶口服缓释制剂,对其制备工艺和相关功能进行了系统研究。主要研究内容和结果如下:首先,用从自然界采集的稻草作为发酵菌种的来源制作纳豆,从自制纳豆浸出液中分离、筛选出产双酶（纤维蛋白溶解酶和凝乳酶）的菌株。通过对菌株形态观察和生化特性检测,结合16S rDNA基因序列测定结果,确定此菌株为枯草芽孢杆菌,命名为B.subtilis JNFE0126。在优化后的培养条件下,该菌株产纳豆激酶活性最高达14512.4IU/mL,产凝乳酶活性最高达875.5 SU/mL,可以满足中性条件下制备凝固型发酵乳的要求。酶抑制剂试验结果表明,发酵液纤溶活性来源于丝氨酸蛋白酶,凝乳活性来源于金属蛋白酶。提取该菌株的DNA,根据基因库中已经报道的纳豆激酶和凝乳酶（金属蛋白酶M4）的基因序列设计引物进行PCR基因调取扩增后测序,结果表明该菌株具有上述两种酶的基因,其序列分别与已经报道的纳豆激酶和金属蛋白酶M4具有高度相似性（同源性分别为99.1%和97.6%）。其次,分别收集B.subtilis JNFE0126纳豆激酶和凝乳酶最高产酶期的发酵液,采用硫酸铵沉淀、离子交换色谱及凝胶过滤色谱分别对纳豆激酶和凝乳酶进行分离纯化,然后用SDS-PAGE检验样品纯度及测定其相对分子质量。结果表明,纯化的纳豆激酶和凝乳酶的相对分子质量分别为27 KD和42 KD左右。纳豆激酶最适温度为40℃,最适pH为7.0,pH 6.0-9.0条件下具有较高的酶活和较好的稳定性。凝乳酶的最适作用温度为55℃,最适pH值为6.5,在pH 6.0-8.0条件下具有较高的酶活,在pH 5-10条件下有较好的的稳定性。在此基础上,研究并优化了B.subtilis JNFE0126发酵鲜牛乳制作凝固型发酵乳的配方和发酵条件,评价了所得产品的品质特性和抗血栓功能。优化的配方和发酵条件为:鲜牛乳,大豆蛋白2%,蔗糖4%,羟丙基二淀粉磷酸酯1.5%,果胶0.1%,藻酸丙二醇酯（PGA）0.1%,发酵温度41℃,发酵时间8 h。得到发酵乳为软嫩的乳白色凝乳块,奶香浓郁,口感爽滑,无明显不良风味。扫描电镜观察表明,凝乳块内部呈现海绵状微观结构,酪蛋白胶束及亚胶束相互交联形成整体的三维结构,胶束间仍然存在大量微细孔隙,这些孔隙起着保持水分的作用。发酵乳的纤溶活性达215.1 U/mL,4℃储藏14天酶活性可保留66%,储藏60天活性仍保留43%;小鼠黑尾试验表明,口服该发酵乳具有显着的体内抗血栓效果。应用Dextran sulfate sodium salt（DSS）诱导性炎症性肠病动物模型评价了上述发酵乳对肠道菌群的调节作用和对炎症性肠病的防治效果,并探讨了其作用机制和实际应用前景。动物疾病症状观察和肠道组织病理分析结果表明,口服B.subtilis JNFE0126发酵乳可明显减轻DSS诱导性炎症性肠病动物的疾病严重程度,减轻动物的肠道粘膜的出血、炎症和溃疡等病理损伤;动物肠道菌群的检测分析和和肠粘膜内炎症相关因子和上皮再生相关蛋白表达水平的测定结果表明,口服B.subtilis JNFE0126菌株发酵乳可调节动物的肠道菌群,增加菌群的多样性,抑制有害菌生长;该发酵乳可抑制肠道粘膜内炎症因子表达水平,提高炎症抑制因子表达水平,因而减轻肠粘膜的炎症性损伤。与此同时,B.subtilis JNFE0126发酵乳可促进肠粘膜上皮干细胞的增殖分化,促进粘膜细胞的粘液蛋白和上皮连接蛋白的表达,加速肠粘膜屏障和上皮屏障的修复,从而抵御有害菌和炎症因子的侵入。最后,研制了一种具有双层壳-核结构（壳聚糖核-纳豆激酶-酪蛋白）的纳豆激酶口服缓释颗粒,并通过动物试验评价其在体内抗血栓作用。采用壳聚糖为核心,京尼平为壳聚糖核-纳豆激酶交联剂,牛乳酪蛋白为颗粒外层保护材料,TG酶为保护层的交联剂,按照分步交联的程序制备纳豆激酶缓释颗粒。用扫描电子显微镜对获得的缓释颗粒进行形态学分析,并使用纳米金交联的IgG作为模型药物验证了酪蛋白保护层的包埋效果,确定其形成了双层壳-核结构。通过体外模拟胃、肠液消化试验测定了该缓释颗粒的释放动力学特征,结果表明该颗粒在胃酸中能有效保护纳豆激酶活性,并在肠液中缓释达12小时。最终对该缓释颗粒进行动物口服试验,动态观察颗粒内纳豆激酶的体内缓释过程及其抗血栓效果。结果表明,上述纳豆激酶口服缓释颗粒具有很强的抗胃酸能力,并在肠道内可缓慢释放出纳豆激酶及其不同大小相对分子质量的具有纤维蛋白溶解活性的降解产物,缓释过程超过12小时。小鼠黑尾模型动物口服该颗粒,可明显抑制小鼠尾部血管内的血栓形成并促进血栓溶解,效果显着优于口服游离纳豆激酶。综上所述,本研究利用筛选的B.subtilis JNFE0126制备的发酵乳具有抗血栓和调节肠道功能的作用,有良好的应用前景。本研究开发的纳豆激酶口服缓释颗粒具有耐胃酸能力和肠道缓释功能,可提高纳豆激酶的口服利用度,有望作为功能食品添加剂用于研制抗血栓功能食品。
邹英鹰[2]（2021）在《美洲大蠊提取物促进小鼠70%肝切除后肝细胞再生的机制研究》文中进行了进一步梳理[目的]肝切除术后肝功能不全（Posthepatectomyliverdysfunction,PLD）仍然是影响患者围手术期恢复及术后生存的重要原因,尤其是接受半肝切除等大范围肝切除术的患者。发掘有效促进肝再生的药物具有重要的临床价值。美洲大蠊提取物（Periplaneta Americana extracts,PAEs）广泛用于促进皮肤创伤修复,疗效显着;此外,PAEs还有保护肝脏、抗炎、保护心脏、抗纤维化等作用。因此,我们推测PAEs可能对肝细胞再生具有促进作用,在本课题中探索:①PAEs能否促进小鼠70%肝部分切除（paritalhepatecotomy,PH）后肝细胞再生;②运用转录组学高通量测序技术探寻PAEs促进小鼠70%PH后肝细胞再生的主要差异基因及信号通路;③研究PAEs促进小鼠70%PH后肝细胞再生的具体作用机制。[方法]1.确定PAEs促进小鼠70%肝切除后肝细胞再生的表型体内实验,将C57/BL6J雄性小鼠,随机分为5组:正常对照组（NC）;70%PH模型+生理盐水对照组（NS）;70%PH模型+PAEs 200 mg/kg/d组（PAEs200）、70%PH模型+PAEs400mg/kg/d 组（PAEs400）、70%PH模型+PAEs 800mg/kg/d组（PAEs800）。按时取小鼠肝组织,计算肝再生率、观察肝脏组织学改变、观察肝组织中Ki67的阳性表达情况。体外实验,培养人正常肝细胞株L02,常规及血清饥饿条件下不同浓度PAEs处理,CCK-8法检测细胞增殖情况。2.运用RNA-seq技术,探寻PAEs促进小鼠PH后肝细胞再生的主要信号通路使用转录组学高通量测序技术检测NC、NS、PAEs400及PAEs800四组小鼠的新鲜肝脏组织,对检测获得的数据进行基因比对、差异表达分析、GO分析、KEGG Pathway分类富集等。3.研究PAEs促进小鼠70%PH后肝细胞再生的具体作用机制使用Western Blotting及免疫组织化学标记检测各组小鼠肝组织中Cyclin D及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关因子的变化;PAEs、MK-2206（AKT抑制剂）、Rapa（mTOR抑制剂）、MK-2206+PAEs、Rapa+PAEs处理血清饥饿的肝细胞L02,CCK8检测细胞增殖情况;流式方法检测细胞周期变化;q-PCR、Western Blotting和免疫荧光检测各组肝细胞中PI3K/Akt/mTOR信号通路相关因子的具体变化。[结果]1.PAEs通过促进肝细胞增殖促进小鼠70%肝切除后肝再生（1）体内实验研究结果小鼠70%PH后48h剩余肝组织体积增大,肝脏再生。中、高剂量PAEs实验组与NS组之间肝再生率的差异具有显着性（P<0.05）,具有统计学意义。组织学观察,发现:NC组结构清晰,肝细胞排列整齐,大小较为一致,极少数肝细胞为双核;NS组出现部分肝细胞水肿、肝细胞排列局部紊乱,出现较多的核分裂像,双核肝细胞数量略增多;PAEs干预后,尽管核分裂像显着减少,但随剂量增加,PAEs组双核肝细胞的数量逐渐增多,尤其以PAEs800组最为显着。PAEs各组肝组织中Ki67阳性率较NS组增高,尤其以PAEs800mg组最为显着。（2）体外实验研究结果体外实验显示,中剂量PAEs可有效促进L02细胞增殖（P<0.01）,而高剂量PAEs有细胞毒性。2.运用RNA-seq技术,探寻PAEs促进小鼠PH后肝细胞增殖的主要信号通路通过转录组学高通量测序技术检测到11,986个转录本,在PAEs400/NS和PAEs800/NS的显着差异基因交集中共有的1,092个已报告的基因,进行KEGG Pathway分类后,对Cellular Processes筛选得到的153个基因进行KEGG Pathway富集（Q value<0.05）,发现PAEs可能通过复杂的信号网络发挥作用,其中变化最为显着、涉及基因改变最多的是PI3K-AKT信号通路。3.研究PAEs促进小鼠70%PH后肝细胞再生的具体作用机制（1）体内实验研究结果肝脏组织的Western Blotting和免疫组织化学标记检测结果显示:Cyclin D、AKT、PI3K表达量在NS组较NC组显着增高;PAEs干预后,Cyclin D、AKT、PI3K表达量在PAEs组较NS组显着降低;肝脏的p-S6K、p-mTOR表达量在NS组较NC组显着增高;PAEs干预后,p-S6K、p-mTOR表达量在PAEs400/PAEs800组较NS组显着降低。（2）体外实验研究结果①CCK8检测细胞增殖情况:PAEs能够促进和加速肝细胞增殖,逆转MK-2206、Rapa 对 PI3K/Akt/mTOR 信号通路的抑制。②q-PCR检测结果:mRNA水平研究发现PAEs组的AKT、mTOR、cyclinD、Ki67的mRNA转录水平较血清饥饿组（SS组）增加,运用MK-2206或Rapa后,AKT、mTOR、cyclinD、Ki67的mRNA转录水平显着下降,两种抑制剂分别联合PAEs使用后,能够部分逆转由MK-2206或Rapa导致的AKT、mTOR、cyclinD、Ki67 的 mRNA 转录下降。③Western Blotting和免疫荧光检测结果:蛋白水平研究发现PAEs组肝细胞的 Cyclin D、Ki67、p-AKT（S473）、p-AKT（T308）、PI3K、p-mTOR（S2448）、p-4E-BP1（T37/46）、p-S6K的蛋白表达水平较SS组增加,运用抑制剂MK-2206或Rapa后,上述因子的蛋白表达水平出现不同程度的下降,两种抑制剂分别联合PAEs使用后,能够不同程度逆转由MK-2206或Rapa导致的部分因子的蛋白水平下降。④流式细胞仪检测细胞周期变化:发现PAEs能够通过影响体外L02细胞G1期向S期转化促进细胞增殖。[结论]1.小鼠70%PH术前即开始持续一段时间使用一定剂量的PAEs,可有效促进术后小鼠肝细胞再生。2.PAEs可通过复杂的网络加速小鼠70%PH后肝细胞增殖并促进肝脏再生;其中PI3K/AKT/mTOR信号通路是PAEs调节肝细胞周期,促进肝细胞增殖从而加速小鼠肝细胞再生进程的最主要信号通路之一。
