一、改良酸性硫氰酸胍-酚-氯仿一步法提取动物组织RNA（论文文献综述）
赵晓丽[1]（2021）在《食源性致病菌和血清中RNA快速提取新方法的研究》文中进行了进一步梳理核糖核酸（RNA）的提取是核酸检测流程的重要步骤,RNA提取时间对核酸检测流程的效率具有很大影响。当前的RNA提取方法时间长、操作复杂、提取过程中容易造成RNA的降解,很大程度上限制了核酸检测的效率。因此亟待研究一种快速、有效的RNA提取新技术,加快核酸检测中的样本前处理时间,从而提升核酸检测效率。甲酰胺具有保护RNA免受降解的作用,并且能将RNA从样本中分离;壳聚糖在p H<6.3时显正电性,可通过静电吸附与显负电性的RNA结合实现RNA的纯化。因此,本文首次提出一种基于甲酰胺分离和壳聚糖-二氧化硅膜纯化的食源性致病菌RNA快速提取方法——FBS/chitosan。以食源性致病菌大肠杆菌为研究对象,使用甲酰胺裂解液分离大肠杆菌中的RNA,再通过壳聚糖修饰的二氧化硅膜将RNA进行纯化,该方案可在15 min内完成大肠杆菌中总RNA的提取。与TRIzol法和商业试剂盒相比,提取过程更简单、快速,并且成本更低,有一定的发展潜力,有望成为需求量日益增加的核酸检测方法的样本快速制备工具。基于固定化的核酸捕获探针与靶标杂交,特异性捕获靶标的核酸提取方法目前得到了一定的应用。但核酸被动杂交过程一般需要2 h,时间较长,而施加一定的电场强度可以加速核酸移动,从而加速杂交。因此,本文首次将电场辅助加速杂交用于mi RNA的快速分离,提出一种超快速的mi RNA提取方案。通过施加+0.5V/-0.2V的交替电场,促进mi RNA与捕获探针加速杂交。再通过-1V负电场将捕获探针与靶标mi RNA的杂交体从电极分离洗脱。整个过程仅需150 s即可完成样本中mi RNA的分离。结果表明,该方法对低丰度的mi RNA具有很高的回收效率,并能用于血清样本中的mi RNA提取,为mi RNA的超快速检测提供了可行的样本前处理方案,对疾病快速诊断具有重要研究意义。
宋利军,田芳,苏芹,路志勇[2]（2016）在《3种骨骼DNA提取方法的应用效果比较》文中研究表明目的对3种方法提取骨骼DNA的效果进行比较,为实际应用中选择方法提供参考。方法应用骨骼孵化液法、DNA Investigator试剂盒法和CTAB法对同一骨骼样本进行脱钙、消化、提取DNA,用紫外分光光度计检测DNA的浓度值;使用Identifilerplus试剂盒进行PCR扩增,3130xl型遗传分析仪检测分型,并用SPSS 19.0软件对各项实验结果进行统计分析。结果 1g骨粉样本经上述3种方法提取,得到的DNA浓度分别为26.53ng/μL±5.47ng/μL、23.63ng/μL±4.56ng/μL、14.93ng/μL±3.88ng/μL;单因素方差分析表明3组数据之间差异性具有统计学意义。PCR扩增后电泳检测结果显示,骨骼孵化液法和DNA Investigator试剂盒法基因座检出率和峰值大致相同,均优于CTAB法。结论本文比较的3种方法均可用于骨骼样本的实际检案,检出率较高的两种方法可作为优选方案。
彭斌,汪丽刚,古勤生[3]（2015）在《甜瓜种子中种传病毒的RT-PCR检测》文中研究指明为了建立葫芦科作物干种子主要种传病毒检测方法,在现有的TRIZOL法、CTAB法等提取植物总RNA方法的基础上进行改良,从富含有多糖的甜瓜干种子中提取高质量的总RNA。建立了18 S r RNA为内参基因的侵染葫芦科作物4种主要种传病毒的两重RT-PCR检测方法。应用改良TRIZOL法分别提取单粒和0.1 g（约20粒）带毒甜瓜种子的总RNA作为检测模板,分别对4种种传病毒进行RT-PCR检测,结果表明可分别从携带4种种传病毒的甜瓜种子上检测到对应的病毒,18 S r RNA基因能够很好的作为内参基因对病毒检测结果进行评估。
