一、缺氧性肺动脉高压大鼠肺iNOS表达的实验研究（论文文献综述）
吴阿敏[1]（2020）在《17-β雌二醇通过HIF1α/IL6/STAT3信号通路调控低氧性肺动脉高压的巨噬细胞表型》文中研究说明目的:通过在体研究（应用低氧和去势大鼠建立肺动脉高压模型）和离体研究（体外大鼠肺泡巨噬细胞培养）,探讨在低氧性肺动脉高压中,17-β雌二醇对巨噬细胞的调控作用及其是否通过HIF1α/IL6/STAT3信号通路发挥作用。方法:1 在体研究:选择30只6-8周的雌性SD大鼠,并随机分成5组:常氧+假手术组、常氧+去势+E2组、低氧+假手术组、低氧+去势组,低氧+去势+E2组。去势组予以切除卵巢后缝合;假手术组找到卵巢后直接还纳缝合。低氧组每天低氧24小时。E2组每日予17β-雌二醇20μg/kg皮下注射。饲养8周后,测定大鼠的平均肺动脉压（m PAP）、右心室肥厚指数（RVHI）,HE染色后观察肺小血管形态学变化并检测WA%（血管壁占血管总面积）和WT%（肺小动脉中膜厚度比）,免疫荧光法鉴定肺巨噬细胞标记物F4/80、CD206、INOS,用RT-PCR和Western blot测大鼠肺组织HIF1α、IL6、STAT3 m RNA和蛋白水平。2离体研究:培养大鼠肺巨噬细胞NR8383,随机分为常氧组、低氧组、低氧+E2(10-8mol/L)（即17-β雌二醇）组。常氧组置于37℃、95%O2、5%CO2的细胞培养箱,低氧组置于37℃,3%O2、5%CO2,92%N2的三气培养箱,孵育24小时,免疫荧光法鉴定CD206、INOS。RT-PCR测CD206、INOS、HIF1α、IL6、STAT3 m RNA表达水平,Western Blot测HIF1α、IL6、STAT3蛋白水平。结果:1在体研究:与常氧+假手术组的大鼠相比,低氧条件下三组大鼠的体重增长变缓,m PAP、RVHI、WA%和WT%明显升高,低氧去势大鼠升高更明显,肺小动脉壁局部增厚,管腔狭窄,伴有大量巨噬细胞浸润,F4/80、CD206、INOS免疫荧光AO值升高;与低氧+去势组相比,低氧+去势+E2组大鼠m PAP、RVHI、WA%和WT%明显下降,F4/80、INOS的AO值下降,CD206的AO值升高;HIF1α、IL6、STAT3 m RNA和蛋白水平:在低氧条件下的三组显着高于常氧+假手术组,与低氧+去势组相比,低氧+去势+E2组明显降低。2 离体研究:显微镜下观察NR8383细胞形态在低氧组细胞数量较常氧组明显增加,大部分呈圆形;CD206荧光染色显示低氧组阳性水平明显高于常氧组,低氧+E2组高于低氧组;INOS荧光染色显示低氧组阳性水平明显高于常氧组,低氧+E2组介于低氧组和常氧组之间;与常氧组相比,低氧组CD206、INOS、HIF1α、IL6、STAT3 m RNA水平升高;与低氧组相比,低氧+E2组INOS、HIF1α、IL6、STAT3 m RNA水平降低,CD206 m RNA水平升高;HIF1α、IL6、STAT3蛋白水平在低氧组显着高于常氧组,低氧+E2组低于低氧组。结论:长期慢性低氧可诱导低氧性肺动脉高压发生,去势大鼠病情加重;E2可能通过抑制HIF1α/IL6/STAT3信号通路的表达而调控巨噬细胞表型,抑制低氧性肺动脉高压的肺血管重塑。
赵婷,王彦梅,王乐[2]（2019）在《谷氨酰胺诱导热休克蛋白70在缺氧性肺动脉高压新生大鼠中的保护作用研究》文中研究指明目的探讨谷氨酰胺对缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺损伤的保护作用。方法将84只Wistar新生大鼠随机分为缺氧性肺动脉高压（HPH）组和对照组。HPH组包括模型组、盐水组、谷氨酰胺（Gln）组,后两组新生大鼠通过尾静脉注射无菌盐水、Gln注射液,1次/d,连续3 d,3组同时建立HPH模型,并分别于缺氧3、7、14 d和对照组同步观察不同时间点肺动脉压力（mPAP）变化;用光学显微镜观察肺血管结构变化,肺小血管重塑指标（MT%、MA%）变化;用Western blot法检测各组新生大鼠肺组织中热休克蛋白70（HSP70）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、内皮素-1（ET-1）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的蛋白质表达。结果 （1）模型组及盐水组缺氧3 d、7 d、14 d的mPAP水平与同日龄对照组比较显着增高（P<0.05）,表明造模成功。Gln组缺氧3 d、7 d、14 d的mPAP水平与同日龄模型组及盐水组比较,显着降低（P<0.05）;（2）缺氧3 d,各组间测量的肺血管重塑指标中层横截面积占血管总横截面积的百分比（MA%）、肺动脉血管壁中层壁厚占外径的百分比（MT%）,差异无统计学意义[F（MA%）=0.312、F（MT%）=0.252,P>0.05];缺氧7 d、14 d各组间测量的肺血管MA%、MT%比较,差异有统计学意义[F（MA%7 d）=5.367,F（MT%7 d）=6.102,P<0.01;F（MA%14 d）=8.672,P<0.01,F（MT%14 d）=5.132、P<0.05)],其中对照组及Gln组分别与模型组、盐水组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）,Gln组与对照组比较,差异具有统计学意义（P>0.05）;（3）在缺氧3 d、7 d、14 d各组间HSP70的蛋白质表达比较差异有统计学意义（F=13.547,P<0.01;F=3.546,P<0.05;F=15.625,P<0.01）;HPH各组表达增强,Gln组与模型组、盐水组比较,差异具有统计学意义（P<0.01）,HSP70在Gln组表达增强;在缺氧3 d、7 d、14 d各组间HIF-1α、ET-1、iNOS蛋白质表达比较,差异具有统计学意义（P<0.05）,其中对照组与模型组、盐水组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）,HPH各组表达增强,Gln组与模型组、盐水组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）,对照组与Gln组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论谷氨酰胺可以诱导缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺组织HSP70的表达,降低HIF-1α、ET-1、iNOS的表达,减轻缺氧性肺损伤,可能成为治疗新生儿HPH的一种新策略。
陈勇豪[3]（2019）在《诱导型一氧化氮合酶在牦牛和黄牛肺组织中的表达分析》文中研究指明为了解高原牦牛肺组织诱导型一氧化氮合酶在低氧适应中的作用,本实验选择不同海拔高度的高原牦牛和黄牛作为研究对象。颈动脉采血检测血液中NO水平,并利用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹方法对牦牛和黄牛肺组织中iNOS mRNA及蛋白的相对表达量进行分析。研究结果显示:（1）黄牛血液中NO含量呈现海拔递增趋势,海晏黄牛血液中NO含量最高,显着高于同海拔的海晏牦牛;大通牦牛血液中NO含量高于同海拔海晏牦牛,但差异不显着。（2）黄牛和牦牛肺组织中iNOS mRNA相对表达量均呈现海拔递增趋势,海晏黄牛最高;急进高原秦川黄牛显着高于秦川黄牛;大通牦牛高于同海拔海晏牦牛,但差异不显着。（3）黄牛和牦牛肺组织中iNOS蛋白相对表达量呈现海拔递增趋势,海晏黄牛显着高于海晏牦牛;急进高原秦川黄牛显着高于秦川黄牛;大通牦牛显着高于海晏牦牛。以上结果表明肺组织中iNOS mRNA、蛋白表达和动脉血液中NO含量趋势具有一致性,表明iNOS的表达调控主要发生在转录水平;肺组织iNOS mRNA、蛋白表达和血液中NO含量受到海拔高度和品种的共同影响;肺组织中iNOS的表达在动物适应低氧环境过程中发挥一定作用。
钱进先[4]（2019）在《丹参酮ⅡA磺酸钠对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的作用及机制研究》文中认为第一部分 丹参酮ⅡA磺酸钠对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的保护性作用目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠（Tanshinone IIA sodium sulfonate,TSS）对脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导小鼠急性肺损伤（Acutelunginjury,ALI）的保护性作用。方法雄性C57BL/6小鼠108只,体重25-30g,随机分成3组,每组36只:对照组（control组）（n=36）:予以腹腔注射等体积生理盐水;LPS组（n=36）:采取单次腹腔注射LPS10mg/kg建立急性肺损伤（Acute lung injury,ALI）模型;LPS+TSS组（n=36）:采取预先腹腔注射TSS 30 mg/kg,30min后腹腔注射LPS10 mg/kg。分别于注射生理盐水或LPS1h、6h、12h时处死小鼠,每个时间点处死12只小鼠,留取肺组织待检。测定肺组织的湿干比（W/D）,HE染色后评估肺损伤程度及炎症细胞浸润情况。结果对照组肺泡结构完整,肺泡间隔均匀一致。LPS组肺组织表面充血水肿,肺泡结构破坏,肺泡间隔增宽,部分肺泡腔可见渗出、出血。肺组织湿干比（W/D）方面,与对照组比较,LPS组在1h、6h、12h较对照组明显升高（P<0.05）,LPS+TSS组在1h、6h明显升高（P<0.05）,至12h较对照组无显着差别（P>0.05）;与LPS组比较,丹参酮ⅡA磺酸钠预处理后在1h、6h、12h均能够显着降低肺水肿。