一、线粒体在缺血再灌注继发的神经元细胞凋亡中的作用（论文文献综述）
杜欣[1]（2021）在《牛黄及其有效成分对神经血管单元的保护作用研究》文中研究指明目的:观察牛黄及其有效成分对体外脑神经血管单元的保护作用,阐明牛黄及其有效成分治疗缺血性中风的内在生物学机制。方法:1.体外脑神经血管单元模型的建立以及缺氧/复氧模型的建立（1）利用体外原代细胞培养技术,提取大脑皮质神经元、星形胶质细胞和微血管内皮细胞,进行细胞鉴定;（2）利用transwell板将三种细胞共培养,构建体外脑神经血管单元的模型,利用TEER值,判定模型是否成功;（3）采用缺氧1h,复氧24h,构建OGD/R模型,利用TEER值、荧光素钠渗透系数判定模型是否成功。2.牛黄及其有效成分对三种细胞的毒性利用不同浓度的牛黄（Bezoar）、牛磺酸（Taurine）、牛黄熊去氧胆酸（TUDCA）和熊去氧胆酸（UDCA）,作用于神经元、星形胶质细胞和内皮细胞,分别干预24h和48 h,利用CCK8检测细胞活力,检测每种不同浓度的药物对细胞的毒性。3.牛黄及其有效成分对脑神经血管单元的保护作用（1）通过OGD/R模型,检测牛黄、牛磺酸、TUDCA和UDCA的不同剂量对细胞的作用,利用CCK8法检测细胞活力,确定每种药物的最佳剂量;（2）利用药物的最佳剂量进行干预,通过检测血脑屏障的通透性:TEER值、荧光素钠渗透系数和γ-GT;炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β;氧化应激指标SOD、NO、MDA以及神经元凋亡率。（3）牛黄对脑神经血管单元的保护机制研究加入抑制剂LY294002,检测牛黄对细胞的干预是通过PI3K/AKT通路实现的;检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3,金属蛋白酶MMP2、MMP9,紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-5 以及 HIF-1α、VEGF、PI3K、AKT、p-AKT。4.不同配伍组分对脑神经血管单元的保护作用（1）利用OGD/R模型,筛选牛磺酸+牛磺熊去氧胆酸（T+T）,牛磺酸+熊去氧胆酸（T+U）的最佳剂量;（2）利用药物的最佳剂量进行干预,通过检测血脑屏障的通透性:TEER值、荧光素钠渗透系数和γ-GT;炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β;氧化应激指标SOD、NO、MDA以及神经元凋亡率。5.配伍组分牛磺酸和熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制利用T+U的最佳剂量,进行OGD/R的造模,检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3,金属蛋白酶 MMP2、MMP9,紧密连接蛋白 ZO-1、Occludin、Claudin-5 以及 NF-κBp65,p-P65,IKBα,p-IKBα 蛋白表达。6.配伍组分牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制利用T+T的最佳剂量,进行OGD/R的造模,检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3,金属蛋白酶MMP2、MMP9,紧密连接蛋白 ZO-1、Occludin、Claudin-5,CA43、AQP4以及 P38MAPK,P-P38MAPK。结果1.获得了纯度较高的神经元、星形胶质细胞和内皮细胞（1）神经元培养7d后成熟,经MAP2免疫荧光鉴定,纯度大于95%;（2）星形胶质细胞培养7d后成熟,经GFAP免疫荧光鉴定,纯度大于95%;（3）内皮细胞培养7d后成熟,经Ⅷ因子免疫荧光鉴定,纯度大于95%。2.利用transwell,建立了脑神经血管单元的模型（1）该模型的电阻值在3-5天趋于平稳;（2）三细胞共培养,三种细胞的状态和单细胞相比,更佳。3.成功复制OGD/R模型利用缺氧1h,复氧24h,能够成功复制OGD/R模型,和正常组相比,模型组电阻值降低,荧光素钠渗透系数升高,能够进行下一步的实验研究。4.筛选药物毒性利用不用浓度的牛黄、牛磺酸、牛磺熊去氧胆酸和熊去氧胆酸分别干预24h和48h,筛选药物的毒性。5.筛选药物的保护剂量利用无毒性的各种药物浓度,通过OGD/R造模方法,检测细胞活力,筛选出保护作用的最佳剂量。6.