辛运超,张玉妥,尚小领[4]（2015）在《细菌生物膜RNA提取方法研究》文中指出高纯度和完整性好的RNA提取是微生物分子生物学研究的重要前提[1]。RNA提取即将细胞破碎裂解,利用相关试剂去除多糖、酚类、蛋白质及DNA等的污染,通过一系列的抽提、洗涤和沉淀,最终获得纯净RNA[2]。细菌生物膜可被形容为包裹在细菌表面的一层由糖和蛋白质等构成的厚厚的、黏性屏障[3],且这些胞外聚合物约占其总生物量的90%[4],严重影响细菌细胞裂解,干扰核酸提取和纯化,增加了RNA提取的
刘芳,官春云[5]（2015）在《富含多酚类植物RNA提取的研究进展》文中研究指明植物体内广泛存在多糖、多酚等次生代谢物,由于其易被氧化,且难以与核酸分离,导致了RNA提取困难。针对植物多酚类化合物的结构及生物学特性进行分析,将现有的RNA提取方法进行分类,并对它们的原理及优劣进行了论述与评价。
田胜男,苏静芬,向志光,刘云波[6]（2013）在《两种核酸提取方法对小鼠诺如病毒RNA提取效能的比较》文中认为目的比较两种核酸提取方法对小鼠诺如病毒RNA的提取效能。方法用Trizol提取法和QIAamp Viral RNA Mini Kit提取法分别提取感染小鼠诺如病毒（Murine Norovirus,MNV）的小鼠小肠组织样品RNA和细胞培养物RNA,测定RNA浓度;用MNV特异的引物对分离的核酸样品进行一步法RT-PCR扩增。结果Trizol提取法提取小肠组织的RNA浓度高于QIAamp Viral RNA Mini Kit提取法;QIAamp Viral RNA Mini Kit提取得到的细胞培养物RNA浓度高于Trizol提取法。经QIAamp Viral RNA Mini Kit提取的两种核酸样品均能扩增出特异条带,而Trizol提取的核酸样品未见特异条带。结论在MNV的检测中,QIAamp Viral RNA Kit更适合组织样品中MNV病毒核酸的提取。
王伟,李立芹,邹雪,王西瑶[7]（2013）在《马铃薯块茎总RNA提取方法比较》文中指出以马铃薯普通栽培品种"米拉"块茎为材料,对Trizol法、改良Trizol法、Logeman法和改良异硫氰酸胍法提取的总RNA进行比较与分析。结果显示,Trizol法提取的总RNA含有轻微蛋白质污染,经过改良后可完全除去,但成本高适合小量快速提取;Logeman法和改良异硫氰酸胍法均可提取得到高质量的RNA,而且成本较低适合大量提取。
吴智艳,叶静云,程珊,闫训友[8]（2012）在《阿魏侧耳菌丝体RNA提取方法的比较与研究》文中研究表明采用一步法、异硫氰酸胍—巯基乙醇联合变性法和STE法3种方法,分别对阿魏侧耳总RNA的提取效果进行比较。结果表明,一步法难以提取RNA,异硫氰酸胍—巯基乙醇联合变性法提取RNA效果不理想,存在蛋白污染,这2种方法不适于富含多糖的阿魏侧耳总RNA的提取;STE法提取阿魏侧耳总RNA质量高、完整性好、成功率高,经琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计检测,提取的总RNA具有清晰的28S,18S,5S三条带,且28S的亮度是18S的2倍左右,OD260/OD280比值为1.8～2.0,可作为阿魏侧耳总RNA提取的首选方法。用此方法来提取阿魏侧耳液体发酵不同时期的RNA,可以满足进一步分子生物学研究的要求。
张洁[9]（2011）在《一种改良的真菌总RNA提取方法》文中认为以棉花黄萎病菌株VD8为试材,利用改良的CTAB提取RNA方法,应用LiCl选择性沉淀RNA,减少沉淀时间,在醋酸钠条件下用异丙醇祛除多糖,结果表明,利用该方法从富含多糖的黄萎病菌菌丝中获得了质量较好的总RNA,缩短了提取时间。
郭俊良,胡靖扬,高顺玉[10]（2011）在《昆明小鼠不同组织RNA提取方法的比较》文中认为利用改良的异硫氰酸胍法、改良的SDS法和改良的TRlpure试剂盒法对昆明小鼠心脏、肝脏以及肾脏进行组织总RNA的提取,比较其提取效果,结果显示,试剂盒提取效果普遍明显优于其它方法且适用于肝脏总RNA的提取,传统方法的改良适用于肾脏总RNA的提取,心脏总RNA的提取效果均不理想。
二、改良酸性硫氰酸胍-酚-氯仿一步法提取动物组织RNA（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、改良酸性硫氰酸胍-酚-氯仿一步法提取动物组织RNA（论文提纲范文）