炎症细胞浸润方面,与对照组相比,LPS刺激后在1h、6h炎症细胞浸润数量较对照组有显着差别（P<0.05）,12h已无差别（P>0.05）;给予丹参酮ⅡA磺酸钠预处理后在1h、6h明显降低炎症细胞浸润数量（P<0.05）。结论腹腔注射LPS10mg/kg成功建立了急性肺损伤模型;丹参酮Ⅱ A磺酸钠预处理能够明显减轻LPS致ALI肺泡结构破坏程度、肺水肿,炎症细胞浸润数量,发挥了肺保护性作用。第二部分 丹参酮ⅡA磺酸钠对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤HIF-1α及炎症因子的影响目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠（Tanshinone ⅡA sodium sulfonate,TSS）对脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导小鼠急性肺损伤缺氧诱导因子（Hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α）及炎症因子的影响。方法雄性C57BL/6小鼠108只,体重25-30g,随机分成3组,每组36只:对照组（control组）（n=36）:予以腹腔注射等体积生理盐水;LPS组（n=36）:采取单次腹腔注射LPS10mg/kg建立急性肺损伤（Acute lung injury,ALI）模型;LPS+TSS组（n=36）:采取预先腹腔注射TSS 30 mg/kg,30min后腹腔注射LPS10 mg/kg。分别于注射生理盐水或LPS 1h、6h、12h时处死小鼠,每个时间点处死12只小鼠,留取肺组织待检。采用实时聚合酶链式反应（Real-time PCR,RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot法）检测肺组织中HIF-1α的表达情况。采用酶联免疫吸附法（Enzyme linked immunosorbent assay kit,ELISA）和RT-PCR法检测肺组织中促炎因子肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、白介素-6（interleukin-6,IL-6）和抑炎因子白介素-10（interleukin-10,IL-10）的表达情况。结果与对照组相比,LPS诱导的ALI小鼠肺组织在1h、6h、12h时HIF-1α、促炎因子TNF-α IL-1β、IL-6和抑炎因子IL-10 mRNA和蛋白质水平均明显上调（P<0.05）。LPS刺激后肺组中HIF-1α mRNA和蛋白水平均在6h达到峰值后下降。TNF-α、IL-1β mRNA和蛋白质,IL-6和IL-10 mRNA在1h时明显升高,至6h开始出现下降。与LPS组比较,丹参酮ⅡA磺酸钠在LPS刺激后6h和12h显着降低HIF-1αmRNA和蛋白水平的表达。对于炎症因子方面,丹参酮ⅡA磺酸钠在LPS刺激后1h、6h、12h时能明显抑制TNF-αmRNA、IL-6 mRNA和蛋白质、IL-1β mRNA的表达水平,在12h时上调IL-10 mRNA和蛋白质的表达水平。结论丹参酮ⅡA磺酸钠通过抑制LPS诱导ALI肺组中HIF-1α,促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,和上调抑炎因子IL-10的表达,起到肺保护性作用。第三部分 HIF-1α对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤炎症因子的影响目的探讨HIF-1α对脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导小鼠急性肺损伤炎症因子的影响。方法雄性C57BL/6小鼠36只,体重25-30g,随机分成3组,每组均为12只:对照组（n=12）:腹腔注射等体积生理盐水;LPS组（n=12）:单次腹腔注射LPS 10mg/kg;LPS+HIF-1α抑制剂（2ME2）组（n=12）:预先腹腔注射HIF-1α抑制剂（2ME2）（20mg/kg）,30min后腹腔注射LPS 10mg/kg。在注射生理盐水或LPS 6h时处死小鼠,留取肺组织待检。测定肺组织的湿干比（W/D）,HE染色后评估肺损伤程度。采用ELISA和RT-PCR法检测肺组织中促炎因子肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、白介素-6（interleukin-6,IL-6）和抑炎因子白介素-10（interleukin-10,IL-10）的表达情况。结果与对照组相比,LPS诱导的ALI小鼠肺组织促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6和抑炎因子IL-10 mRNA和蛋白质水平均明显上调（P＜0.05）。与LPS组比较,LPS+2ME2组中肺组织结构破坏程度减轻,肺水肿减轻,促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA和蛋白质水平明显下调（P<0.05）,但是抑炎因子IL-10 mRNA和蛋白水平改变不明显（P>0.05）。结论抑制HIF-1α表达后可改善LPS诱导小鼠ALI肺水肿和促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,起到肺保护性作用。第四部分 丹参酮ⅡA磺酸钠通过PI3K/AKT信号通路对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤HIF-1α的影响目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠（Tanshinone ⅡA sodium sulfonate,TSS）对脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导小鼠急性肺损伤HIF-1α的影响机制。方法实验1:TSS对LPS诱导小鼠急性肺损伤PI3K/AKT信号通路的影响雄性C57BL/6小鼠36只,体重25-30g,随机分成3组,每组均为12只:对照组（n=12）:腹腔注射等体积生理盐水;LPS组（n=12）:单次腹腔注射LPS 10mg/kg;LPS+TSS组（n=12）:预先腹腔注射 TSS（30mg/kg）,30min后腹腔注射LPS（10mg/kg）。在注射NS或LPS 6h时处死小鼠,留取肺组织待检。采用Western-blot法检测肺组织中PI3K和p-Akt/Akt的表达情况。实验2:PI3K抑制剂（LY294002）对LPS诱导急性肺损伤HIF-1α的影响雄性C57BL/6小鼠36只,体重25-30g,随机分成3组,每组均为12只:对照组（n=12）:腹腔注射等体积生理盐水;LPS组（n=12）:单次腹腔注射LPS 10mg/kg;LPS+PI3K（phosphatidyIinositide 3-kinases）抑制剂（LY294002）组（n=12）:预先腹腔注射PI3K抑制剂LY294002（30mg/kg）,30min后腹腔注射LPS 10mg/kg。在注射NS或LPS 6h时处死小鼠,留取肺组织待检。采用RT-PCR和Western blot法检测肺组织中HIF-1α的表达情况。结果对照组中PI3K、p-Akt/Akt呈低水平表达。与对照组比较,LPS组PI3K、p-Akt/Akt明显升高。与LPS组比较,丹参酮ⅡA磺酸钠能够明显抑制肺组织中PI3K蛋白表达、及Akt的磷酸化水平。与LPS组比较,PI3K抑制剂（LY294002）能够明显抑制ALI肺组织中HIF-1 α mRNA和蛋白水平表达。结论丹参酮ⅡA磺酸钠可能通过PI3K/Akt途径抑制了 HIF-1α的表达,起到了肺保护性作用。
李云虹[5]（2019）在《西藏芜菁防治缺氧性肺水肿和脑水肿的作用及机制研究》文中研究指明西藏芜菁（Brassicarapassp.rapa,俗称芫根）是一种适应了极地环境的食、药、饲三用作物,藏民传统上将其用于缓解和抵御高原性缺氧。课题组前期研究揭示,西藏芜菁块茎提取物的正丁醇相（n-butanol fraction of Tibetan Turnip,n-bu-TT）是其抗缺氧的有效活性部位,对香豆酸（p-Coumaricacid,CA）及其葡萄糖苷（p-Coumaricacid-β-D-glucopyranoside,CAG）为主要功效成分之一。进一步研究又表明,n-bu-TT和CA具有良好的预防缺氧性肺水肿的作用,并提示可能同时具有预防缺氧性脑水肿的功效。本文在前期研究的基础上,首先建立急性常压缺氧性肺/脑水肿的动物模型,评价n-bu-TT和CA预防缺氧性肺/脑水肿的作用,然后建立小鼠肺微血管内皮细胞和脑星形胶质细胞的缺氧模型,探讨CA防护缺氧性肺/脑细胞损伤的作用机制。主要研究内容及成果如下:1.建立急性常压缺氧性肺水肿的ICR（Institute of Cancer Research）小鼠模型,探明n-bu-TT)和CA预防缺氧性肺水肿的有效作用剂量。将100只健康雄性小鼠随机分为5组,设1个常氧对照组和4个低氧试验组,每组各20只。常氧对照组灌胃无菌水,4个低氧试验组分别灌胃无菌水、400 mg/kg.bw的n-bu-TT、100mg/kg.bw的CA和2mg/kg.bw的地塞米松（阳性对照药物）,每日灌胃1次,连续4d。第4天灌胃lh后,将低氧试验组小鼠置于含氧量为（9.5士0.2）%的常压低氧舱中,保持24h后取出,测定各组小鼠的肺组织含水量（Lung water content,LWC）、肺血管通透性、肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中蛋白浓度、血浆一氧化氮（Nitricoxide,NO）和内皮素-1（Endothelin-1,ET-1）含量,用光镜和电镜观察肺组织的显微结构,并用免疫组化方法检测肺组织中紧密接合蛋白（Occludin）的表达水平。