高德煜[3]（2021）在《转基因CX3CR1-GFP小鼠活体成像评价生物材料的初步研究》文中指出生物材料应用于修复重建人体组织器官,可以恢复和增进人体生理功能。目前主要采用的体内植入实验,通过组织病理学实验结果进行生物材料的相容性评价,耗时长,实验繁琐并且存在评价者的主观因素。小动物活体成像技术具有操作简便,耗时短,试验结果客观等优点,可以在细胞、分子水平上对生物学行为进行长期的跟踪观察,已经广泛的应用在医学、生命科学等领域,但是未见在医疗器械生物材料生物相容性评价方面应用。研究目的:探究绿色荧光蛋白标记转基因小鼠的活体成像法评价生物材料的生物相容性的可行性。主要研究内容如下:1、研究方法:通过传统方法对脱细胞真皮和涤纶补片的生物相容性进行评价:选用c57小鼠为试验动物,按照国标GB16886.6将脱细胞真皮和涤纶补片分别进行皮下植入,并通过组织病理学HE染色和免疫组化对生物材料进行生物相容性评价。研究结果:显示脱细胞真皮材料炎症反应较轻并且持续时间较短,前两周存在较多巨噬细胞,涤纶补片炎症反应较重并且持续时间较长,巨噬细胞第一周至第四周均较多。研究方法:采用活体成像技术评价生物材料生物相容性方法的可行性:选用荧光标记CX3CR1-GFP转基因小鼠为试验动物,分别将脱细胞真皮和涤纶补片进行皮下植入,以小动物活体成像仪进行检测,同时进行组织病理实验冰冻切片进行验证,并将结果与HE染色和免疫组化结果进行对比。研究结果:活体成像结果与HE染色和免疫组化结果基本一致。2、研究结论:通过活体成像技术对生物材料进行生物相容性评价具有可行性。本文研究表明,利用荧光标记的转基因小鼠活体成像法可以作为评价生物材料的新方法,值得进一步研究和推广。
米晓钰[4]（2020）在《Ngb和HIF-1α在牦牛与黄牛不同脑组织表达与分布的比较研究》文中指出脊椎动物中枢神经系统对低氧具有高度的敏感性,作为对低氧环境具有长期适应性的物种——牦牛（Bos grunniens）,其中枢神经系统,特别是脑,也必然有其特殊的适应机制。脑红蛋白（Neuroglobin,Ngb）和缺氧诱导因子-1α（Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）,是两种已被证实与机体高海拔缺氧适应相关的调节蛋白,主要在脊椎动物神经系统中高表达,并且,已有研究发现在缺血缺氧性脑损伤中,HIF-1α可促进Ngb生成。目前,对于高寒低氧环境下牦牛不同脑组织中Ngb和HIF-1α的表达与分布特征仍不清楚。因此,为深入探究牦牛不同脑组织在适应高寒低氧环境过程中Ngb和HIF-1α的表达及相互作用关系,本研究利用qRT-PCR、Western blot及免疫组织化学技术,对牦牛脑不同区域组织中Ngb和HIF-1α的表达与分布特征进行研究,同时与平原黄牛作比较。具体研究结果如下:1)在牦牛和黄牛端脑不同组织中,Ngb和HIF-1αmRNA和蛋白均有不同程度的阳性表达,且表达趋势基本一致,其中,顶叶皮质Ngb和HIF-1αmRNA和蛋白表达量最高（P<0.05）。相比较而言,牦牛端脑不同组织Ngb mRNA表达量均高于黄牛;HIF-1αmRNA的表达量除在顶叶皮质中牦牛表达量较黄牛高外,其余区域与黄牛基本一致。Ngb蛋白在牦牛端脑的表达量除梨状叶外其余区域均高于黄牛;HIF-1α蛋白在黄牛的表达量除扣带回外其余区域均高于牦牛。免疫组织化学结果显示,Ngb和HIF-1α在牦牛和黄牛端脑不同区域的分布特征相似,主要位于端脑大部分区域的神经元胞质或少部分神经胶质细胞中,阴性对照均无表达。2)在牦牛和黄牛间脑不同组织中,Ngb和HIF-1αmRNA与蛋白均有不同程度的阳性表达,且表达量趋势基本一致,其中,牦牛间脑Ngb和HIF-1αmRNA均在脑垂体和松果体中表达量最高（P<0.05）;黄牛间脑Ngb和HIF-1αmRNA均在脑垂体中表达量最高（P<0.05）。相比较而言,Ngb与HIF-1αmRNA在牦牛脑垂体与松果体中的表达量较黄牛高,其余区域表达量基本一致。牦牛间脑Ngb蛋白在脑垂体和下丘脑表达量最高（P<0.05）,HIF-1α蛋白仅在脑垂体表达量最高（P<0.05）;黄牛脑垂体中Ngb和HIF-1α蛋白的表达量最高（P<0.05）。相比较而言,Ngb和HIF-1α蛋白在牦牛间脑各区域表达量均高于黄牛。免疫组织化学结果显示,Ngb和HIF-1α在牦牛和黄牛间脑不同区域的分布特征相似,主要位于间脑各区域的神经元胞质中,阴性对照均无表达。3)在牦牛和黄牛菱脑不同组织中,Ngb和HIF-1αmRNA和蛋白均有不同程度的阳性表达,且表达趋势基本一致,其中,牦牛菱脑Ngb和HIF-1αmRNA和蛋白均在蚓前叶表达量最高（P<0.05）;黄牛菱脑Ngb mRNA和蛋白仅在蚓前叶表达量最高（P<0.05）,而HIF-1αmRNA和蛋白在蚓前叶与小脑半球皮质表达量均为最高（P<0.05）。相比较而言,Ngb mRNA在牦牛小脑半球白质中的表达量较黄牛低,其余区域表达量基本一致;HIF-1αmRNA在牦牛小脑半球白质、蚓后叶和蚓小叶中的表达量较黄牛低,其余区域表达量基本一致。Ngb蛋白在牦牛小脑半球白质和蚓小叶中的表达量较黄牛低,其余区域表达量牦牛高于黄牛,HIF-1α蛋白在牦牛菱脑中的表达量均高于黄牛。免疫组织化学结果表明,Ngb和HIF-1α在牦牛和黄牛菱脑不同区域的分布特征相似,主要位于神经元胞质,阴性对照均无表达。4)牦牛端脑、间脑、菱脑大部分区域的Ngb和HIF-1α在基因及蛋白水平的表达趋势一致,呈正相关,但在个别区域,存在基因和蛋白表达不一致的现象;而黄牛端脑、间脑、菱脑各区域组织中Ngb和HIF-1α在基因和蛋白水平的表达趋势均一致。上述研究结果表明,牦牛和黄牛不同脑组织中,均有Ngb和HIF-1α基因与蛋白不同程度的阳性表达,说明了二者进化的保守性。其中,Ngb和HIF-1α基因和蛋白分别在牦牛与黄牛顶叶皮质、脑垂体、蚓前叶的表达量最高,说明三者对缺氧具有较高的敏感性和耐受性;牦牛与黄牛脑组织大部分区域中,Ngb和HIF-1α的表达与分布规律基本一致,提示HIF-1α可能对Ngb存在直接或间接的协同作用,以提高牦牛与黄牛脑对低氧环境的适应能力。相较于黄牛,牦牛脑组织某些特定区域存在Ngb和HIF-1α基因与蛋白水平表达差异的现象,分析其原因可能与牦牛脑组织相应区域Ngb和HIF-1α所执行功能的不同以及机体在长期适应高寒低氧环境过程中的优先选择性表达有关联,其具体机制尚有待进一步试验验证。
朱红振[5]（2020）在《猪鼻支原体与猪肺炎支原体的鉴别诊断及致病性比较的研究》文中研究表明猪鼻支原体（Mycoplasma hyorhinis,Mhr）和猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp）是引起猪支原体肺炎的重要病原体,能与多种病原体及环境因素协同作用,引起猪呼吸道疾病综合征（Porcine respiratory disease complex,PRDC）,导致病死率升高,给养猪业造成巨大经济损失。由Mhr和Mhp感染引起的疾病诊断,一般通过该病的流行特点、临床症状和剖检病理作出初诊,确诊需进行实验室检查。鉴于对Mhr与Mhp感染引起的疾病尚未研制出有效的鉴别诊断技术,此外两种病原感染猪后导致的致病性差异也未见比较性研究。本研究旨在建立一种能够鉴别这两种病原体的实验室诊断方法,同时对其致病性差异进行比较研究,为有效防控这两种病原引起的疾病提供技术手段。第一、以Mhr全菌体作为免疫原,采用杂交瘤技术获得了1株能稳定分泌抗Mhr菌体的特异性单克隆抗体（mAb）1C4,腹水经亲和层析纯化后标记辣根过氧化物酶（HRP）,建立了一种能够检测Mhr抗原的ELISA方法,该方法批内、批间变异系数均小于6%,抗原最低检出量为25 ng。第二、P37蛋白是Mhr重要的膜蛋白,在Mhr感染宿主过程中其重要作用,利用杆状病毒表达系统成功表达了重组的P37蛋白,制备了抗Mhr的mAb,IHC检测结果表明制备的mAb可用于感染肺组织中Mhr抗原的检测,并利用获得的mAb通过截短蛋白表达的方法识别了P37蛋白的最小B细胞线性核心表位为206KIKKAWNDKDWNTFRNF222,该表位由2个α螺旋和1个无规卷曲组成。第三、为了建立Mhr和Mhp抗原的鉴别诊断方法,采用Mhp全菌体及重组表达的Mhp-P46蛋白作为免疫原,制备了抗Mhp全菌体的mAb,对收集的腹水纯化后进行HRP标记,建立了一种能够检测Mhp抗原的IHC染色方法,该方法对肺组织中的Mhp抗原具有良好的反应原性,对已知的Mhr、猪圆环病毒2型（PCV2）抗原检测无交叉反应,可为Mhr与Mhp抗原的体内鉴别诊断和研究这两种病原的致病性差异提供可靠的技术手段。第四、为了调查Mhr和Mhp的致病性差异,采用Mhr-DL菌株和Mhp-HLJ菌株分别接种试验猪,通过临床表现、血清抗体检测、解剖病理及组织病理变化等指标进行了比较研究。病理剖检结果表明,Mhr接种组仔猪均出现多发性浆膜炎,胸腔内出现粘连;Mhp接种组仔猪肺组织出现不同程度的肉样变,未见纤维素性渗出物。免疫组化检测结果表明,Mhr和Mhp抗原在肺组织中分布不同,Mhr感染肺组织呈弥散性分布,而Mhp感染主要聚集在支气管粘膜表面。在实验条件下Mhr和Mhp接种猪均能引起不同的临床表现和病理变化,为Mhr和Mhp的致病机制研究提供了科学依据。