（1）食源性致病菌和血清中RNA快速提取新方法的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 核酸简介 |
| 1.1.1 RNA的特点 |
| 1.1.2 RNA提取的重要性 |
| 1.2 传统RNA提取方法概述 |
| 1.2.1 物理提取法 |
| 1.2.2 强变性剂法 |
| 1.2.3 TRIzol试剂快速提取法 |
| 1.2.4 CTAB法 |
| 1.2.5 SDS法 |
| 1.3 新型RNA提取方法研究进展 |
| 1.3.1 磁性微球法 |
| 1.3.2 离心柱法 |
| 1.3.3 硅质吸附法 |
| 1.3.3.1 多聚-L-赖氨酸-二氧化硅复合材料 |
| 1.3.3.2 PDDA-二氧化硅复合材料 |
| 1.3.3.3 壳聚糖-二氧化硅复合材料 |
| 1.3.4 甲酰胺法 |
| 1.3.5 基于杂交的特异性RNA捕获装置 |
| 1.4 本论文的研究内容与意义 |
| 第二章 基于甲酰胺分离和壳聚糖-二氧化硅膜纯化的 RNA 快速提取的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 仪器与试剂 |
| 2.2.2 细菌的培养 |
| 2.2.3 甲酰胺裂解液分离细菌RNA |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳 |
| 2.2.5 壳聚糖对二氧化硅膜的修饰 |
| 2.2.6 壳聚糖修饰的二氧化硅膜用于RNA纯化 |
| 2.2.7 壳聚糖-二氧化硅膜结合能力的评估 |
| 2.2.8 使用其他方法进行RNA分离或纯化 |
| 2.2.8.1 使用RNAsnapTM方法对RNA进行分离 |
| 2.2.8.2 使用Trans Zol Up Plus RNA Kit对 RNA进行提取 |
| 2.2.8.3 使用High Pure RNA Isolation Kit对 RNA进行提取 |
| 2.2.8.4 使用异丙醇沉淀法对RNA进行纯化 |
| 2.2.9 提取RNA的酶促反应评估 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 FBS/chitosan核酸提取方案的操作流程 |
| 2.3.2 基于甲酰胺的裂解液体系优化 |
| 2.3.2.1 甲酰胺的浓度优化 |
| 2.3.2.2 EDTA的浓度优化 |
| 2.3.2.3 β-巯基乙醇的浓度优化 |
| 2.3.3 裂解条件优化 |
| 2.3.3.1 反应温度的优化 |
| 2.3.3.2 反应时间的优化 |
| 2.3.4 壳聚糖-二氧化硅膜纯化RNA性能的评估 |
| 2.3.4.1 二氧化硅膜的扫描电镜 |
| 2.3.4.2 壳聚糖-二氧化硅膜纯化RNA的可行性 |
| 2.3.4.3 壳聚糖-二氧化硅膜对RNA的吸附载量 |
| 2.3.5 壳聚糖-二氧化硅膜纯化RNA用于酶促反应 |
| 2.3.5.1 壳聚糖-二氧化硅膜纯化的RNA用于RT-PCR |
| 2.3.5.2 壳聚糖-二氧化硅膜纯化的RNA用于q RT-PCR |
| 2.3.6 FBS/chitosan与其他提取方法的比较 |
| 2.3.6.1 FBS/chitosan与其他提取方法的提取质量比较 |
| 2.3.6.2 FBS/chitosan与其他提取方法的扩增比较 |
| 2.3.6.3 FBS/chitosan提取的RNA用于基因表达水平的检测 |
| 2.3.6.4 FBS/chitosan与其他提取方法的参数比较 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 基于电场辅助杂交的 RNA 提取方案的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 仪器与试剂 |