结果显示,在含氧量为9.5%的低氧环境下,400 mg/kg.bw的 n-bu-TT和100 mg/kg.bw的CA干预后实验小鼠的LWC和BALF中蛋白浓度均显着低于低氧模型组;同时,这两组小鼠的肺组织气血屏障完整性良好,NO释放增强,ET-1释放被抑制,Occludin蛋白表达水平增加。n-bu-TT和CA表现出与常用药物地塞米松（Dexamethasone,DXMS）相近的对小鼠缺氧性肺水肿的预防作用。2.建立急性常压缺氧性脑水肿的ICR小鼠模型,探明n-bu-TT和CA预防缺氧性脑水肿的有效作用剂量。然后将100只健康雄性小鼠随机分为5组,设1个常氧对照组和4个低氧试验组,每组各20只。常氧对照组灌胃无菌水,4个低氧试验组分别灌胃无菌水、400 mg/kg.bw的n-bu-TT、100 mg/kg.bw的CA和2mg/kg.bw的地塞米松,每日灌胃1次,连续4d。第4天灌胃后lh,将低氧试验组小鼠置于含氧量为（9.5±0.2）%的常压低氧舱中,保持24h后取出,检测各组小鼠的脑组织含水量（Brain water content,BWC）、血脑屏障通透性、Na+-K+-ATPase活性、线粒体膜电位、氧化应激及炎症因子等指标。同时,用光镜和电镜观察脑组织的显微结构,并采用免疫组化法检测脑组织中Occludin的表达水平。结果显示,在含氧量为9.5%的低氧环境下,400 mg/kg.bw的n-bu-TT和100 mg/kg.bw的CA干预后小鼠的BWC和血脑屏障通透性均显着低于低氧模型组,同时这两组小鼠的Na+-K+-ATPase活性和线粒体膜电位增加,氧化应激和炎症指标均得到有效抑制,Occludin蛋白表达水平增加。n-bu-TT和CA表现出与地塞米松相近的对小鼠缺氧性脑水肿的预防作用。3.建立ICR小鼠的肺微血管内皮细胞缺氧模型,探索CA预防缺氧性肺水肿的作用机制。设置5个试验组,依次为常氧对照组、低氧模型组、低氧+25 μmol/L的CA组、低氧+50 μmol/L的CA组和低氧+10 μmol/L的地塞米松组。常氧预处理1 h后,将4个低氧试验组置于三气培养箱（1%O2+5%C02+94%N2）中,24 h后取出。检测各组细胞的存活率,检测细胞培养上清液中NO和ET-1释放水平、以及HIF-1α、VEGF、iNOS、eNOS和ET-1mRNA水平,利用透射电镜观察各组肺微血管内皮细胞的超微结构。同时,采用RT-qPCR和Western Blot技术检测低氧肺水肿模型小鼠肺组织样本中HIF-1α、VEGF、iNOS、eNOS和ET-1mRNA水平及蛋白表达量。结果显示,CA预防缺氧性肺水肿的主要作用机制涉及HIF-1α、VEGF、iNOS和ET-1mRNA及蛋白表达水平的降低,进而降低了肺组织屏障通透性,促进了 NO释放,并抑制了 ET-1合成。4.建立ICR小鼠的脑星形胶质细胞缺氧模型,探索CA预防缺氧性脑水肿的作用机制。设置5个试验组,依次为常氧对照组、低氧模型组、低氧+25 μnol/L的CA组、低氧+50μmol/L的CA组和低氧+25 μmol/L的地塞米松组。常氧预处理1 h后,将4个低氧试验组置于三气培养箱（1%02+5%C02+94%N2）中,24h后取出。检测各组细胞的存活率,测定HIF-1α、VEGF、ET-1和AQP4mRNA水平,利用透射电镜观察各组脑星形胶质细胞的超微结构。同时,采用RT-qPCR和Western Blot技术检测低氧脑水肿模型小鼠脑组织样本中HIF-1 α、VEGF、ET-1和AQP4mRNA水平及蛋白的表达量。结果表明,CA预防缺氧性脑水肿的主要作用机制涉及HIF-lα、VEGF、ET-1和AQP4mRNA水平及蛋白表达的降低,进而降低了脑组织屏障通透性,缓解了缺氧造成的星形胶质细胞水肿,达到了预防小鼠缺氧性脑水肿的作用。本文对西藏芜菁滋补增氧、预防急性高原病（缺氧性肺/脑水肿）的物质基础和作用机制进行了系统研究和阐述,对这一极地宝贵资源的深入开发具有重要的理论意义和现实价值。
王乐,巴依尔才次克,李明霞[6]（2017）在《热休克蛋白70对缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺的保护作用》文中指出目的探讨腺病毒介导热休克蛋白70（HSP70）对缺氧性肺动脉高压（HPH）新生大鼠肺的保护作用。方法选取710日龄健康、清洁级Wistar新生大鼠128只,按随机数字表法随机分为HPH组和对照组。HPH组根据转染液不同分为盐水组、空病毒组、HSP70组,转染后置于80mL/L氮氧混合气体的低氧舱内建立HPH模型。造模3、7、10、14d测定各组新生大鼠平均肺动脉压力（mPAP）。应用反转录PCR和Western blot检测各组新生大鼠肺组织中HSP70、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、内皮素-1（ET-1）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA及蛋白表达。结果 1.缺氧3、7、10、14d盐水组mPAP水平（M,Q:12.00,2.50;15.00,2.00;18.00,1.75;20.00,2.25）与对照组（M,Q:9.50,4.75;10.50,1.00;13.00,1.00;15.50,3.25）比较显着增高,差异均有统计学意义（z=-3.28、-3.40、-3.34、-3.06,均P<0.01）;空病毒组（M,Q:13.50,2.00;15.50,1.75;18.00,1.00;22.00,4.25）与对照组比较显着增高,差异均有统计学意义（z=-2.83、-3.40、-3.42、-2.97,均P<0.01）;HSP70组缺氧3、7、10 d的mPAP水平（M,Q:8.50,4.00;10.50,1.00;13.00,1.00）与对照组比较差异均无统计学意义（z=-0.43、-0.00、-3.06,均P>0.05）。2.HSP70组缺氧3、7、10d各时间点间HIF-1α、ET-1、iNOS mRNA比较差异均有统计学意义（F=6.321、9.669、6.333,均P<0.01）,HSP70蛋白比较差异均有统计学意义（F=16.463、3.637、17.749,均P<0.01）。3.缺氧3、7、10d盐水组HIF-1αmRNA显着高于对照组,差异均有统计学意义（q=4.312、9.106、6.151,均P<0.01）;空病毒组显着高于对照组,差异均有统计学意义（q=3.982、9.235、5.352,均P<0.01）;缺氧3、7d HSP70组低于空病毒组,差异均有统计学意义（q=6.083、11.031,均P<0.05）。缺氧3、7、10d盐水组ET-1mRNA显着高于对照组,差异均有统计学意义（q=5.112、10.086、6.264,均P<0.01）;空病毒组显着高于对照组,差异均有统计学意义（q=4.182、12.238、5.864、均P<0.01）;缺氧3、7、10d HSP70组低于空病毒组,差异均有统计学意义（q=6.912、10.235、7.021,均P<0.05）。缺氧3、7、10d盐水组iNOS mRNA显着高于对照组,差异均有统计学意义（q=4.998、8.056、5.369,均P<0.01）;空病毒组显着高于对照组,差异均有统计学意义（q=4.778、10.138、5.154,均P<0.01）,缺氧3、7、10d HSP70组低于空病毒组,差异均有统计学意义（q=7.819、9.838、6.156,均P<0.05）。缺氧3、7、10d盐水组HIF-1α蛋白显着高于对照组,差异均有统计学意义（q=3.146、3.012、4.106,均P<0.05）;缺氧10d空病毒组显着高于对照组,差异有统计学意义（q=3.468,P<0.05）;缺氧3、7、10d HSP70组显着低于空病毒组,差异均有统计学意义（q=3.876、4.108、4.021,均P<0.05）。缺氧3、7、10d HSP70组ET-1蛋白显着低于盐水组,差异均有统计学意义（q=3.367、2.983、3.246,均P<0.05）;且显着低于空病毒组,差异均有统计学意义（q=3.268、2.678、3.567,均P<0.05）。缺氧3、7、10d盐水组iNOS蛋白显着高于对照组,差异均有统计学意义（q=3.360、3.567、3.567,均P<0.05）,HSP70组低于空病毒组,差异均有统计学意义（q=3.126、3.908、3.087,均P<0.05）。结论腺病毒介导HSP70可以提高HPH新生大鼠肺组织HSP70表达,下调HIF-1α、ET-1、iNOS表达,降低肺动脉压力。
朱洁[7]（2016）在《益气化痰祛瘀方介导NO-cGMP-KATP途径对COPD肺血管舒张作用的机制研究》文中认为1目的在中医理论指导下,探讨慢性阻塞性肺疾病（COPD）发生发展的病机演变,并以NO-cGMP-KATP途径为切入点,分别从离体血管、动物水平和细胞水平观察益气化痰祛瘀方—芪白平肺胶囊对COPD肺血管的舒张作用,探讨COPD发生发展过程中,NO/c GMP通路与KATP通道的相关性,探究益气化痰祛瘀方—芪白平肺胶囊防治COPD肺动脉高压的分子机制,为防治COPD肺动脉高压提供依据。2方法2.1离体肺动脉环实验研究分离第34级肺动脉用于制备离体大鼠肺动脉环,采用四通道离体微血管张力测定系统依次观察益气化痰祛瘀方—芪白平肺胶囊在不同浓度（0.125 g/Kg,0.25 g/Kg,0.5 g/Kg,1 g/Kg,2 g/Kg）对收缩剂U46619诱导的肺血管收缩效应的影响。并观察在不同阻断剂L-NAME、O D Q、G LY B预孵育下,对芪白平肺胶囊舒张作用的影响。2.2动物实验研究SPF级大鼠随机分为6组:正常组、模型组、芪白平肺高剂量组、芪白平肺中剂量组、芪白平肺低剂量组和尼可地尔对照组,每组20只。采用复合因素复制COPD痰瘀阻肺证大鼠模型,造模结束后,观察大鼠宏观体征、肺功能、血流动力学检测、Masson染色病理形态学变化,评价模型建立及其对COPD痰瘀阻肺证大鼠的影响,Elisa测定大鼠血清一氧化氮（NO）、环鸟苷酸（c GMP）浓度变化,免疫组化检测内皮型一氧化氮合酶（e NOS）、诱导型一氧化氮合酶（i NOS）蛋白表达,分别采用实时荧光定量PCR（RT-q PCR）和蛋白免疫印迹技术（Western Blot）检测KATP通道Kir6.1和SUR2B m RNA和蛋白的表达。