黄兆欢[6]（2020）在《树鼩脑内单胺能系统解剖图谱的研究》文中认为日间活动的树鼩（Tupaia belangeri chinensis）属攀鼩目（Scandentia）树鼩科（Tupaiidae）,外形似松鼠,广泛分布在南亚、东南亚和我国西南地区。系统发生进化表明,树鼩与灵长类的亲缘关系最近。树鼩在解剖结构、神经发育和心理应激模式等生理特征方面也与包括人在内的灵长类动物高度相似。最近,树鼩逐渐成为研究人类疾病的可用替代模型。单胺能系统（包括多巴胺和5-羟色胺）在调节情绪、认知、运动核神经内分泌等方面起着非常重要的作用。本文的主要研究目的是描述树鼩大脑中多巴胺能（以酪氨酸羟化酶（TH）为代表的）和5羟色胺（5-HT）能系统的解剖结构。主要的研究结果如下:利用免疫组织化学技术首次详细地描述了树鼩下丘脑中TH免疫反应性（-ir）神经元的分布情况。结果发现,TH-ir神经元广泛分布于树鼩下丘脑的诸多脑区,其大部分位于下丘脑的室旁核（PVN）和视上核（SON）。TH-ir神经元在人脑中的分布于树鼩中类似;相反地,在正常大鼠的PVN和SON很少能观察到TH-ir神经元分布。在树鼩PVN和SON中我们观察到大量的TH-ir神经元与加压素（AVP）共定位,而催产素和促肾上腺皮质激素释放激素未与TH共定位。而且在下丘脑其他脑区也观察到TH与AVP的共定位。此外,树鼩PVN和SON中的TH-ir神经元表达了其他多巴胺能神经元的标记（芳香族L-氨基酸脱羧酶和2型囊泡单胺转运体）,进一步支持PVN和SON中的TH-ir神经元为儿茶酚胺能神经元。这些结果详细描述了树鼩下丘脑中TH-ir神经元的分布,并证明了该酶在物种间的分布差异。通过使用5-HT抗体进行免疫组织化学研究,对含5-HT的神经元及其纤维在树鼩大脑中的分布进行了全面详细的描述。结果显示大量的5-HT-ir细胞集中定位在中缝背核和正中中缝核中,而在尾线性核、背侧背盖核、内侧丘系、内侧纵束、中缝大核、中缝隐核和中缝苍白核有少量至中等量的5-HT-ir细胞分布。仅有很稀少的核周体散布在腹侧、外侧以及背侧网状结构中。我们也观察到5-HT-ir细胞呈圆形、卵圆形、纺锤形和多极形态,大小各异,染色强度也不均一,且一些细胞存在较长的突起。根据免疫反应性纤维的大小和形态,可分为非曲张、小曲张和大曲张性纤维。曲张性纤维在树鼩大脑灰质的几乎每个区域都有分布。皮层中免疫反应性纤维密度的变化一般遵循解剖学上的分区,在一些核团内也能观察到,尤其是在具有层状结构的核团中。在嗅结节、视前区、脑室周围灰质、脚间核、蓝斑、面神经核、孤束核以及下橄榄腹外侧等区域包含极其丰富的5-HT-ir 神经纤维丛。这些数据首次详细描绘了树鼩大脑中 5-HT 能系统的分布图谱。总之,我们的研究首次提供了多巴胺能和5-HT能在树鼩大脑中的解剖图谱,为研究单胺能递质调控树鼩的各种生理功能和行为提供神经生物学基础。
钟若男[7]（2020）在《胭脂鱼CD4单克隆抗体的制备及其应用研究》文中认为胭脂鱼（Myxocyprinus asiaticus）,属硬骨鱼纲（Osteichthyes）、鲤形目（Cypriniformes）、胭脂鱼科（Catostomidae）,是我国特有的淡水鱼类,主要分布于长江和闽江。因其体型别致、体色艳丽、肉质鲜美,兼具观赏价值和经济价值。近年来,由于胭脂鱼自身繁殖率低,同时受环境污染、过度捕捞等人类活动的影响,从而导致其数量逐渐减少。人工繁殖不失为保护胭脂鱼种群的一种有效途径,但在养殖过程中,病害、水质等问题的存在也会造成胭脂鱼的高死亡率,不利于胭脂鱼养殖业的健康发展。本研究基于对鱼类免疫系统结构和功能的了解,试图对胭脂鱼T细胞的表面标志分子进行研究,希望为解决胭脂鱼水产养殖过程中所存在的病害防治问题提供理论依据。免疫系统是机体执行免疫应答及免疫功能的重要系统,鱼类作为最早具有初步完整免疫系统的低等脊椎动物,在免疫系统进化历程研究中占有重要地位。所以,对鱼类免疫系统进行研究可为进一步了解脊椎动物免疫系统的进化规律提供理论基础。免疫系统分为固有免疫和适应性免疫,而适应性免疫又包括体液免疫和细胞免疫,其中细胞免疫是以T淋巴细胞介导的免疫应答。CD4作为重要的T淋巴细胞表面标志分子,可与MHCⅡ类分子结合形成抗原-MHCⅡ分子复合物,从而参与体液免疫和引起炎症反应。然而,目前关于T细胞表面标志分子在胭脂鱼的研究中还未见报道。本文通过对转录组测序数据进行分析获得了胭脂鱼的CD4序列,开放式阅读框长1443bp,编码481个氨基酸,预测的蛋白质分子量约为53.89kDa,等电点为8.88。氨基酸多重序列比对结果显示,与其他物种相似,胭脂鱼CD4分子由含有3个Ig结构域和1个Ig-like结构域的胞外区、跨膜区和包含保守CXC基序的胞质区组成。同时,该CD4分子的胞外区存在WTC基序、N-糖基化位点和形成二硫键的半胱氨酸残基等保守位点和基序。系统进化树分析表明,胭脂鱼CD4与草鱼、鲤鱼、鲫鱼和斑马鱼的亲缘关系较近。胭脂鱼发育时期半定量RT-PCR结果表明:CD4的转录本在胭脂鱼的受精卵中就可检测到,但CD4转录水平极其低;同时随着时间的增加,从胭脂鱼受精卵开始至出膜51天中均可检测到CD4的转录本,并且其m RNA水平逐渐升高且趋于稳定。胭脂鱼各组织半定量RT-PCR结果表明:CD4 mRNA水平在免疫器官鳃中最高,在脾脏、心脏和PBL中较高,在肌肉和皮肤中较低。用灭活的嗜水气单胞菌刺激胭脂鱼后,qRT-PCR结果表明:在48h时,在脾脏、头肾和肾脏中均检测到CD4 mRNA水平的上升,并且在脾脏和头肾中的上升水平程度更大;在鳃和肠中,在24h时就检测到CD4 mRNA水平的上升。利用大肠杆菌进行原核表达获得了抗原性较强的CD4胞外段蛋白,并通过SDS-PAGE和Western blot对其进行检测,该CD4重组蛋白主要以包涵体形式进行表达,分子量约为36 KDa。以CD4重组蛋白作为抗原,免疫5-6周龄Balb/c雌性小鼠,获得了鼠抗胭脂鱼CD4血清,并利用细胞融合技术制备了能够分泌抗CD4单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为8-G7B12、4-F2C3、8-G6C1和11-F6A4。Western blot结果显示:这些抗体均可与胭脂鱼的头肾总蛋白中分子量约为25 KDa的蛋白发生特异性反应。利用抗胭脂鱼CD4单克隆抗体,通过间接免疫荧光对胭脂鱼外周血白细胞进行检测,结果从中发现了CD4+白细胞的存在。同时,利用该抗体对胭脂鱼胸腺、头肾和脾脏进行免疫组织化学染色,结果显示:在胸腺、头肾和脾脏中均观察到黄棕色阳性信号,并且发现在胸腺中CD4阳性细胞较多,而在头肾和脾脏中CD4阳性细胞较少;在阴性对照中未观察到黄棕色阳性信号。本研究获得了胭脂鱼CD4部分cDNA序列,分析了CD4的表达模式,构建载体,原核表达得到了重组蛋白,制备并鉴定了抗胭脂鱼CD4单克隆抗体,初步探究了CD4+细胞在胭脂鱼主要免疫器官中的分布特征。鉴于CD4+T细胞在适应性免疫系统中发挥的作用,抗胭脂鱼CD4单克隆抗体的获得,期待为胭脂鱼免疫系统的结构和功能及鱼类T细胞亚群的分类和功能研究奠定基础。
王香溢[8]（2020）在《氯化琥珀胆碱中毒大鼠给药点皮肤处药物含量的UHPLC-HRMS法测定及靶器官损伤的形态学变化》文中认为氯化琥珀胆碱（suxamethonium chloride）又称司可林、氯琥珀胆碱、氯化琥珀酰胆碱,化学名为二氯化2,2-[（1,4-二氧-1,4-亚丁基）双（氧）]双[N,N,N-三甲基乙胺]二水合物,分子式为C14H30Cl2N2O4·2H2O。其属于去极化类肌肉松弛药,临床用作全身麻醉时的肌肉松弛剂,可引起心动过缓、心律失常、心搏骤停等不良反应,若超量注射该药或不配合使用呼吸机的话,可致人支气管痉挛或过敏性休克死亡,属于B级有机剧毒品,近年来氯化琥珀胆碱被不法分子应用于飞镖射杀家禽、家畜类动物,更有甚者,氯化琥珀胆碱被犯罪分子用作杀人工具的案例屡见报道,根据文献记载,安徽、浙江、广东等地是此类案件的高发区。氯化琥珀胆碱的法医学检验从而成为当今司法实践中的一个新问题。由于氯化琥珀胆碱在体内快速分解成琥珀酸和胆碱,约2%以原形,其余以代谢物的形式从尿液中排出,而这两种分解物在体内本身就是存在的,这给氯化琥珀胆碱的体内检测又增加了难度。因此寻求氯化琥珀胆碱中毒后的法医病理学及理化特征,为氯化琥珀胆碱中毒案件定性提供科学的参考执行标准和依据。目的:1.观察皮下注射氯化琥珀胆碱（SUC）致大鼠相关器官或组织的病理变化。2.UHPLC-HRMS法测定注射点皮肤中SUC的含量并建立其方法学,UPLC-MS/MS法大鼠肾脏组织中2H-SUC的方法学验证。方法:1.大鼠皮下注射SUC,光镜下观察肌肉、心、肾、肺及气管等组织的病理学变化;电镜下观察肌肉、肾、注射点皮肤等组织的病理学变化。2.用超高压液相色谱串联高分辨率质谱仪（UHPLC-HRMS）法测定大鼠注射点处皮肤SUC含量,色谱采用Luna NH2色谱柱（2 mm×100 mm,,3μm）,流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈等度洗脱,流速是0.2 ml/min,进样体积是10μl,柱温37℃,进样时间为5 min。质谱测定采用四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法、可加热的电喷雾离子源（HESI）及正离子扫描模式。3.用UPLC-MS/MS法测定肾脏中2H-SUC的方法学验证;色谱采用Luna NH2色谱柱（2 mm×100 mm,3μm）,流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈等度洗脱,流速为0.2 ml/min;正离子扫描模式,多反应监测模式下,电喷雾离子化源进行检测;考察该方法的线性关系与检测限、准确度和精密度、回收率、基质效应和稳定性。结果:1.SUC 1.5、3.0和6.0 mg/kg可致大鼠肌肉、心、肾及肺等组织发生了明显的病理学组织学损伤;Mallory磷钨酸组织化学染色法显示SUC可引起大鼠心肌纤维维疏松、间隙增大,免疫组织化学法检测了中毒大鼠肌肉、心、肾、肺及支气管等组织中CD3、CD20、CD31、CD56和神经分泌颗粒膜蛋白等蛋白表达情况,仅发现SUC可增加大鼠肾间质中CD3的表达,电子显微镜观察到SUC可引起肾细胞中线粒体及骨骼肌细胞中肌节和肌丝的损伤。2.紫外全波长扫描在SUC标准品溶液、加SUC大鼠血清及皮下注射SUC大鼠血清中均未观察到特定的吸收峰;通过UHPLC-HRMS法,在大鼠注射点处皮肤中检测到了SUC,其含量随剂量增加而加大。SUC在0.2-10 ng/ml线性范围良好,回收率为80.55%～90.44%,相对标准偏差均小于15%,精密度和准确度均符合要求。3.通过UPLC-MS/MS法,肾组织中2H-SUC在0.5～100 ng/m L线性范围良好,日内、日间精密度和准确度均小于15%,回收率在85.30%～96.76%之间,经过处理后的样品不存在明显的基质效应。结论:1.SUC皮下注射可致大鼠心、肾、肺及肌肉组织发生明显的病理组织学损伤。2.UHPLC-HRMS法可测定其注射点处皮肤中的SUC,并建立大鼠皮肤中氯化琥珀胆碱的方法学。3.UPLC-MS/MS法可测定肾组织中2H-SUC,并建立肾组织中氘代氯化琥珀胆碱的方法学。