| 3.2.2 裸电极的制备 |
| 3.2.3 DNA捕获探针的固定化 |
| 3.2.3.1 捕获探针的活化 |
| 3.2.3.2 捕获探针的固定化 |
| 3.2.4 电化学检测设置 |
| 3.2.5 电场辅助DNA-RNA杂交用于miRNA提取 |
| 3.2.5.1 电场辅助DNA-RNA杂交 |
| 3.2.5.2 电场辅助miRNA的分离 |
| 3.2.6 采用RT-qPCR和 ASEA评估提取效果 |
| 3.2.6.1 RT-qPCR扩增miRNA |
| 3.2.6.2 ASEA扩增 |
| 3.2.7 与其他mi RNA提取方法的对比 |
| 3.2.7.1 吸附柱法提取miRNA |
| 3.2.7.2 TRIzol法提取miRNA |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 基于电场辅助杂交提取RNA的原理 |
| 3.3.2 电势辅助杂交提取miRNA的可行性验证 |
| 3.3.2.1 电场辅助杂交提取miRNA的表征 |
| 3.3.2.2 电场辅助杂交提取miRNA的 RT-qPCR |
| 3.3.3 电场辅助杂交提取mi RNA的条件优化 |
| 3.3.3.1 电位差及脉冲剖面的优化 |
| 3.3.3.2 脉冲持续时间的优化 |
| 3.3.3.3 电场施加时间的优化 |
| 3.3.3.4 电场辅助杂交体积的优化 |
| 3.3.4 对不同长度靶标提取性能的验证 |
| 3.3.5 生物样本中的应用 |
| 3.3.6 与吸附柱法和TRIzol法的比较 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 附录:论文中使用的缩略词 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
（2）3种骨骼DNA提取方法的应用效果比较（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1. 1 样本来源及前处理 |
| 1. 2 DNA提取 |
| 脱钙 |
| 消化 |
| 纯化 |
| DNA浓度测定 |
| 1. 3 PCR扩增与产物检测 |
| 2 结果 |
| 2. 1 DNA浓度统计学结果 |
| 2. 2 STR基因座检出率 |
| 2. 3 DNA扩增效果 |
| 3 讨论 |
（3）甜瓜种子中种传病毒的RT-PCR检测（论文提纲范文）
| 1材料和方法 |
| 1.1材料 |
| 1.2试剂与溶液配制 |
| 1.3总RNA提取与检测 |
| 1.4引物设计与RT-PCR反应体系 |
| 1.5种子带毒检测应用 |
| 2结果与分析 |
| 2.1不同方法对甜瓜干种子RNA提取质量的影响 |
| 2.2感染4种病毒的叶片的RT-PCR检测 |
| 2.3分别携带4种病毒种子的RT-PCR检测 |
| 3讨论 |
| 4结论 |
（4）细菌生物膜RNA提取方法研究（论文提纲范文）
| 1 常用的细菌生物膜总 RNA 提取方法及特点 |
| 2 常用的细菌生物膜总 RNA 提取试剂盒 |
| 3 总 RNA 提取后分子生物学分析 |
| 4 总 RNA 提取过程中的常见问题及解决方法 |
| 5 小 结 |
（5）富含多酚类植物RNA提取的研究进展（论文提纲范文）
| 1 植物多酚的结构及生物学特性 |
| 2 富含多酚类植物总 RNA 提取方法 |
| 3 沉淀剂对富含多酚类植物 RNA 提取的影响 |
| 3. 1 LiCl |
| 3. 2 乙二醇丁醚 |
| 3. 3 乙醇及异丙醇 |
| 4 总结及展望 |
（6）两种核酸提取方法对小鼠诺如病毒RNA提取效能的比较（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 样本的采集及处理 |
| 1.3 MNV-1细胞培养物的收集 |
| 1.4 病毒RNA的提取 |
| 1.4.1 Trizol提取MNV RNA |