2.3细胞实验研究SPF级大鼠给予芪白平肺胶囊颗粒连续灌胃10日,制备芪白平肺含药血清。采用组织块贴壁法,体外培养原代大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）;MTT法检测低氧条件下QBPF对PASMCs增值的影响,筛选出最佳反应时间;RT-q PCR检测PASMCs内Kir6.1和SUR2B基因m RNA水平,Western blot不同低氧时间下Kir6.1和SUR2B的表达,以及芪白平肺含药血清对其表达的影响。3结果3.1离体肺动脉环实验研究3.1.1芪白平肺胶囊对正常大鼠肺动脉环舒张作用的影响芪白平肺胶囊对U46619诱导的内皮完整的正常大鼠肺动脉环收缩具有一定的舒张作用,并呈一定的浓度依赖关系,半数有效浓度（EC50）为0.56g/L,最大舒张率为84.30±6.27%（P<0.01）。与内皮完整的肺动脉环相比,内皮剥夺后的肺动脉收缩作用,以及芪白平肺胶囊对肺动脉环的舒张作用均显着减弱,EC50为1.33g/L,最大舒张率为47.91±4.09%（P<0.01）。3.1.2 L-NAME、ODQ对芪白平肺胶囊舒张大鼠肺动脉环作用的影响L-NAME预孵育组的最大舒张率为45.81±8.72%,ODQ预孵育组的最大舒张率为50.42±7.5%,与正常大鼠内皮完整组的血管舒张率相比,具有显着差异（P<0.01）,与内皮剥夺组相比无显着性差异（P>0.05）。3.1.3 GLYB对芪白平肺胶囊舒张大鼠肺动脉环作用的影响GLYB能部分阻断由芪白平肺胶囊介导的肺动脉环舒张（P<0.01,Emax:84.30±6.27 in control,51.34±9.58%in GLYB-QBPF）。3.1.4芪白平肺胶囊对COPD痰瘀阻肺证大鼠肺动脉环张力的影响痰瘀阻肺证大鼠对U446619诱导的肺动脉的血管收缩能力,以及芪白平肺胶囊对COPD痰瘀阻肺证大鼠肺动脉环的舒张作用,均显着减弱（P<0.01）。与正常大鼠（Emax=84.30±6.27%,EC50=0.72g/L）相比,芪白平肺胶囊诱导的肺动脉环最大舒张率下降22.22%,最大舒张率为62.63%±10.02,EC50为0.72g/L。3.2.1宏观体征观察3.2动物实验研究模型组大鼠的反应较正常组迟缓,精神萎靡,常拱背蜷卧,皮毛不华,饮水进食减少,体重增幅减少甚至不增加,伴有咳嗽、喷嚏,呼吸急促,口鼻分泌物增多,可闻及气道痰鸣音,随着低氧进程,可观察到鼻部、唇周及爪甲紫绀,符合COPD痰瘀阻肺证的相关表现。芪白平肺胶囊各剂量组和尼可地尔组相关症状得到不同程度的改善。正常组未见明显异常。3.2.2芪白平肺胶囊对大鼠肺功能参数的影响与正常组大鼠相比,模型组大鼠的FEV0.3,FVC和FEV0.3/FVC的肺功能参数值显着下降（P<0.01）,芪白平肺胶囊高、中、低剂量组和尼可地尔组的肺功能参数值均有不同程度的改善（P<0.01）。3.2.3芪白平肺胶囊对大鼠血气的影响与正常组相比,模型组大鼠的pH、动脉PaO2、Sa O2的值显着性降低（P<0.01）,而动脉Pa CO2的值显着性升高（P<0.01）。给予不同剂量芪白平肺胶囊治疗后,其p H、动脉Pa O2的值与模型组相比,均有不同程度上升,而动脉Pa CO2的值显着性显着性降低（P<0.05,或P<0.01）。3.2.4芪白平肺胶囊对大鼠右心室收缩压、平均肺动脉压及心室肥厚度的影响与正常组相比,模型组大鼠的RVSP、mPAP和RV/（LV+S）均有显着性升高（P<0.01）。给予不同剂量芪白平肺胶囊治疗后,其RVSP、m PAP和RV/（LV+S）均有不同程度的降低（P<0.05,或P<0.01）。3.2.5芪白平肺胶囊对大鼠肺小动脉形态学影响结果表明,与正常对照组相比,模型组大鼠的肺小动脉显着增厚,中膜红色的肌纤维明显增生,外膜的蓝色胶原纤维增生,血管周围和组织间隙有大量炎性细胞浸润。而不同剂量芪白平肺和阳性对照尼可地尔可不同抑制抑制肺血管肌纤维和胶原纤维增生。3.2.6芪白平肺胶囊对大鼠血清NO、c GMP含量的影响与正常组相比,模型组大鼠的NO和c GMP显着性下调（P<0.01）,而芪白平肺高剂量组、中剂量组和尼可地尔组的NO含量和芪白平肺高剂量组、中剂量组、低剂量组和尼可地尔组的c GMP含量升高（P<0.05或P<0.01）。3.2.7芪白平肺胶囊对大鼠肺动脉e NOS、iNOS表达的影响正常组大鼠肺血管内皮e NOS强阳性表达,平滑肌i NOS弱阳性表达,芪白平肺胶囊高、中、低剂量和尼可地尔能不同程度上调e NOS,下调i NOS的相对表达（P<0.05,或P<0.01）。3.2.8芪白平肺胶囊对大鼠Kir6.1、SUR2B基因m RNA表达的影响结果显示,与正常组相比,模型组大鼠肺组织的Kir6.1 m RNA和SUR2B m RNA呈现显着的下降（P<0.01）,与模型组相比,芪白平肺胶囊高、中、低剂量组和尼可地尔组分别经过药物干预后,能提升Kir6.1 m RNA和SUR2B m RNA水平的表达（P<0.05或P<0.01）。3.2.9芪白平肺胶囊对大鼠KIR6.1、SUR2B蛋白表达的影响为了深入研究芪白平肺胶囊对KATP通道的调控作用,各组大鼠肺组织KIR6.1和SUR2B蛋白表达被检测。结果表明,与正常组相比,模型组SUR2B蛋白的表达显着下调,而芪白平肺胶囊不同剂量和尼可地尔能显着上调其表达（P<0.01,或P<0.05）,KIR6.1蛋白上调和下调的趋势不显着（P>0.05）3.3细胞实验研究3.3.1大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）的形态学特征原代大鼠肺动脉平滑肌组织块贴壁第35天可见贴壁附近有少量不规则长梭形细胞爬出,后呈放射性生长,约710天成束的细胞平行排列,部分区域细胞呈多层重叠,部分区域呈单层,高低起伏,呈现平滑肌细胞特征性的“峰-谷”状致密分布。激光扫描共聚焦显微镜下,观察到胞质中有较强的呈丝状分布的绿色荧光,为平滑肌α-肌动蛋白,细胞核呈长杆形或卵圆形蓝色荧光。3.3.2不同时间点各浓度HYXQ对大鼠PASCMs增殖的影响MTT结果表明,与常氧组相比,低氧12h、24h、48h、72h,OD值均显着增加,PASCMs出现增殖,（P<0.01）,各时间点,5%、10%、20%浓度HYXQ能不同程度抑制低氧诱导的PASCMs增殖,OD值显着降低（P<0.05或P<0.01）。其抑制作用以低氧24h的20%QBPF组最显着。3.3.3不同时间低氧对PASMCs中Kir6.1和SUR2B蛋白表达的影响结果表明:与各低氧组相比,常氧状态下（即低氧0h组）,PASMCs中Kir6.1和SUR2B蛋白表达维持在较低水平（P<0.01）,随着低氧时间延长,低氧6h和低氧12h的Kir6.1和SUR2B蛋白表达开始上升,代表KATP通道开放,蛋白表达在低氧24h达到高峰（P<0.01）,随着低氧时间延长,低氧48h、72h的蛋白表达出现不同程度下调（P<0.05或P<0.01）。3.4 HYXQ对PASMCs中Kir6.1和SUR2B蛋白表达的影响结果表明,与常氧组相比,低氧组、20%HYXQ组和10%HYXQ组和5%HYXQ组PASMCs中Kir6.1和SUR2B蛋白的表达均显着增加（P<0.01）,且20%HYXQ组和10%HYXQ组PASMCs中的Kir6.1和SUR2B蛋白表达高于低氧组（P<0.05或P<0.01）。3.5 GLYB对HYXQ干预PASMCs Kir6.1和SUR2B蛋白表达的影响结果表明,与常氧组相比,低氧组、20%HYXQ组PASMCs的Kir6.1和SUR2B蛋白的表达均显着增加（P<0.01）,而不同浓度GLYB干预后,高剂量GLYB和中剂量GLYB组能显着下调甚至阻断Kir6.1和SUR2B蛋白的表达水平（P<0.01）。3.6 L-NAME对HYXQ干预PASMCs中Kir6.1和SUR2B蛋白表达的影响结果表明,与常氧组相比,低氧组、20%HYXQ组PASMCs的Kir6.1和SUR2B蛋白的表达均显着增加（P<0.01）,而不同浓度L-NAME干预后,高剂量L-NAME和中剂量L-NAME组能显着下调Kir6.1和SUR2B蛋白的表达水平（P<0.05或P<0.01）。4结论本课题分别从大鼠宏观体征、肺功能、血气分析、血流动力学评价和肺血管形态学分析等方面,验证采用多因素方法复制的COPD痰瘀阻肺证大鼠模型成功。基于“益气、化痰、祛瘀”之法创立的益气化痰祛瘀方—芪白平肺胶囊具有显着的舒张肺血管,改善模型大鼠的肺功能参数、降低平均肺动脉,缓解肺血管形态学改变,抑制低氧诱导的PASMCs异常增殖的作用,对于防治COPD肺动脉高压具有较确切的疗效。其机制可能通过介导NO-cGMP-KATP途径,上调e NOS,下调i NOS水平,增加c GMP浓度,并上调KATP通道蛋白Kir6.1和SUR2B的表达而发挥其舒张肺动脉血管,缓解肺血管重构的作用,进而延缓COPD发展进程。