岑栋[9]（2020）在《基于纳米纤维的协同肿瘤治疗平台研究》文中研究指明本论文分为两个部分,分别研究了基于聚己内酯明胶纳米纤维的化疗光热治疗协同肿瘤治疗平台和基于聚己内酯明胶纳米纤维的饥饿治疗化疗协同肿瘤治疗平台第一部分以纤维或水凝胶作为主要形式的局部药物传输系统,已成为有效治疗肿瘤的一种技术方式,但由于其治疗功能单一,导致疗效有限,在实践应用中受到挑战。本研究设计并合成了一种基于纳米纤维的多功能局部药物传输系统,可以通过小切口微创手术方式植入体内,发挥治疗肿瘤的作用。在该体系中,聚多巴胺纳米颗粒（Polydopamine,PDA）与阿霉素（Doxorubicin,DOX）通过π-π键结合形成复合颗粒,随后复合颗粒在静电纺丝聚己内酯（Polycaprolactone,PCL）/明胶（Gelatin）纳米纤维（PG）表面吸附组装复合纳米纤维（PG@PDA-DOX）。PG@PDA-DOX复合纳米纤维能有效将近红外光（Near Infared,NIR）转化为热能,具有良好的光稳定性。此外,低p H和NIR照射能够显着加速DOX释放。PG@PDA-DOX复合纳米纤维的细胞实验水平研究表明,用808nm NIR照射,使得化疗和光热治疗协同作用,诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖,有效杀伤肿瘤。此外,通过微创手术将PG@PDA-DOX复合纳米纤维植入人源性异种移植瘤模型中验证该体系的体内治疗肿瘤效果。复合纳米纤维在体内无排斥反应,无明显全身系统性副作用,并且能有效抑制肿瘤生长。本研究证明了一种基于纳米纤维的肿瘤治疗微创平台,具有高效的治疗效果,在胆管细胞癌的临床治疗中具有巨大潜力。第二部分药物靶向递送到肿瘤组织和高效的细胞内转运是目前纳米药物在肿瘤治疗中面临的两大挑战。我们构建了一种可以通过微创手术植入式化疗与饥饿治疗协同的局部肿瘤治疗的纳米材料体系。该复合材料由多层分级复合纤维构成。负载有透明质酸酶（HAase）的聚己内酯（PCL）/明胶（PGH）电纺纳米纤维作为微创植入的多种治疗体系的基质。在介孔二氧化硅纳米颗粒上负载葡萄糖氧化酶（Glucose Oxidase,GOx）,随后覆盖p H响应的聚多巴胺涂层。在上述颗粒表面吸收乏氧激活的前药,巴诺蒽醌（AQ4N）形成复合颗粒（MGPA）,MGPA纳米颗粒作为行使治疗的关键递送载体进入肿瘤细胞内部后发挥作用。MGPA复合纳米颗粒通过静电组装方式结合在PGH纳米纤维（PGH@MGPA）表面,形成最终的纳米材料治疗体系。在弱酸性肿瘤微环境中实现MGPA纳米颗粒从PGH纳米纤维中的可控释放,随后被肿瘤细胞吞噬。同时,PGH纤维释放的HAase能有效分解肿瘤细胞外基质的主要成分透明质酸,从而促进MGPA纳米颗粒被肿瘤细胞摄取。GOx可以消耗葡萄糖和氧气,导致饥饿诱导的乏氧加重,进一步激活AQ4N成为有毒性的AQ4。该多层分级复合纤维在体外和体内均能显着抑制肿瘤生长,杀伤肿瘤。本研究提出了一个新的概念,结合纳米颗粒的系统性药物递送和纳米纤维的植入式局部药物递送系统的优点,实现高效的肿瘤治疗作用。
谢辉[10]（2019）在《新型多孔钽金属的制备及在股骨头坏死治疗中的应用》文中提出股骨头坏死是骨科尚未解决的难题,发病率逐年提高,致残率较高;尤其当股骨头坏死病变进展到中晚期,伴随股骨头软骨下微骨折及骨量的缺失,将导致股骨头塌陷,退变将不可逆。在保留股骨头手术方案中,骨科医生需要对即将失去完整结构、塌陷的股骨头进行修复及重建。传统经典的方法是采用自体带或不带血运髂骨或游离腓骨进行移植修复,但仍存在修复后生物力学强度不够及分布不均,再次塌陷不可避免。随着生物组织工程技术进步及新型生物材料研究的发展,有望为股骨头坏死后保髋治疗提供新的方式。基于组织工程技术三大要素,理想的骨组织工程支架材料应该具有以下特征:（1）具备稳定化学特征及良好的生物相容性,与组织体液无炎症反应:（2）支架材料具有与骨结构类似的力学性能,从而避免应力遮挡,特别是在弹性模量上与相应骨组织（0.01～30 GPa）越接近越好,同时具有足够的生物力学强度;（3）在空间结构上与骨组织类似,可为种子细胞提供有利的生长空间和物质交换场所。目前常用医用生物金属材料面临弹性模量高、孔隙率低、接触面摩擦系数低、易出现应力遮挡,造成宿主骨相应骨折及内植入物失效等问题。多孔钽金属（Porous tantalum）具有类似骨小梁结构,平均孔径在400～600μm之间,整体孔隙率为75%～85%,弹性模量与人体皮质骨结构相近,能更好地减少植入后应力遮挡,有利于骨重建及塑形。其相关产品在临床得到广泛应用,并取得了良好临床效果。但多孔钽金属材料制备技术被垄断,应用价格高昂,因而实现多孔钽金属国产化势在必行。本研究以多孔碳化硅材料为支架,应用化学气相沉积技术,制备新型多孔钽金属材料,并进行初步的生物性评价;开展了多孔钽金属材料复合骨髓基质干细胞修复骨坏死的实验研究,并在临床对股骨头坏死患者进行治疗,综合评价新型多孔钽金属的生物学特性及在股骨头坏死治疗中的临床疗效,具体内容如下:1.以多孔碳化硅为支架材料应用化学气相沉积（Chemical Vapor Deposition,CVD）技术将钽金属沉积在其表面形成国产新型多孔钽金属材料,采用超景深三维数字显微系统观察碳化硅支架材料在涂层前后表面金属形态特征,及扫描电镜和EDX能谱分析确定钽金属涂层厚度及钽元素能谱分析证实新型多孔钽金属制备工艺,成功制备出新型国产多孔钽金属。制备过程证实了最佳的氢气流量为150mL/min,最佳基体反应温度为900℃,沉积时间为10小时。采用化学气象沉积技术能够将钽金属均匀沉积到多孔碳化硅支架孔隙表面,涂层与碳化硅基体的结合力良好。新型多孔钽金属不仅具备理想的孔隙率率及三维互通的网状结构,有具有与骨组织相匹配的力学性能。2.通过原代提取兔骨髓基质干细胞（BMSCs）进行分离、培养,应用流式细胞检测仪检测细胞表面CD45、CD44及CD34蛋白,进行BMSCs特异性抗原鉴定。分别将BMSCs与钽金属浸提液、正常培养基及多孔钽金属材料共培养7天,分别观察1、3、5、7天细胞生长、增殖曲线,发现1、3、5天三组间无明显差异,7天时钽金属共培养组高于其他两组,具有统计学意义。采用MTT法测定三组间细胞生长、增殖情况,反映多孔钽金属具有良好的细胞相容性。应用扫描电镜观察BMSCs在多孔钽金属支架材料上粘附、生长及增值情况,联合培养至第7d,相邻细胞间突触交织融合,粘附爬行相互连接,多孔钽金属表面完全被细胞所覆盖,并可见多孔钽金属孔隙内部充满细胞,并分泌基质覆盖在材料表面。另外将多孔钽切割制作成直径为0.5cm、长0.7cm大小的圆片状,植入兔背部筋膜及肌肉处,观察多孔钽植入后与周围结缔组织纤维相容性。12周后,发现多孔钽被结缔组织包围,局部没有红肿、破溃、流脓等炎症反应和肿瘤形成。Van Gieson染色结果表明,皮下植入的多孔钽完全整合到结缔组织中,无免疫排斥反应。证实了新型多孔钽支架材料具有良好体内体外生物相容性,进而可为下一步进行骨植入提供可靠的理论基础。3.针对BMSCs具有向成骨细胞转化的潜力和特性,体外培养骨髓基质干细胞结合多孔钽形成复合体,植入兔股骨坏死区域,观察其改善成骨以及骨修复的情况。首先通过体外实验我们采用骨髓基质干细胞分别与多孔碳化硅、多孔钛金属和自制新型多孔钽金属共同培养,7天培养后与多孔钽支架组的细胞增殖均高于Ti合金和SiC支架组（P<0.05）;通过细胞的成骨诱导,并经茜素红染色和碱性磷酸酶钴钙法染色进一步验证了所提取、培养的细胞符合干细胞具有成骨分化的特性;将骨髓基质干细胞与多孔钽支架复合培养,细胞数量随着复合培养的天数也不断增加。两周后,可荧光定量PCR检测到多孔钽金属复合培养组的骨钙素、骨桥蛋白表达增高,证实了多孔钽金属具有一定促进骨生成作用;在体内实验中,制备成激素型骨坏死模型并多孔钽金属及复合细胞后植入修复骨坏死,进行植入物周围骨组织免疫组织化学染色,结果显示两组间骨组织内均有不同程度的BMP-2和VEGF表达,在骨髓、微血管周围及周围骨组织内可见黄褐色颗粒,其中多孔钽金属联合BMSCs组深染,表达较明显,12周时强烈表达,多孔钽金属联合BMSCs组明显高于对照组,有明显差异,具有统计学意义（P<0.05）;硬组织切片结果显示在单纯植入多孔钽12周后,多孔钽的孔隙几乎全部被新生的类骨质所填充,多孔钽联合BMSCs共培养组,可见再生的骨小梁（红色）在多孔钽的内部。通过此次试验再次证明了新型多孔钽金属具有良好的生物相容性,符合骨植入材料的基本要求;动物试验结果表明多孔钽金属联合骨髓基质干细胞修复骨坏死取得了良好的效果,可为治疗中晚期骨坏死提供一些思路和选择。4.应用新型多孔钽棒复合骨髓基质干细胞联合带血管蒂髂骨瓣转移方法对青壮年股骨头缺血性坏死病人进行了保留股骨头的手术治疗,在明确骨髓基质干细胞具有促成骨作用,多孔钽金属棒具有诱导骨生长及生物力学支撑的情况下,研究联合带血管蒂髂骨瓣转移治疗股骨头坏死,对中晚期的年轻股骨头坏死病人进行了治疗,取得了满意的疗效,研究结果发现新型多孔钽棒复合骨髓基质干细胞联合带血管蒂髂骨瓣转移有效的清除了股骨头内坏死骨,促进了股骨头内新骨再生,提供了可靠的血供及生物力学支撑,预防塌陷的进一步发生,并且不增加手术的并发症。
二、试论免疫组织、细胞化学技术及其应用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、试论免疫组织、细胞化学技术及其应用（论文提纲范文）
（1）产纳豆激酶和凝乳酶枯草芽孢杆菌的筛选及其在发酵乳中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 简写对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 枯草芽孢杆菌简介 |
| 1.2 纳豆激酶的研究进展 |
| 1.2.1 纳豆激酶的酶学性质 |
| 1.2.2 纳豆激酶的功能及其应用前景 |
| 1.2.3 纳豆激酶与其它溶栓药物的比较及其溶栓优势 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌凝乳酶的研究进展 |
| 1.4 枯草芽孢杆菌在发酵食品及益生菌制剂中的应用 |
| 1.5 枯草芽孢杆菌对肠道菌群的调节作用和在医药保健领域的应用 |
| 1.5.1 肠道菌群及肠道菌群失调相关疾病 |
| 1.5.2 炎症性肠病的发病机制及治疗方法的研究进展 |
| 1.6 立题背景和研究意义 |
| 1.7 主要研究内容 |
| 第二章 产纳豆激酶和凝乳酶枯草芽孢杆菌菌株的分离、筛选及鉴定 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与设备 |
| 2.2.1 主要试剂与材料 |
| 2.2.2 主要仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 培养基配方 |
| 2.3.2 纤维蛋白溶解酶纤溶活力测定方法 |
| 2.3.3 凝乳酶活力测定方法 |