| 1.4.2 QIAamp Viral RNA Mini Kit提取MNV RNA |
| 1.5 RNA提取物的扩增 |
| 1.5.1 引物的合成 |
| 1.5.2 一步法PCR反应 |
| 2 结果 |
| 2.1 两种方法提取RNA浓度的比较 |
| 2.2 一步法PCR电泳结果 |
| 2.3 PCR产物测序结果 |
| 3 讨论 |
（7）马铃薯块茎总RNA提取方法比较（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 Trizol法 |
| 1.2.2 改良Trizol法 |
| 1.2.3 Logeman法 |
| 1.2.4 改良异硫氰酸胍法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 4种方法提取马铃薯块茎总RNA完整性比较 |
| 2.2 4种方法提取马铃薯块茎总RNA纯度比较 |
| 2.3 4种方法提取马铃薯块茎操作程序比较 |
| 3 结论与讨论 |
| 3.1 Trizol法 |
| 3.2 改良Trizol法 |
| 3.3 Logeman法 |
| 3.4 改良异硫氰酸胍法 |
（8）阿魏侧耳菌丝体RNA提取方法的比较与研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 用具的处理 |
| 1.3 RNA的提取方法 |
| 1.4 RNA完整性分析及质量检测[9, 10] |
| 1.5 阿魏侧耳不同时期RNA的提取 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同方法提取RNA完整性检测 |
| 2.2 不同方法提取RNA纯度、浓度的检测 |
| 2.3 阿魏侧耳不同时期RNA的提取结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 不同提取方法结果差异的原因分析 |
| 3.2 RNA提取中如何最大程度的降低RNA降解 |
| 3.3 阿魏侧耳不同时期RNA表达与多糖关系的探讨 |
（9）一种改良的真菌总RNA提取方法（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 方法 |
| 1.4 电泳检测 |
| 1.5 核酸-蛋白分析仪测定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 RNA质量检测 |
| 2.2 核酸-蛋白分析仪测定 |
| 3 讨论 |
四、改良酸性硫氰酸胍-酚-氯仿一步法提取动物组织RNA（论文参考文献）
- [1]食源性致病菌和血清中RNA快速提取新方法的研究[D]. 赵晓丽. 青岛科技大学, 2021(01)
- [2]3种骨骼DNA提取方法的应用效果比较[J]. 宋利军,田芳,苏芹,路志勇. 中国法医学杂志, 2016(01)
- [3]甜瓜种子中种传病毒的RT-PCR检测[J]. 彭斌,汪丽刚,古勤生. 中国瓜菜, 2015(06)
- [4]细菌生物膜RNA提取方法研究[J]. 辛运超,张玉妥,尚小领. 国际检验医学杂志, 2015(02)
- [5]富含多酚类植物RNA提取的研究进展[J]. 刘芳,官春云. 作物研究, 2015(01)
- [6]两种核酸提取方法对小鼠诺如病毒RNA提取效能的比较[J]. 田胜男,苏静芬,向志光,刘云波. 中国比较医学杂志, 2013(09)
- [7]马铃薯块茎总RNA提取方法比较[J]. 王伟,李立芹,邹雪,王西瑶. 江苏农业科学, 2013(01)
- [8]阿魏侧耳菌丝体RNA提取方法的比较与研究[J]. 吴智艳,叶静云,程珊,闫训友. 浙江农业学报, 2012(06)
- [9]一种改良的真菌总RNA提取方法[J]. 张洁. 山西农业科学, 2011(12)
- [10]昆明小鼠不同组织RNA提取方法的比较[J]. 郭俊良,胡靖扬,高顺玉. 楚雄师范学院学报, 2011(03)