刘洋[8]（2016）在《毛蕊花糖苷对高原低氧性肺动脉高压大鼠的影响》文中研究表明目的:研究管花肉苁蓉（C.tubulosa）中毛蕊花糖苷（Acteoside,ACT）对高原低氧性肺动脉高压大鼠的作用及可能的作用机制。方法:1.采用模拟5000m海拔高原人工舱饲养SD大鼠。SD大鼠共72只,分为空白对照组、模型组、西地那非组（6.25mg/kg）和毛蕊花糖苷高、中、低剂量组（分别为50mg/kg、25mg/kg、12.5mg/kg）,每组12只,先给药一周,再进舱灌胃给药,共给药35天。2.测定平均肺动脉压、右心室收缩压并计算右心室肥厚指数。3.观察肺组织、右心室病理变化。4.测定肺组织匀浆液中NO含量及NOS酶活力、ET-1和VEGF的含量。5.检测肺组织中HIF-1αmRNA和蛋白的表达。结果:1.与正常对照组相比,模型组大鼠右心室收缩压、平均肺动脉压及右心室肥厚指数明显升高（P﹤0.01）;与模型组大鼠相比,毛蕊花糖苷高、中剂量组均能降低高原肺动脉高压大鼠平均肺动脉压及右心室收缩压（P﹤0.05）。2.光镜下可见模型组大鼠肺气管周围炎性浸润明显,心肌细胞增厚肥大,肺动脉血管中膜厚度和肺动脉血管壁厚度明显增加;与模型组相比,毛蕊花糖苷低、中、高剂量组及西地那非组肺动脉高压大鼠肺动脉血管壁、炎性浸润及心肌细胞增厚肥大情况均明显改善。3.与正常对照组相比,模型组大鼠肺匀浆液中NO含量明显降低（P﹤0.01）,NOS和eNOS酶活力明显降低（P﹤0.01）,iNOS酶活力明显升高（P﹤0.01）,ET-1、VEGF含量明显升高（P﹤0.01）;与模型组相比,毛蕊花糖苷高、中剂量组及西地那非组NO含量明显升高（P﹤0.01）,NOS和eNOS酶活力明显升高（P﹤0.01）,iNOS酶活力、ET-1、VEGF含量明显降低（P﹤0.01）。4.与正常对照组相比,模型组肺组织HIF-1αmRNA及蛋白表达量明显增加（P﹤0.01）;与模型组相比,毛蕊花糖苷高、中剂量组及西地那非组肺动脉高压大鼠肺组织HIF-1αmRNA及蛋白表达量明显降低（P﹤0.01）。结论:1.模拟5000m海拔高原人工舱可成功制备高原肺动脉高压大鼠模型。2.毛蕊花糖苷能降低肺动脉高压模型大鼠肺动脉压,减轻心肺病理改变。其作用机制可能是通过增强NO通路作用、抑制血管收缩功能及下调HIF-1α表达来实现。
刘坤珍[9]（2016）在《腺病毒介导的人HSP70对HPH新生大鼠HIF-1α及其调节因子和肺血管重塑作用研究》文中认为目的:通过免疫组化方法探讨人热休克蛋白70（HSP70）对缺氧性肺动脉高压（HPH）新生大鼠肺动脉压力、肺血管重塑以及HIF-1a、ET-1、iNOS的作用。方法:将128只Wistar新生大鼠按随机数字表法分为HPH组和对照组（C组）,根据转染液不同将HPH组再分为盐水组（H1组）、空病毒组（H2组:标有绿色荧光信号但未携带目的基因的病毒载体）和病毒+HSP70组（H3组:标有绿色荧光信号同时携带目的基因的病毒载体）。缺氧建模3、7、10、14d检测各组新生大鼠的肺动脉压力（mPAP）及肺血管重塑指标（MT%、MA%）,并测定肺血管HSP70、HIF-1a、ET-1、iNOS免疫组化强度。结果:缺氧3、7、10d时,盐水组和空病毒组HSP70表达较对照组增强（P<0.01）,病毒+HSP70组HSP70表达高于其余三组（P<0.01）,缺氧14d时各组间HSP70表达差异无统计学意义（P>0.05）。缺氧3、7、10d时,盐水组和空病毒组新生大鼠mPAP高于对照组（P<0.05）,病毒+HSP70组新生大鼠mPAP与对照组比较未见明显增高（P>0.05）;缺氧14d时,HPH组新生大鼠mPAP比较差异无统计学意义（P>0.05）,但均明显高于对照组（P<0.05）。缺氧7、10d盐水组和空病毒组MT%、MA%明显高于对照组（P<0.05）,病毒+HSP70组较对照组差异无统计学意义（P>0.05）;缺氧14d时,HPH组MT%、MA%比较差异无统计学意义（P>0.05）,但均明显高于对照组（P<0.05）。缺氧3、7、10d HPH组肺组织HIF-1α及ET-1表达均强于对照组（P<0.01）,其中病毒+HSP70组HIF-1α及ET-1表达低于盐水组和空病毒组（P<0.01）,但在盐水组和空病毒组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;缺氧14d时各组间HIF-1α及ET-1表达强度比较差异无统计学意义（P>0.05）。缺氧3、7、10d盐水组、空病毒组、病毒+HSP70组肺组织iNOS表达均强于对照组（P<0.01）,其中缺氧3、7d病毒+HSP70组iNOS表达低于盐水组和空病毒组（P<0.01）,但在盐水组和空病毒组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;缺氧10d,病毒+HSP70组iNOS表达低于空病毒组（P<0.01）,HPH组间比较差异无统计学意义;缺氧14d时各组间iNOS表达强度比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论:腺病毒介导的HSP70在大鼠肺组织高效表达后,降低HIF-1a及其下游靶基因ET-1、iNOS的表达,降低缺氧性肺动脉高压新生Wistar大鼠的肺动脉压力,减轻肺血管重塑。
王乐[10]（2015）在《缺氧性肺动脉高压新生大鼠体内热休克蛋白70对HIF-1α的阻断作用研究》文中研究表明目的:1、探讨腺病毒介导热休克蛋白70（HSP70）基因转染液的制备。2、探讨腺病毒介导HSP70基因转染到新生大鼠肺组织内最佳转染途径、转染量和转染时间。3、探讨通过基因转染技术,观察经HSP70基因转染后缺氧性肺动脉高压（HPH）新生大鼠的肺动脉压力、肺血管结构及重塑指标改变的情况,以及肺组织中HSP70、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及其下游靶基因内皮素-1（ET-1）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达情况,了解HSP70对HPH新生大鼠肺动脉压力、肺血管重塑的作用,进一步推断HSP70能否通过下调HIF-1α及其下游靶基因的表达,进而延缓新生大鼠HPH的发生发展,为临床防治该病提供理论依据。方法:1、通过pHBAd-MCMV-GFP-HSP70质粒的构建,利用双质粒共转染293细胞,同源重组产生重组腺病毒,进行毒种的鉴定、生产、纯化及滴度测定。2、（1）将48只新生大鼠随机分为A:尾静脉注射组,B:腹腔注射组,将5ul×1010 PFU/ml腺病毒HSP70（Ad-HSP70）转染液注入新生大鼠体内,分别在观察时间点将各组新生大鼠处死,留取肺组织标本,用荧光显微镜判断HSP70转染到新生大鼠肺组织的途径。（2）将54只新生大鼠随机分为:空病毒组,病毒HSP70组,对照组,分别给予2.5ul×1010PFU/ml、5ul×1010 PFU/ml、10ul×1010 PFU/ml的转染液剂量,经过尾静脉注射转染后72h将各组新生大鼠处死,留取肺组织标本,用RT-PCR及Western blot检测HSP70的mRNA及蛋白质水平,确定腺病毒介导的HSP70转染的最佳转染量。（3）确定腺病毒介导HSP70转染的最佳途径、最佳转染量后,按照不同转染时间将48只新生大鼠随机分为24h组,48h组,72h组,96h组,同时设立盐水空白对照组,按照时间点处死新生大鼠,留取肺组织标本,采用RT-PCR及Western blot检测HSP70的mRNA及蛋白质水平,明确HSP70在新生大鼠肺组织内表达的最佳转染时间。3、将128只新生大鼠随机分为2组:HPH组（H）和空白对照组（C）。H组:根据转染液不同再分为H1:盐水组、H2:空病毒组（pHBAd-MCMV-GFP）、H3:病毒HSP70组（pHBAd-MCMV-GFP-HSP70）。H组新生大鼠注射病毒转染液或无菌盐水后立即建立HPH模型,并分别于缺氧3d、7d、10d、14d和对照组同步进行观察。（1）在不同观察时间点测定肺动脉压力（mPAP）,比较各组mPAP的变化情况,了解腺病毒介导的hsp70是否有降低mpap的作用。（2）用光学显微镜、电子显微镜分别观察肺小动脉组织结构及肺血管超微结构变化,测定肺小血管重塑指标（mt%、ma%）。（3）用免疫组化、rt-pcr和westernblot法分别检测不同时间点各组新生大鼠肺组织中hsp70、hif-1α、et-1、inos的mrna及蛋白质的表达情况,比较四种因子在各组之间的差异,从而进一步推断腺病毒介导的hsp70阻断hif-1α及其靶基因在新生大鼠hph中的作用。结果:1、重组质粒phbad-mcmv-gfp-hsp70序列测定与genebank的登记序列一致,确定为hsp70基因。2、（1）尾静脉注射组新生大鼠48小时荧光显微镜下见少量绿色荧光信号标记蛋白,72及96小时见明显的绿色荧光信号标记蛋白。（2）5ul×1010pfu/mlad-hsp70转染剂量的新生大鼠肺组织内hsp70mrna及蛋白质表达量增高。（3）转染新生大鼠72h后,新生大鼠肺组织内hsp70mrna及蛋白质表达量较24h、48h增高（p<0.05）,与96h比较差异无统计学意义（p>0.05）。3、（1）h1组与h2组缺氧3d、7d、10d、14d的mpap水平与对照组比较显着增高,差异有统计学意义（p<0.05）;h3组缺氧3d、7d、10d的mpap水平与对照组比较差异无统计学意义（p>0.05）,缺氧14d的mpap水平与同日龄h1及h2组比较差异无统计学意义（p>0.05）。（2）he、vg染色光镜下观察h3组缺氧3d、7d、10d无肺血管重塑,14d肺血管重塑较轻;电镜下肺超微结构显示h3组缺氧7d、10d、14d肺血管重塑减轻;缺氧7d、10d各组间肺血管ma%、mt%比较差异有统计学意义（p<0.05）,c组及h3组与h1、h2组比较差异有统计学意义（p<0.05）;缺氧14d各组间肺血管ma%、mt%比较差异有统计学意义（p<0.01）,c组与hph各组间比较差异有统计学意义（p<0.01）。（3）免疫组化显示对照组肺组织中hsp70、hif-1α、et-1及inos免疫反应强度呈阴性,hph各组hsp70、hif-1α、et-1及inos免疫反应强度呈不同程度的阳性反应,其表达多见于肺血管壁内皮细胞质与细胞上;缺氧3d、7d、10d各组间hsp70免疫组化表达强度比较差异有统计学意义（p<0.05）,hph各组与c组比较表达增强差异有统计学意义（p<0.01）,h3组与h1、h2组比较表达增强差异有统计学意义（p<0.01）;缺氧3d、7d、10d各组间hif-1α、et-1及inos的免疫组化表达强度比较差异有统计学意义（p<0.01）,hph各组均表达增强,h3与h1、h2组比较表达降低,差异有统计学意义（p<0.01）。（4）缺氧3d、7d、10dhsp70的mrna表达各组间比较差异有统计学意义（p<0.01）,hph各组与c组比较表达增强差异有统计学意义（p<0.05）,h3组与h1、h2组比较表达增强差异有统计学意义（p<0.05）,14dhph组与c组比较差异有统计学意义（p<0.05）;缺氧3d、7d、10d各组间hsp70蛋白质表达比较差异有统计学意义（p<0.05）,h1、h2组与c组比较表达增强差异有统计学意义（p<0.01）,h3组与h1、h2组比较表达增强差异有统计学意义（p<0.05）。（5）缺氧3d、7d、10dhif-1αmrna、et-1mrna、iNOSmRNA表达各组间比较差异有统计学意义（P<0.01）,H1、H2组与C组比较表达增强差异有统计学意义（P<0.05）,H3组与H1、H2组比较表达降低差异有统计学意义（P<0.05）;各组间HIF-1α、ET-1、iNOS的蛋白质比较差异有统计学意义（P<0.05）,H3组与H1、H2组比较表达降低差异有统计学意义（P<0.05）。缺氧14d各组间iNOSmRNA表达比较差异有统计学意义（P<0.05）,HPH各组与C组比较表达增强差异有统计学意义（P<0.01）。结论:1、成功构建了HSP70基因重组腺病毒载体及制备高滴度的重组腺病毒。2、确定腺病毒介导的HSP70在新生大鼠体内转染的最佳途径:尾静脉,转染量:5ul×1010PFU/ml及转染后最早观察时间点:72 h。3、缺氧应激可以引起内源性HSP70表达,腺病毒介导的HSP70可以提高HPH新生大鼠肺组织外源性HSP70的表达,下调HIF-1α、ET-1、iNOS的表达,降低肺动脉压力,减轻肺血管重塑,可以成为治疗新生儿HPH的一种新策略。