| 2.3.4 产纳豆激酶和凝乳酶双酶菌株的筛选及鉴定 |
| 2.3.5 产双酶菌株菌株的鉴定 |
| 2.3.6 B.subtilis JNFE0126 菌株的生长特征检测 |
| 2.3.7 B.subtilis JNFE0126 株菌发酵液凝乳酶和纤溶酶活性的动态检测 |
| 2.3.8 B.subtilis JNFE0126 菌株产双酶能力的遗传稳定性测定 |
| 2.3.9 B.subtilis JNFE0126 菌株保藏 |
| 2.3.10 酶抑制剂抑制试验分析纤溶酶和凝乳酶的类型 |
| 2.3.11 B.subtilis JNFE0126 菌株的两种酶基因的PCR扩增和测序 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 产双酶(纳豆激酶和凝乳酶)菌株的筛选 |
| 2.4.2 B.subtilis nk1 菌株的鉴定 |
| 2.4.3 B.subtilis JNFE0126 菌株的生长和产酶特性 |
| 2.4.4 蛋白酶抑制剂实验分析纤溶酶和凝乳酶类型 |
| 2.4.5 B.subtilisJNFE0126 的纳豆激酶和M4 金属蛋白酶基因PCR扩增和测序结果 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 枯草芽孢杆菌产发酵液中纳豆激酶和凝乳酶的分离纯化及酶学性质研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与设备 |
| 3.2.1 主要试剂与材料 |
| 3.2.2 主要仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 培养基 |
| 3.3.2 B.subtilis JNFE0126 菌株的活化 |
| 3.3.3 纳豆激酶、凝乳酶粗酶液的制备 |
| 3.3.4 蛋白质浓度的测定—Bradford检测法 |
| 3.3.5 纳豆激酶的分离纯化 |
| 3.3.6 凝乳酶的分离纯化 |
| 3.3.7 纳豆激酶的酶学性质研究 |
| 3.3.8 凝乳酶的酶学性质研究 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 纳豆激酶的分离纯化 |
| 3.4.2 凝乳酶的分离纯化 |
| 3.4.3 纯化酶的SDS-PAGE电泳检测结果 |
| 3.4.4 纳豆激酶的酶学性质 |
| 3.4.5 凝乳酶的酶学性质研究 |
| 3.4.6 纯化凝乳酶的凝乳效果及其潜在应用价值 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 枯草芽孢杆菌发酵乳的研制 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与设备 |
| 4.2.1 主要试剂与材料 |
| 4.2.2 主要仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 发酵乳制备方法 |
| 4.3.2 单因素实验和正交试验 |
| 4.3.3 发酵乳理化指标测定 |
| 4.3.4 发酵乳感官评定 |
| 4.3.5 发酵乳储藏过程中的品质变化观察 |
| 4.3.6 发酵乳的微观结构观察 |
| 4.3.7 发酵乳动物体内抗血栓作用 |
| 4.3.8 试验数据统计分析 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 单因素试验优化发酵乳配方和发酵条件 |
| 4.4.2 采用正交试验确定发酵乳最适发酵条件 |
| 4.4.3 正交试验确定稳定剂配方 |
| 4.4.4 发酵过程中菌量、p H和酶活的变化 |
| 4.4.5 发酵乳总蛋白和总糖含量 |
| 4.4.6 发酵乳感官评定结果 |
| 4.4.7 发酵乳的流变学特性 |
| 4.4.8 发酵乳的持水力和质构测定结果 |
| 4.4.9 发酵乳的微观凝胶结构 |
| 4.4.10 发酵乳储藏过程中的品质变化: |
| 4.4.11 小鼠黑尾模型验证发酵乳体内抗血栓效果 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 枯草芽孢杆菌发酵乳预防和治疗炎症性肠病 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料与设备 |
| 5.2.1 主要试剂与材料 |
| 5.2.2 主要仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 枯草芽孢杆菌发酵乳的制备及其CFU计数和革兰氏染色 |
| 5.3.2 DSS诱导性炎症性肠病动物模型的建立和动物分组 |
| 5.3.3 模型小鼠疾病活动指数(DAI)的测定 |
| 5.3.4 小肠和结肠的组织学切片观察和组织学评分 |
| 5.3.5 免疫组织化学染色 |
| 5.3.6 Western blotting检测蛋白表达水平 |
| 5.3.7 肠道菌群分析 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 枯草芽孢杆菌发酵乳的外观、CFU计数及其Gram’s染色 |
| 5.4.2 口服枯草芽孢杆菌发酵乳对DSS诱导性炎症性肠病动物DAI的影响 |
| 5.4.3 口服枯草芽孢杆菌发酵乳对小肠和结肠病理变化的影响 |
| 5.4.4 枯草芽孢杆菌发酵乳对白细胞浸润和炎症因子、抗炎因子表达的影响 |
| 5.4.5 口服枯草芽孢杆菌发酵乳对Lgr-5,CDX-2,Mucin-2 表达水平的影响 |
| 5.4.6 口服枯草芽孢杆菌发酵乳对ZO1和Villin表达水平的影响 |
| 5.4.7 口服发酵乳对DSS诱导的IBD模型小鼠肠道菌群的影响 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 纳豆激酶缓释颗粒的研制 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 材料和设备 |
| 6.2.1 主要试剂与材料 |
| 6.2.2 主要仪器 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 缓释颗粒原材料的各种反应体系内纳豆激酶纤溶活性测定 |
| 6.3.2 双层壳-核结构的纳豆激酶缓释颗粒的设计和构建 |
| 6.3.3 纳豆激酶缓释颗粒的粒径和zeta电位测定 |
| 6.3.4 装载纳豆激酶和模型药物的缓释颗粒微观结构的显微镜观察 |
| 6.3.5 纳豆激酶缓释颗粒在储藏过程中的纤溶活性的动态测定 |
| 6.3.6 模拟消化液对缓释颗粒纤溶活性的影响 |
| 6.3.7 模拟消化液对缓释颗粒粒径、ζ-电位和表面结构的影响 |
| 6.3.8 荧光标记模拟药物(Ig G)缓释颗粒口服后在小鼠消化道内分布情况分析 |
| 6.3.9 口服纳豆激酶缓释颗粒后小鼠肠道内的活性酶的释放和吸收试验 |
| 6.3.10 口服纳豆激酶缓释颗粒对模型小鼠血栓治疗效果的评价 |
| 6.4 结果与讨论 |
| 6.4.1 纳豆激酶缓释颗粒的设计与构建 |
| 6.4.2 颗粒双层壳-核结构的鉴定与验证 |
| 6.4.3 纳豆激酶缓释颗粒保藏过程中酶活的变化 |
| 6.4.4 缓释颗粒中纳豆激酶的体外释放特性 |
| 6.4.5 双层壳-核结构缓释颗粒所装载模型药物口服后在体内的释放 |
| 6.4.6 口服纳豆激酶缓释颗粒对黑尾模型小鼠的血栓治疗效果 |
| 6.5 本章小结 |
| 主要结论与展望 |
| 主要结论 |
| 展望 |
| 论文的主要创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
（2）美洲大蠊提取物促进小鼠70%肝切除后肝细胞再生的机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部 确定PAEs促进小鼠70%肝切除后肝细胞再生的表型 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部 运用RNA-seq技术,探寻PAEs促进小鼠PH后肝细胞再生的主要信号通路 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 PAEs调控PI3K/AKT/mTOR信号通路促进小鼠PH后肝细胞再生的机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 美洲大蠊提取物的常见临床应用及相关基础研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的成果 |
| 致谢 |
（3）转基因CX3CR1-GFP小鼠活体成像评价生物材料的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 文献综述 |
| 1.1 生物材料及其研究概况 |
| 1.1.1 生物材料简介 |
| 1.1.2 生物材料基本属性 |
| 1.1.3 生物相容性 |
| 1.1.4 生物相容性评价实验 |
| 1.1.5 生物相容性评价标准 |
| 1.1.6 生物材料应用前景 |
| 1.2 生物相容性与炎症反应 |
| 1.2.1 创伤愈合修复过程 |
| 1.2.2 炎症反应过程 |
| 1.2.3 异物反应 |
| 1.2.4 单核细胞简介 |
| 1.2.5 巨噬细胞简介 |
| 1.3 生物标记研究 |
| 1.3.1 免疫检测分析技术 |
| 1.3.2 放射物标记免疫分析 |
| 1.3.3 发光免疫分析 |
| 1.3.4 有色标记免疫分析 |
| 1.3.5 免疫酶标记技术 |
| 1.3.6 免疫荧光标记技术 |
| 1.3.7 荧光标记物 |
| 1.4 小动物活体成像技术概述 |
| 1.4.1 小动物活体成像简介 |
| 1.4.2 小动物活体荧光成像技术 |
| 1.4.3 荧光成像的优缺点 |
| 1.4.4 国内外小动物活体成像技术研究现状 |
| 1.4.5 小动物活体成像发展趋势 |
| 1.5 绿色荧光蛋白GFP研究概述 |
| 1.5.1 绿色荧光蛋白GFP简介 |
| 1.5.2 绿色荧光蛋白GFP的应用 |
| 1.5.3 GFP荧光成像背景噪音 |
| 1.6 趋化因子及CX3CR1-GFP小鼠研究概况 |
| 1.6.1 趋化因子及其研究 |
| 1.6.2 CX3CR1-GFP小鼠简介 |
| 1.6.3 国内外CX3CR1-GFP小鼠研究现状 |
| 1.7 本文的研究背景、研究意义及研究内容 |
| 1.7.1 本文的研究背景及意义 |
| 1.7.2 本文的研究内容 |
| 2 生物材料生物相容性评价试验 |
| 2.1 材料与仪器 |
| 2.1.1 生物材料试验样品 |
| 2.1.2 动物选择 |
| 2.1.3 试剂与仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 材料皮下植入 |
| 2.2.2 组织学HE染色观察 |
| 2.2.3 免疫组织化学检测 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 生物材料吸收状态观察结果 |
| 2.3.2 HE染色组织病理结果 |
| 2.3.3 F4/80 免疫组化病理结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 3 活体成像评价生物相容性方法探究 |
| 3.1 材料与仪器 |
| 3.1.1 生物材料试验样品 |
| 3.1.2 动物选择 |
| 3.1.3 试剂与仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 材料皮下植入 |
| 3.2.2 活体成像观察 |
| 3.2.3 冰冻切片 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 活体成像结果 |
| 3.3.2 冰冻切片结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 4 结论与展望 |
| 4.1 主要结论 |
| 1、生物材料的生物相容性评价 |
| 2、活体成像评价方法的探究 |
| 4.2 前景展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录一 攻读学位期间发表的学术论文 |
（4）Ngb和HIF-1α在牦牛与黄牛不同脑组织表达与分布的比较研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| SUMMARY |
| 主要缩略词 |
| 第一部分 文献综述 |
| 1 研究背景概述 |
| 1.1 高原动物的生理特征 |
| 1.2 脑与缺氧之间的联系 |
| 1.3 牦牛适应高原环境的探究 |
| 2 脑红蛋白研究进展 |
| 2.1 脑红蛋白概述 |
| 2.2 脑红蛋白结构特点 |
| 2.3 脑红蛋白在脑组织中的分布特征 |
| 2.4 脑红蛋白对脑组织的生物学意义 |
| 3 缺氧诱导因子-1研究进展 |
| 3.1 缺氧诱导因子-1概述 |
| 3.2 缺氧诱导因子-1结构特点 |
| 3.3 缺氧诱导因子-1生理功能 |
| 3.4 缺氧诱导因子-1与脑红蛋白之间的联系 |
| 4 哺乳动物脑组织分区及其主要功能的研究进展 |
| 4.1 哺乳动物脑组织分区概述 |
| 4.2 脑组织各区域功能特征 |
| 5 本研究目的与意义 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 Ngb和 HIF-1α在牦牛与黄牛端脑不同区域表达与分布的比较研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 牦牛与黄牛端脑不同区域Ngb和 HIF-1αmRNA qRT-PCR检测 |
| 1.2.2 牦牛与黄牛端脑不同区域Ngb和 HIF-1α蛋白Western blot检测 |
| 1.2.3 Ngb和 HIF-1α蛋白免疫组织化学染色定位 |
| 1.2.4 数据统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 Ngb mRNA和蛋白在牦牛与黄牛端脑不同区域的表达 |
| 2.2 HIF-1αmRNA和蛋白在牦牛与黄牛端脑不同区域的表达 |
| 2.3 Ngb和 HIF-1α蛋白在牦牛与黄牛端脑不同区域的定位 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 实验二 Ngb和 HIF-1α在牦牛与黄牛间脑不同区域表达与分布的比较研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 牦牛与黄牛间脑不同区域Ngb和 HIF-1αmRNA qRT-PCR检测 |
| 1.2.2 牦牛与黄牛间脑不同区域Ngb和 HIF-1α蛋白Western blot检测 |
| 1.2.3 Ngb和 HIF-1α蛋白免疫组织化学染色定位 |
| 1.2.4 数据统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 Ngb mRNA和蛋白在牦牛与黄牛间脑不同区域的表达 |
| 2.2 HIF-1αmRNA和蛋白在牦牛与黄牛间脑不同区域的表达 |
| 2.3 Ngb和 HIF-1α蛋白在牦牛与黄牛间脑不同区域的定位 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 实验三 Ngb和 HIF-1α在牦牛与黄牛菱脑不同区域表达与分布的比较研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 牦牛与黄牛菱脑不同区域Ngb和 HIF-1αmRNA qRT-PCR检测 |
| 1.2.2 牦牛与黄牛菱脑不同区域Ngb和 HIF-1α蛋白Western blot检测 |
| 1.2.3 Ngb和 HIF-1α蛋白免疫组织化学染色定位 |
| 1.2.4 数据统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 Ngb mRNA和蛋白在牦牛与黄牛菱脑不同区域的表达 |
| 2.2 HIF-1αmRNA和蛋白在牦牛和黄牛菱脑不同区域的表达 |
| 2.3 Ngb和 HIF-1α蛋白在牦牛与黄牛菱脑不同区域的定位 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 全文结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
（5）猪鼻支原体与猪肺炎支原体的鉴别诊断及致病性比较的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 病原体概况 |
| 1.2 Mhr与 Mh P的致病性 |
| 1.3 Mhr与 Mhp的流行病学 |
| 1.4 Mhr与 Mhp诊断技术研究进展 |
| 1.5 Mhr与 Mhp疫苗研究进展 |
| 1.6 研究目的与意义 |
| 第二章 检测猪鼻支原体抗原的ELISA方法的建立及其应用 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 菌株、细胞、试验动物与试剂 |
| 2.1.2 单抗制备及其鉴定 |
| 2.1.3 单抗的纯化与HRP标记 |
| 2.1.4 ELISA反应术式的确定 |
| 2.1.5 ELISA反应条件的确定 |
| 2.1.6 临界值的确定 |
| 2.1.7 ELISA方法的特异性和敏感性测定 |
| 2.1.8 ELISA方法的重复性测定 |
| 2.1.9 ELISA方法的应用 |
| 2.1.9.1 Mhr抗原含量与CCU之间的相关性测定 |
| 2.1.9.2 Mhr抗原含量与菌体最佳接种剂量之间的相关性测定 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 mAb-1C4特性的鉴定 |
| 2.2.1.1 亚类鉴定、腹水纯化及辣根过氧化物酶标记抗体的制备 |
| 2.2.1.2 mAb特异性检测 |
| 2.2.2 ELISA最适反应条件的确定 |
| 2.2.3 临界值的确定 |
| 2.2.4 ELISA方法的特异性和敏感性试验 |
| 2.2.5 ELISA方法的重复性试验 |
| 2.2.6 CCU与 Mhr抗原含量间的相关性分析 |
| 2.2.7 Mhr抗原含量与Mhr-DL菌体最适接种剂量间的相关性分析 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 猪鼻支原体P37蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 菌株、质粒、细胞及抗Mhr血清 |
| 3.1.2 获得p37基因并制备重组杆状病毒 |
| 3.1.3 P37蛋白的表达与纯化 |
| 3.1.4 P37蛋白单克隆抗体的制备 |
| 3.1.5 P37蛋白单克隆抗体的鉴定 |
| 3.1.6 P37蛋白的B细胞表位的鉴定 |
| 3.1.7 P37蛋白B细胞表位的精确定位 |
| 3.1.8 P37蛋白氨基酸序列的多重比对 |
| 3.1.9 对P37蛋白的表位进行同源建模分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 p Fast Bac?1-His-P37 重组质粒和穿梭质粒的鉴定 |
| 3.2.2 重组P37蛋白的表达鉴定和纯化 |
| 3.2.3 重组P37蛋白特异性单克隆抗体的鉴定 |
| 3.2.4 利用制备的特异性单克隆抗体鉴定P37蛋白针对的B细胞线性表位 |
| 3.2.5 Mhr分离菌株的P37蛋白的氨基酸序列分析 |
| 3.2.6 P37蛋白表位的同源建模分析 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 检测猪鼻支原体和猪肺炎支原体抗原的鉴别诊断方法的建立及应用 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 病原体 |
| 4.1.2 细胞、质粒及试剂 |
| 4.1.3 Mhp抗原制备及P46蛋白的表达纯化 |
| 4.1.4 单克隆抗体的制备与鉴定 |
| 4.1.5 免疫组织化学染色方法的建立 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 P46蛋白的表达与鉴定 |
| 4.2.2 单克隆抗体的分析鉴定 |
| 4.2.3 免疫组化检测Mhp抗原 |
| 4.3 讨论 |