二、缺氧性肺动脉高压大鼠肺iNOS表达的实验研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、缺氧性肺动脉高压大鼠肺iNOS表达的实验研究（论文提纲范文）
（1）17-β雌二醇通过HIF1α/IL6/STAT3信号通路调控低氧性肺动脉高压的巨噬细胞表型（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 雌激素和肺动脉高压的关系 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）谷氨酰胺诱导热休克蛋白70在缺氧性肺动脉高压新生大鼠中的保护作用研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 仪器与试剂 |
| 1.3 分组及新生大鼠缺氧性肺动脉高压模型建立 |
| 1.4 新生大鼠肺动脉压力监测 |
| 1.5 肺动脉组织结构及肺血管重塑指标变化监测 |
| 1.6 HSP70、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、内皮素-1(ET-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在肺组织中蛋白质表达 |
| 1.7 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组新生大鼠mPAP的变化比较 |
| 2.2 各组新生大鼠肺血管形态及重塑指标的改变 |
| 2.3 各组HSP70、HIF-1α、ET-1、iNOS在新生大鼠肺组织中的蛋白质表达比较 |
| 2.3.1 各组HSP70在新生大鼠肺组织中的蛋白质表达比较 |
| 2.3.2 各组HIF-1α在新生大鼠肺组织中的蛋白质表达比较 |
| 2.3.3 各组ET-1在新生大鼠肺组织中的蛋白质表达比较 |
| 2.3.4 各组iNOS在新生大鼠肺组织中的蛋白质表达比较 |
| 3 讨 论 |
（3）诱导型一氧化氮合酶在牦牛和黄牛肺组织中的表达分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 青藏高原环境及其特点 |
| 1.2 牦牛的简介 |
| 1.3 低氧适应研究现状 |
| 1.4 牦牛的低氧适应性 |
| 1.4.1 牦牛组织结构的低氧适应性 |
| 1.4.2 牦牛生理生化的低氧适应性 |
| 1.4.3 牦牛分子遗传的低氧适应性 |
| 1.5 一氧化氮及其对肺脏的主要作用 |
| 1.5.1 一氧化氮与高原病 |
| 1.5.2 一氧化氮对肺脏的主要作用 |
| 1.6 一氧化氮的合成 |
| 1.6.1 一氧化氮的合成过程 |
| 1.6.2 一氧化氮合酶与一氧化氮 |
| 1.7 诱导型一氧化氮合酶 |
| 1.8 诱导型一氧化氮合酶的应用前景 |
| 1.9 研究目的与意义 |
| 第2章 血液中一氧化氮含量的测定 |
| 2.1 本章引言 |
| 2.2 实验材料与方法 |
| 2.2.1 材料与试剂 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.2.3 数据处理 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第3章 Real-time PCR测定牦牛肺组织iNOS mRNA的表达情况 |
| 3.1 本章引言 |
| 3.2 实验材料与方法 |
| 3.2.1 材料与试剂 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.2.3 结果处理 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 相对荧光定量溶解曲线 |
| 3.3.2 肺组织iNOS mRNA表达量分析 |
| 3.4 讨论 |
| 第4章 蛋白免疫印迹法测定肺组织iNOS蛋白的表达情况 |
| 4.1 本章引言 |
| 4.2 实验材料与方法 |
| 4.2.1 材料与试剂 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.2.3 数据处理 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 蛋白相对表达结果 |
| 4.3.2 蛋白相对表达量结果 |
| 4.4 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（4）丹参酮ⅡA磺酸钠对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 研究背景 |
| 参考文献 |
| 第一部分 丹参酮ⅡA磺酸钠对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的保护性作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 丹参酮ⅡA磺酸钠对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤HIF-1α及炎症因子的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 HIF-1α对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤炎症因子的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 丹参酮ⅡA磺酸钠通过PI3K/AKT信号通路对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤HIF-1α的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 展望与不足 |
| 综述 丹参酮ⅡA横酸钠在肺部疾病中治疗机制进展 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 攻读学位期间科研成果 |
| 致谢 |
（5）西藏芜菁防治缺氧性肺水肿和脑水肿的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩写表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 高原肺水肿(HAPE) |
| 1.1.1 肺动脉高压 |
| 1.1.1.1 交感神经过度活化 |
| 1.1.1.2 一氧化氮(NO)合成不足 |
| 1.1.1.3 内皮素-1(ET-1)过度合成 |
| 1.1.2 肺气血屏障通透性增加 |
| 1.1.3 肺泡清除液体的功能障碍 |
| 1.2 急性高原反应(AMS)与高原脑水肿(HACE) |
| 1.2.1 缺氧条件下脑血流动力学和流变学的变化 |
| 1.2.2 缺氧条件下细胞因子和炎症因子的变化 |
| 1.3 急性高原病(AHAI)的预防措施 |
| 1.3.1 碳酸酐酶抑制剂(如乙酰唑胺) |
| 1.3.2 糖皮质激素(如地塞米松和布地奈德) |
| 1.3.3 β_2肾上腺素能受体激动剂(如硝苯地平和沙美特罗) |
| 1.3.4 磷酸二酯酶抑制剂(如西地那非和他达拉非) |
| 1.3.5 镇痛剂(如布洛芬) |
| 1.3.6 抗氧化剂(如银杏叶和马齿苋等植物提取物) |
| 1.4 本课题目的意义及主要研究内容 |
| 第二章 西藏芜菁有效部位和活性成分预防缺氧性肺水肿的动物试验研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2、材料、试剂与设备 |
| 2.2.1 试验材料与实验动物 |
| 2.2.2 试剂与耗材 |
| 2.2.3 主要仪器与设备 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 n-bu-TT中对香豆酸(CA)及其葡萄糖苷(CAG)的含量测定 |
| 2.3.2 动物试验设计 |
| 2.3.3 其他相关生化指标的分析测试 |
| 2.3.4 肺组织学观察及超微结构分析 |
| 2.3.5 肺组织紧密结合蛋白(Occludin)检测 |
| 2.3.6 数据处理与统计分析 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 n-bu-TT和CA对缺氧性肺水肿的预防作用 |