| 第五章 猪鼻支原体与猪肺炎支原体感染致病性比较 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 病原体 |
| 5.1.2 试剂 |
| 5.1.3 试验设计 |
| 5.1.4 解剖观察 |
| 5.1.5 Mhr和 Mhp的抗体及核酸检测 |
| 5.1.6 组织病理学分析及肺组织内Mhr和 Mhp抗原的检测 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 临床表现 |
| 5.2.2 病理变化 |
| 5.2.3 Mhr、Mhp的抗体及核酸检测 |
| 5.2.4 组织病理变化和IHC检测 |
| 5.3 讨论 |
| 第六章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（6）树鼩脑内单胺能系统解剖图谱的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 树鼩的生物学特性及其应用前景 |
| 1.1.1 树鼩的生物学特性 |
| 1.1.2 树鼩的人类疾病动物模型 |
| 1.1.3 树鼩的脑解剖与脑图谱研究 |
| 1.2 大脑神经元部分表达多巴胺能的表型 |
| 1.2.1 个体发育期神经元部分表达DA能表型 |
| 1.2.1.1 具体特征 |
| 1.2.1.2 大脑中的分布 |
| 1.2.2 成年期神经元部分表达DA能表型 |
| 1.2.2.1 具体特征 |
| 1.2.2.2 大脑中的分布 |
| 1.2.3 单酶神经元的功能 |
| 1.2.3.1 单酶TH神经元的功能 |
| 1.2.3.2 单酶AADC神经元的功能 |
| 1.2.3.3 单酶TH和AADC神经元为一个功能单元 |
| 1.2.4 单酶神经元在生理和病理学中的功能意义 |
| 1.2.5 单酶神经元的调节 |
| 1.2.5.1 单酶神经元的神经调节 |
| 1.2.5.2 单酶神经元的旁分泌和内分泌调节 |
| 1.3 小结 |
| 第二章 树鼩下丘脑中酪氨酸羟化酶的分布 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 手术和秋水仙碱注射 |
| 2.2.3 组织准备 |
| 2.2.4 抗体特性 |
| 2.2.5 Western印迹 |
| 2.2.6 免疫组织化学 |
| 2.2.7 单标和双标免疫荧光染色 |
| 2.2.8 数字化成像和神经解剖学分析 |
| 2.2.9 统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 抗体特异性的表征 |
| 2.3.2 树鼩下丘脑TH免疫反应性(TH-ir)神经元的分布 |
| 2.3.3 树鼩、大鼠和人下丘脑TH-ir神经元的分布比较 |
| 2.3.4 树鼩下丘脑TH与AVP、OXT和CRH共标染色 |
| 2.3.5 树鼩下丘脑室旁核和视上核TH-ir神经元共表达AADC和vMAT2 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 树鼩中枢神经系统中5-羟色胺的解剖分布 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与方法 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 组织准备 |
| 3.2.3 抗体特征 |
| 3.2.4 尼式染色 |
| 3.2.5 免疫组织化学 |
| 3.2.6 数字化成像和神经解剖学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 5-HT免疫反应性胞体分布 |
| 3.3.2 5-HT免疫反应性纤维分布 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 第四章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 附录: 英文缩略词表 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 |
（7）胭脂鱼CD4单克隆抗体的制备及其应用研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 胭脂鱼研究概况 |
| 1.1.1 胭脂鱼生物学研究进展 |
| 1.1.2 胭脂鱼主要病害与防治 |
| 1.2 鱼类免疫系统研究概述 |
| 1.2.1 免疫组织与器官 |
| 1.2.2 免疫细胞 |
| 1.2.3 免疫分子 |
| 1.2.4 先天性免疫 |
| 1.2.5 获得性免疫 |
| 1.2.6 鱼类免疫系统在鱼病诊断与防治中的应用 |
| 1.3 T淋巴细胞研究概述 |
| 1.3.1 T细胞表面标志 |
| 1.3.2 鱼类T细胞研究进展 |
| 1.4 CD4研究概况 |
| 1.4.1 CD4的结构 |
| 1.4.2 CD4~+T细胞及其功能 |
| 1.4.3 单克隆抗体在研究鱼类CD4~+T细胞中的应用 |
| 1.5 研究的目的和意义 |
| 1.6 研究内容 |
| 第2章 胭脂鱼CD4 cDNA的克隆与生物信息学分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料和仪器 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验菌株 |
| 2.2.3 实验主要试剂与仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 总RNA的提取及检测 |
| 2.3.2 逆转录合成第一链cDNA模板 |
| 2.3.3 胭脂鱼CD4 cDNA的获得 |
| 2.3.4 目的产物的回收与T载体的连接 |
| 2.3.5 转化与筛选 |
| 2.3.6 胭脂鱼CD4 cDNA序列的生物信息学分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 胭脂鱼脾脏提取总RNA质量检测 |
| 2.4.2 胭脂鱼CD4编码序列的克隆 |
| 2.4.3 胭脂鱼CD4 cDNA生物信息学分析 |
| 2.5 讨论 |
| 第3章 胭脂鱼CD4表达模式研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验菌株 |
| 3.2.3 实验主要试剂与仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 胭脂鱼CD4发育时期和组织分布检测 |
| 3.3.2 嗜水气单孢菌对胭脂鱼CD4表达的影响 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 胭脂鱼早期发育阶段半定量RT-PCR检测结果 |
| 3.4.2 胭脂鱼各组织半定量RT-PCR检测结果 |
| 3.4.3 嗜水气单孢菌感染胭脂鱼后CD4 qRT-PCR检测结果 |
| 3.5 讨论 |
| 第4章 胭脂鱼CD4蛋白的表达与纯化 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验菌株和载体 |
| 4.2.2 实验试剂及仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 含酶切位点目的片段的扩增及PCR产物的回收和鉴定 |
| 4.3.2 质粒的小量抽提 |
| 4.3.3 目的片段与表达载体的酶切与连接 |
| 4.3.4 重组质粒的转化与鉴定 |
| 4.3.5 重组蛋白的诱导表达与鉴定 |
| 4.3.6 重组蛋白的纯化 |
| 4.3.7 Westerning-blotting分析鉴定纯化产物 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.5 讨论 |
| 第5章 胭脂鱼CD4单克隆抗体的制备及分析 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验主要材料与仪器 |
| 5.2.1 实验动物及细胞 |
| 5.2.2 实验试剂及仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 免疫小鼠 |
| 5.3.2 小鼠抗血清效价检测 |
| 5.3.3 胭脂鱼CD4单克隆抗体的制备 |
| 5.3.4 ELISA检测单克隆抗体特异性 |
| 5.3.5 Western-blotting分析单克隆抗体特异性 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 抗血清效价ELISA检测结果 |
| 5.4.2 杂交瘤细胞筛选结果 |
| 5.4.3 单克隆抗体特异性ELISA检测结果 |
| 5.4.4 Western blot检测结果 |
| 5.5 讨论 |
| 第6章 胭脂鱼CD4单克隆抗体在CD4~+细胞鉴定中的应用 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验主要材料与仪器 |
| 6.2.1 实验动物 |
| 6.2.2 实验试剂及仪器 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 间接免疫荧光实验 |
| 6.3.2 免疫组织化学染色 |
| 6.4 实验结果 |
| 6.4.1 胭脂鱼外周血中白细胞IFA分析结果 |
| 6.4.2 胭脂鱼胸腺、头肾和脾脏的免疫组化结果 |
| 6.5 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（8）氯化琥珀胆碱中毒大鼠给药点皮肤处药物含量的UHPLC-HRMS法测定及靶器官损伤的形态学变化（论文提纲范文）
| 英文缩略词(Abbreviation) |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 实验动物 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 急性毒性试验及实验分组 |
| 2.2 制备中毒大鼠 |
| 2.3 样品处理 |
| 2.3.1 血样品处理 |
| 2.3.2 皮肤及肾组织样品处理 |
| 2.4 紫外全波长扫描 |
| 2.5 UHPLC-HRMS 法测定 |