| 2.4.2 n-bu-TT和CA对血浆NO和ET-1水平的影响 |
| 2.4.3 n-bu-TT和CA对炎症因子的影响 |
| 2.4.4 n-bu-TT和CA对谷胱甘肽抗氧化系统的影响 |
| 2.4.5 实验小鼠肺组织的苏木精-伊红染色观察结果 |
| 2.4.6 实验小鼠肺组织的电镜观察结果 |
| 2.4.7 n-bu-TT和CA对肺组织Occludin蛋白表达水平的影响 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 西藏芜菁有效部位和活性成分预防缺氧性脑水肿的动物试验研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2、材料、试剂与设备 |
| 3.2.1 试验材料与实验动物 |
| 3.2.2 试验试剂与耗材 |
| 3.2.3 主要仪器与设备 |
| 3.3 试验方法 |
| 3.3.1 动物试验设计 |
| 3.3.2 其他相关生化指标的分析测试 |
| 3.3.3 大脑皮层组织学观察及超微结构分析 |
| 3.3.4 大脑皮层中Occludin蛋白水平检测 |
| 3.3.5 数据处理与统计分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 n-bu-TT和CA对缺氧性脑水肿的预防作用 |
| 3.4.2 n-bu-TT和CA对脑组织Na~+-K~+-ATPase和线粒体膜电位的影响 |
| 3.4.3 n-bu-TT和CA对脑组织炎症因子的影响 |
| 3.4.4 n-bu-TT和CA对抗氧化酶活性的作用 |
| 3.4.5 实验小鼠大脑皮层的苏木精-伊红染色观察结果 |
| 3.4.6 实验小鼠大脑皮层的电镜观察结果 |
| 3.4.7 n-bu-TT和CA对大脑皮层Occludin蛋白表达水平的影响 |
| 3.5、本章小结 |
| 第四章 对香豆酸预防缺氧性肺水肿的分子机制研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2、材料、试剂与设备 |
| 4.2.1 试验材料 |
| 4.2.2 试验试剂与耗材 |
| 4.2.3 主要仪器与设备 |
| 4.3 试验方法 |
| 4.3.1 肺微血管内皮细胞的培养 |
| 4.3.2 MTT法测定细胞活力 |
| 4.3.3 透射电镜观察细胞超微结构的变化 |
| 4.3.4 细胞培养上清液中NO和ET-1的释放 |
| 4.3.5 qRT-PCR法检测细胞中相关基因的表达水平 |
| 4.3.6 qRT-PCR法检测肺组织中相关基因的表达水平 |
| 4.3.7 Western blot法检测肺组织中相关蛋白的表达水平 |
| 4.3.8 数据处理与统计分析 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 n-bu-TT和CA对缺氧条件下肺微血管内皮细胞活力的影响 |
| 4.4.2 内皮细胞的电镜观察结果 |
| 4.4.3 CA对内皮细胞培养上清液中NO和ET-1水平的影响 |
| 4.4.4 CA对内皮细胞中HIF-1α、VEGF、iNOS、eNOS和ET-1基因表达的影响 |
| 4.4.5 CA对肺组织中HIF-1α、VEGF、iNOS、eNOS和ET-1基因表达的影响 |
| 4.4.6 CA对肺组织中HIF-1α、VEGF、iNOS、eNOS、ET-1蛋白表达的影响 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 对香豆酸预防缺氧性脑水肿的分子机制研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2、材料、试剂与设备 |
| 5.2.1 试验材料 |
| 5.2.2 试验试剂与耗材 |
| 5.2.3 主要仪器与设备 |
| 5.3 试验方法 |
| 5.3.1 脑星形胶质细胞培养 |
| 5.3.2 MTT法测定细胞活力 |
| 5.3.3 透射电镜观察细胞超微结构的变化 |
| 5.3.4 qRT-PCR法检测细胞中相关基因的表达水平 |
| 5.3.5 qRT-PCR法检测大脑皮层中相关基因的表达水平 |
| 5.3.6 Western blot法检测大脑皮层中相关蛋白的表达水平 |
| 5.3.7 数据处理与统计分析 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 n-bu-TT和CA对缺氧条件下脑星形胶质细胞活力的影响 |
| 5.4.2 星形胶质细胞的电镜观察结果 |
| 5.4.3 CA对星形胶质细胞中HIF-1α、VEGF、ET-1和AQP4基因表达的影响 |
| 5.4.4 CA对大脑皮层中HIF-1α、VEGF、ET-1和AQP4基因表达的影响 |
| 5.4.5 CA对大脑皮层中HIF-1α、VEGF、ET-1和AQP4蛋白表达的影响 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 主要结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
| 读博期间参与的科研项目 |
| 读博期间相关成果 |
（7）益气化痰祛瘀方介导NO-cGMP-KATP途径对COPD肺血管舒张作用的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1 COPD肺气虚证的理论研究 |
| 1.1 肺气虚证的理论内涵 |
| 1.2 COPD肺气虚证候演变规律 |
| 1.3 肺气虚证的证本质研究 |
| 2 ATP 敏感性钾通道与COPD肺动脉高压相关性研究概况 |
| 2.1 钾通道的抑制是联系缺氧与肺血管收缩的关键环节 |
| 2.2 K_ATP通道是COPD肺动脉高压等多种疾病的治疗学靶点 |
| 2.3 NO通路对K_ATP通道的调节作用 |
| 2.4 存在的问题与对策 |
| 第二部分 实验研究 |
| 研究一 芪白平肺胶囊介导NO-cGMP-K_ATP途径对大鼠离体肺动脉环的舒张作用 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 试剂与药物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 肺动脉环的制备 |
| 2.2 肺动脉环血管功能、内皮功能评价 |
| 2.3 肺动脉环张力测定 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 芪白平肺胶囊对正常大鼠肺动脉环舒张作用的影响 |
| 3.2 L-NAME、ODQ对芪白平肺胶囊舒张大鼠肺动脉环作用的影响 |
| 3.3 GLYB对芪白平肺胶囊舒张大鼠肺动脉环作用的影响 |
| 研究二 芪白平肺胶囊对COPD痰瘀阻肺证大鼠离体肺动脉环的舒张作用 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 试剂与药物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 COPD痰瘀阻肺证病证结合大鼠模型的建立 |
| 2.3 大鼠肺功能检测 |
| 2.4 大鼠动脉血气测定 |
| 2.5 大鼠右心室收缩压、平均肺动脉压和心室肥厚度的测定 |
| 2.6 肺小动脉病理学观察 |
| 2.7 肺动脉环的制备及肺血管功能、内皮功能的评价 |
| 2.8 COPD痰瘀阻肺证大鼠肺动脉环张力测定 |
| 2.9 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 宏观体征观察 |
| 3.2 芪白平肺胶囊对大鼠肺功能参数的影响 |
| 3.3 芪白平肺胶囊对大鼠动脉血气的影响 |
| 3.4 芪白平肺胶囊对大鼠右心室收缩压、平均肺动脉压及心室肥厚度的影响 |
| 3.5 芪白平肺胶囊对大鼠肺小动脉形态学影响 |
| 3.6 芪白平肺胶囊对COPD痰瘀阻肺证大鼠肺动脉环张力的影响 |
| 研究三 芪白平肺胶囊对COPD痰瘀阻肺证大鼠NO-cGMP-K_ATP途径的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 试剂与药物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 COPD痰瘀阻肺证病证结合大鼠模型的建立 |
| 2.3 标本采集与处理 |
| 2.4 Elisa检测大鼠血清c GMP、NO的含量 |
| 2.5 免疫组织化学法检测大鼠肺动脉eNOS、iNOS表达 |
| 2.6 实时荧光定量PCR技术检测Kir |
| 2.8 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 芪白平肺胶囊对大鼠血清NO、cGMP含量的影响 |
| 3.2 芪白平肺胶囊对大鼠肺动脉eNOS表达的影响 |
| 3.3 芪白平肺胶囊对大鼠肺动脉iNOS表达的影响 |
| 3.4 芪白平肺胶囊对大鼠Kir6.1、SUR2B基因mRNA表达的影响 |
| 3.5 芪白平肺胶囊对大鼠sGC、PKG、KIR6.1、SUR2B蛋白表达的影响 |
| 研究四 芪白平肺胶囊介导NO-cGMP-K_ATP途径对低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 试剂与药物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 制备芪白平肺含药血清 |
| 2.2 组织块贴壁法培养原代大鼠PASMCs |
| 2.3 细胞免疫荧光法鉴定大鼠PASCMs |
| 2.4 分组及药物处理 |
| 2.5 MTT法检测PASCMs增殖能力 |
| 2.6 Western blot检测PASMCs中Kir6.1、SUR2B蛋白水平 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 大鼠PASCMs的形态学特征 |
| 3.2 不同时间点各浓度HYXQ对大鼠PASCMs增殖的影响 |
| 3.3 不同时间低氧对PASMCs中Kir6.1 和SUR2B蛋白表达的影响 |
| 3.4 HYXQ对PASMCs中Kir6.1和 SUR2B 蛋白表达的影响 |
| 3.5 GLYB对HYXQ干预PASMCs Kir6.1 和SUR2B蛋白表达的影响 |
| 3.6 L-NAME对HYXQ干预PASMCs Kir6.1 和SUR2B蛋白表达的影响 |
| 第三部分 讨论 |
| 1 治疗COPD肺动脉高压采用“益气化痰祛瘀”治法的依据 |
| 1.1 中医理论分析 |
| 1.2 临床辨证分析 |
| 1.3 益气化痰祛瘀方—芪白平肺胶囊组成及方义分析 |
| 2 COPD痰瘀阻肺证动物模型的建立与评价 |
| 2.1 肺功能评价 |
| 2.2 动脉血气分析 |
| 2.3 血流动力学评价 |
| 2.4 肺血管形态学分析 |
| 3 芪白平肺胶囊可调控NO-cGMP-K_ATP途径舒张肺血管 |
| 3.1 肺动脉血管环的选择 |
| 3.2 芪白平肺胶囊的血管舒张作用与血管内皮功能有关 |
| 3.3 NO-c GMP-K_ATP途径参与芪白平肺胶囊血管舒张作用的调控 |
| 4 芪白平肺胶囊含药血清介导NO-c GMP -K_ATP途径抑制低氧诱导的PASMCs增殖 |
| 4.1 PASMCs增殖与凋亡失衡是COPD肺动脉高压的关键病理环节 |
| 4.2 芪白平肺胶囊含药血清能有效抑制低氧诱导的PASMCs增殖 |
| 4.3 K_ATP通道蛋白的表达具有一定的时间节律性 |
| 4.4 芪白平肺胶囊作为K_ATP通道开放剂受NO调控 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录一 综述 |
| 参考文献 |
| 研究生在学期间发表的论文 |
| 致谢 |
（8）毛蕊花糖苷对高原低氧性肺动脉高压大鼠的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 研究内容与方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 实验仪器 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验动物 |
| 2.方法 |
| 2.1 实验动物与分组 |
| 2.2 血流动力学指标的检测 |
| 2.3 大鼠心脏、肺组织病理学观察 |
| 2.4 大鼠肺组织中NO含量测定 |
| 2.5 大鼠肺组织中TNOS、iNOS和 eNOS活力测定 |
| 2.6 大鼠肺组织中ET-1、VEGF含量测定 |
| 2.7 大鼠肺组织中HIF-1αmRNA表达测定 |
| 2.8 大鼠肺组织中HIF-1α蛋白表达测定 |
| 2.9 统计学分析方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学位论文 |
| 导师评阅表 |
（9）腺病毒介导的人HSP70对HPH新生大鼠HIF-1α及其调节因子和肺血管重塑作用研究（论文提纲范文）
| 导师评阅表 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 研究内容与方法 |
| 1. 研究对象 |
| 1.1. 动物伦理 |
| 1.2. 入选标准 |
| 1.3. 排除标准 |
| 1.4. 样本含量的计算 |
| 2. 主要仪器及试剂 |
| 2.1. 主要仪器 |
| 2.2. 主要试剂 |
| 3. 实验方法 |
| 3.1. 分组 |
| 3.2. 平均肺动脉压力的测定 |
| 3.3. 腺病毒定位在缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺组织判断 |
| 3.4. 肺血管重塑指标的检测 |
| 3.5. 肺组织HSP70、HIF-a、iNOS免疫组化 |
| 3.6. 石蜡切片的制作程序 |
| 3.7. 电镜观察标本的制作 |
| 3.8. HE染色程序 |
| 3.9. VG染色 |
| 3.10. 免疫组化 |
| 4. 质量控制 |
| 4.1. 肺动脉压检测过程中质量控制 |
| 4.2. 标本采集及病理染色过程中的质量控制 |
| 4.3. 实验数据统计分析过程中的质量控制 |
| 5. 统计学分析 |
| 6. 技术路线图 |
| 结果 |
| 1. 腺病毒在缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺组织中的定位 |
| 2. 免疫组化法检测肺组织HSP70的表达及反应强度比较 |
| 3. 腺病毒介导HSP70缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺动脉压力比较 |
| 4. 光学显微镜观察肺血管结构的变化 |
| 5. 电镜下新生大鼠肺动脉超微结构的变化 |
| 6. 肺动脉血管重塑指标比较 |
| 7. 腺病毒介导的HSP70转染至新生大鼠肺组织中HIF-1α、ET-1、iNOS的免疫组化表达强度比较 |
| 7.1. HIF-1α的免疫组化表达强度比较 |
| 7.2. ET-1 的免疫组化表达强度比较 |
| 7.3. iNOS的免疫组化表达强度比较 |
| 讨论 |
| 1. 腺病毒介导的热休克蛋白70在缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺组织中HSP70免疫强度的表达 |
| 2. 腺病毒介导的HSP70对缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺动脉压力的影响 |
| 3. 腺病毒介导的HSP70对缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺血管结构的影响 |
| 4. 腺病毒介导的HSP70对缺氧性肺动脉高压新生大鼠中HIF-1a的影响 |
| 5. 腺病毒介导的HSP70对缺氧性肺动脉高压新生大鼠HIF-1α下游靶基因（ET-1、iNOS）的影响 |
| 6. 本研究创新点 |
| 7. 本研究不足之处 |
| 8. 展望 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（10）缺氧性肺动脉高压新生大鼠体内热休克蛋白70对HIF-1α的阻断作用研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 腺病毒介导HSP70基因载体的构建与鉴定 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 HSP70基因腺病毒载体构建 |
| 1.2 载体及目的基因信息 |
| 1.3 实验流程 |
| 1.4 pHBAd-MCMV-GFP- HSP70重组载体测序结果 |
| 1.5 重组腺病毒HSP70过表达 |
| 1.6 质量控制 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 腺病毒介导的HSP70对新生大鼠体内HSP70表达水平的影响 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 主要仪器及试剂 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 质量控制 |
| 1.5 统计学分析 |
| 1.6 技术路线 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 腺病毒介导的HSP70对缺氧性肺动脉高压新生大鼠体内HIF-1α的阻断作用研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 主要仪器及试剂 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 质量控制 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 缺氧诱导因子-1α 与热休克蛋白70在新生儿缺氧性肺动脉高压的作用研究 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
四、缺氧性肺动脉高压大鼠肺iNOS表达的实验研究（论文参考文献）
- [1]17-β雌二醇通过HIF1α/IL6/STAT3信号通路调控低氧性肺动脉高压的巨噬细胞表型[D]. 吴阿敏. 河北医科大学, 2020(02)
- [2]谷氨酰胺诱导热休克蛋白70在缺氧性肺动脉高压新生大鼠中的保护作用研究[J]. 赵婷,王彦梅,王乐. 新疆医科大学学报, 2019(12)
- [3]诱导型一氧化氮合酶在牦牛和黄牛肺组织中的表达分析[D]. 陈勇豪. 青海大学, 2019(04)
- [4]丹参酮ⅡA磺酸钠对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的作用及机制研究[D]. 钱进先. 苏州大学, 2019(08)
- [5]西藏芜菁防治缺氧性肺水肿和脑水肿的作用及机制研究[D]. 李云虹. 浙江大学, 2019(04)
- [6]热休克蛋白70对缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺的保护作用[J]. 王乐,巴依尔才次克,李明霞. 中华实用儿科临床杂志, 2017(06)
- [7]益气化痰祛瘀方介导NO-cGMP-KATP途径对COPD肺血管舒张作用的机制研究[D]. 朱洁. 湖北中医药大学, 2016(08)
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