| 2.6 UPLC-MS/MS法测定 |
| 2.7 HE染色 |
| 2.8 Mallory磷钨酸组织化学染色 |
| 2.9 免疫组织化学染色 |
| 2.10 透射电镜超薄切片制备 |
| 2.11 统计学处理 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 急性毒性实验结果 |
| 3.2 SUC的紫外扫描 |
| 3.3 SUC的 UHPLC-HRMS检测方法的建立及大鼠注射点处皮肤中SUC检测 |
| 3.4 UPLC-MS/MS法大鼠肾脏组织中2H-SUC的方法学验证 |
| 3.5 HE 染色结果 |
| 3.6 Mallory磷钨酸组织化学染色 |
| 3.7 免疫组织化学染色 |
| 3.8 透射电镜观察 |
| 讨论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 氯化琥珀胆碱中毒的研究进展 |
| 参考文献 |
（9）基于纳米纤维的协同肿瘤治疗平台研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 中英文缩写词对照表 |
| 绪论 |
| 第一部分 可植入复合纳米纤维促进光热化疗协同肿瘤治疗 |
| 1 前言 |
| 2 材料和实验方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 伦理审批 |
| 2.4 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 PG@PDA-DOX复合纳米纤维的合成 |
| 3.2 PG@PDA-DOX复合纳米纤维的药物释放性能 |
| 3.3 PG@PDA-DOX复合纳米纤维的光热性能 |
| 3.4 PG@PDA-DOX复合纳米纤维体外治疗肿瘤评价 |
| 3.5 PG@PDA-DOX复合纳米纤维体内治疗肿瘤评价 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二部分 可植入复合纳米纤维促进饥饿治疗化疗协同肿瘤治疗 |
| 1 引言 |
| 2 材料和实验方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 MGPA纳米颗粒的制备 |
| 3.2 PGH@MGPA复合纳米纤维制备 |
| 3.3 PGH@MGPA复合纳米纤维特性分析 |
| 3.4 体外协同治疗肿瘤的评价 |
| 3.5 体内协同治疗肿瘤的评价 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 综述 纳米纤维材料在多模式肿瘤诊治中的应用 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在学期间所取的科研成果 |
（10）新型多孔钽金属的制备及在股骨头坏死治疗中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要符号表 |
| 1 绪论 |
| 1.1 研究背景及意义 |
| 1.2 国内外相关工作研究进展 |
| 1.2.1 多孔钽金属在骨科中的应用 |
| 1.2.2 多孔钽金属材料的制备 |
| 1.2.3 股骨头坏死发病机制与病因 |
| 1.2.4 股骨头坏死的分期 |
| 1.2.5 股骨头坏死的治疗 |
| 1.3 本文主要研究思路 |
| 1.3.1 选题依据 |
| 1.3.2 研究内容 |
| 1.3.3 主要研究内容技术路线图 |
| 2 新型多孔钽金属材料的制备与表征 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与设备 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验设备 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.4 性能检测 |
| 2.4.1 不同H_2流量下样品表面显微分析 |
| 2.4.2 扫描电镜显微分析 |
| 2.4.3 超景深三维数字显微系统表征 |
| 2.4.4 SEM测量涂层厚度及EDX能谱分析表征 |
| 2.4.5 X射线衍射(XRD)分析表征 |
| 2.4.6 力学性能分析 |
| 2.4.7 涂层与基体结合力测定 |
| 2.5 结果 |
| 2.5.1 不同H2流量下样品表面显微形貌 |
| 2.5.2 多孔钽生物形貌观察 |
| 2.5.3 超景深三维数字显微系统观测 |
| 2.5.4 SEM测量涂层厚度及EDX能谱分析 |
| 2.5.5 X射线衍射(XRD)分析 |
| 2.5.6 多孔钽金属材料的力学性能 |
| 2.5.7 涂层与基体结合力 |
| 2.6 讨论 |
| 2.7 小结 |
| 3 新型多孔钽金属材料初步生物相容性评价 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与仪器 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 主要实验仪器和试剂 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 多孔钽材料制备及消毒 |
| 3.3.2 实验动物分组及模型制备 |
| 3.3.3 兔BMSCs培养及鉴定 |
| 3.3.4 BMSCs与多孔钽支架材料共培养及分组 |
| 3.3.5 MTT法检测各组细胞生长及增殖情况 |
| 3.3.6 扫描电镜观察兔BMSCs在新型多孔钽生长增殖情况 |
| 3.3.7 多孔钽支架材料体内组织相容性观察 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 多孔钽支架材料的观察 |
| 3.4.2 骨髓基质干细胞的形态特征观察及鉴定 |
| 3.4.3 BMSCs与多孔钽材料支架共培养后形态特征观察 |
| 3.4.4 MTT法检测多孔钽支架材料对BMSCs生长、增殖的影响 |
| 3.4.5 通过电镜扫描观察BMSCs在多孔钽支架材料上粘附生长情况 |
| 3.4.6 体内相容性观察 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 4 新型多孔钽金属复合骨髓基质干细胞修复骨坏死的实验研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与仪器 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 主要试剂与仪器 |
| 4.3 体外实验 |
| 4.3.1 兔成骨细胞的定向诱导与鉴定 |
| 4.3.2 BMSCs与支架材料共培养及分组 |
| 4.3.3 MTT法检测各组细胞生长及增殖情况 |
| 4.3.4 BMSCs的绿色荧光蛋白(GFP)染色 |
| 4.3.5 成骨细胞基因PCR检测 |
| 4.4 体内试验 |
| 4.4.1 实验动物分组及对照设计 |
| 4.4.2 麻醉方法 |
| 4.4.3 激素性骨坏死动物模型的建立 |
| 4.4.4 植入手术方式 |
| 4.4.5 取材与硬组织切片 |
| 4.4.6 免疫组织化学分析 |
| 4.4.7 硬组织切片 |
| 4.4.8 推出实验 |
| 4.5 统计学处理 |
| 4.6 实验结果 |
| 4.6.1 成骨细胞的形态特征观察 |
| 4.6.2 成骨细胞的鉴定 |
| 4.6.3 MTT法检测各组骨髓基质干细胞生长增殖情况 |
| 4.6.4 骨髓基质干细胞绿色荧光蛋白(GFP)染色 |
| 4.6.5 PCR检测成骨基因 |
| 4.6.6 激素性兔股骨髁坏死模型的评估 |
| 4.6.7 手术过程及术后观察 |
| 4.6.8 免疫组织化学染色 |
| 4.6.9 硬组织切片 |
| 4.6.10 推出实验 |
| 4.7 讨论 |
| 4.8 小结 |
| 5 新型多孔钽金属棒复合骨髓基质干细胞联合带血管蒂髂骨瓣转移治疗股骨头坏死的临床研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 研究对象 |
| 5.3 评估工具 |
| 5.3.1 双髋关节正位X线片 |
| 5.3.2 髋关节Harris评分 |
| 5.3.3 视觉模拟评分VAS量表 |
| 5.3.4 三维步态测量与分析 |
| 5.4 方法 |
| 5.4.1 新型多孔钽金属棒的设计 |
| 5.4.2 骨髓基质干细胞提取与培养 |
| 5.4.3 手术技术 |
| 5.4.4 术后处理和随访 |
| 5.4.5 双髋关节正位X线片 |
| 5.4.6 髋关节Harris评分 |
| 5.4.7 视觉模拟评分VAS量表的计分方法 |
| 5.4.8 统计学分析 |
| 5.5 结果 |
| 5.6 典型病例 |
| 5.7 讨论 |
| 5.8 小结 |
| 6 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
四、试论免疫组织、细胞化学技术及其应用（论文参考文献）
- [1]产纳豆激酶和凝乳酶枯草芽孢杆菌的筛选及其在发酵乳中的应用[D]. 张轩. 江南大学, 2021(01)
- [2]美洲大蠊提取物促进小鼠70%肝切除后肝细胞再生的机制研究[D]. 邹英鹰. 昆明医科大学, 2021
- [3]转基因CX3CR1-GFP小鼠活体成像评价生物材料的初步研究[D]. 高德煜. 烟台大学, 2021(11)
- [4]Ngb和HIF-1α在牦牛与黄牛不同脑组织表达与分布的比较研究[D]. 米晓钰. 甘肃农业大学, 2020
- [5]猪鼻支原体与猪肺炎支原体的鉴别诊断及致病性比较的研究[D]. 朱红振. 中国农业科学院, 2020(01)
- [6]树鼩脑内单胺能系统解剖图谱的研究[D]. 黄兆欢. 中国科学技术大学, 2020(01)
- [7]胭脂鱼CD4单克隆抗体的制备及其应用研究[D]. 钟若男. 西南大学, 2020(01)
- [8]氯化琥珀胆碱中毒大鼠给药点皮肤处药物含量的UHPLC-HRMS法测定及靶器官损伤的形态学变化[D]. 王香溢. 安徽医科大学, 2020(04)
- [9]基于纳米纤维的协同肿瘤治疗平台研究[D]. 岑栋. 浙江大学, 2020(01)
- [10]新型多孔钽金属的制备及在股骨头坏死治疗中的应用[D]. 谢辉. 大连理工大学, 2019(01)