牛黄及其有效成分对体外脑神经血管单元的保护作用（1）牛黄及其有效成分降低LDH,升高γ-GT,提高TEER值和降低荧光素钠渗透系数;（2）牛黄及其有效成分减少炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1 β的水平;（3）牛黄及其有效成分降低NO、MDA的水平,升高SOD的水平;（3）牛黄及其有效成分抑制神经元的凋亡;（4）牛黄降低MMP2、MMP9的蛋白表达;（5）牛黄能升高紧密连接蛋白的表达,提高ZO-1、Occludin、Claudin-5的蛋白表达;（6）牛黄通过HIF-α/VEGF,PI3K/AKT通路,发挥保护NVU的作用,牛黄降低HIF-1α、VEGF的蛋白表达水平,升高PI3K、AKT的蛋白表达水平。7.不同配伍组分对脑神经血管单元的保护作用（1）筛选了配伍组分的最佳剂量,T+T的最佳剂量1mM Taurine和1μM TUDCA,T+U的最佳剂量1mM Taurine和1μM UDCA;（2）T+T、T+U有效保护血脑屏障,降低TEER值,降低荧光素钠渗透系数,升高γ-GT;（3）T+T、T+U有效减轻细胞损伤,降低LDH的水平;（4）T+T、T+U有效减轻炎症反正,降低TNF-α、IL-6、IL-1β的值;（5）T+T、T+U有效抑制氧化反应,降低NO、MDA的水平,升高SOD的活力;（6）T+T、T+U抑制神经元的凋亡率。8.配伍组分牛磺酸和熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制（1）T+U抑制神经元的凋亡率;（2）T+U 提高 ZO-1、Occludin、Claudin-5 的蛋白表达;（3）T+U降低MMP2、MMP9的蛋白表达;（4）T+U降低Bax、Caspase-3蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达;（5）T+U降低MyD88、P-P65、P-IKB α的蛋白表达,通过MyD88/NF-κB信号通路发挥脑保护作用。9.配伍组分牛磺酸和牛黄熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制（1）T+T抑制神经元的凋亡率;（2）T+T 提高 ZO-1、Occludin、Claudin-5 的蛋白表达;（3）T+T降低MMP2、MMP9的蛋白表达;（4）T+T降低Bax、Caspase-3蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达;（5）T+U降低AQP4、P38MAPK,升高CX43的蛋白表达。结论（1）牛黄、牛磺酸、TUDCA和UDCA能够减轻炎症反应,降低氧化应激的水平,抑制神经元的凋亡发挥神经保护的作用;（2）牛黄通过HIF-1α/VEGF和PI3K/AKT通路发挥脑保护作用;（3）牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸,牛磺酸和熊去氧胆酸配伍,发挥协同作用,比单独使用牛磺酸药效更好;（4）牛磺酸和熊去氧胆酸1000:1的配伍能够抑制炎症反应,降低氧化应激的水平,保护血脑屏障,抑制神经元的凋亡,能够抑制通路MyD88/NF-κB通路发挥脑保护作用（5）牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸1000:1的配伍能够抑制炎症反应,降低氧化应激,保护血脑屏障,能够抑制P38MAPK通路,发挥脑保护作用;
任真奎[2]（2021）在《LncRNA LOC103692885/miR-187-3p/Seipin轴调控内质网应激、自噬在脑缺血再灌注损伤中的分子机制研究》文中提出背景:缺血再灌注损伤诱导的过度内质网应激、受阻自噬流、细胞凋亡,在缺血性脑卒中病程发展的过程中发挥着不同的作用。过度的内质网应激最终会启动凋亡通路来终止细胞;内质网应激也能诱导自噬流的活化,自噬流受阻一定程度上增加了细胞凋亡的风险。在神经细胞中存在多种长链非编码RNA（Long non-coding RNA,Lnc RNA）的表达,这些lncRNA可能参与调控神经细胞各种表型的变化,但其具体作用机制有待研究。Lnc RNA通过信号（signal）、导向（guide）、诱饵（decoy）、脚手架（scaffold）等多种作用模式发挥功能。Lnc RNA的亚细胞定位决定了其功能模式,细胞质中的Lnc RNA作为一种内源竞争RNA（competing endogenous RNA,ce RNA）调控miRNA的表达与功能,形成Lnc RNA-miRNAm RNA调控网络参与了脑卒中的病理变化。但是,目前对于哪些lncRNA在缺血性脑卒中表达显着变化,具有什么具体的调控功能缺乏系统的研究,因此,深入系统的探究哪些Lnc RNA与脑缺血再灌注损伤病理变化有关,对于寻找脑缺血再灌注损伤的生物标志物和治疗靶标具有重要的意义。目的:（1）通过RNA-seq筛选缺血再灌注损伤中的关键基因,并分析这些基因的功能及其可能参与的通路调控。（2）探究Lnc RNA LOC103692885在缺血再灌注损伤的体内外模型中表达情况,及具体的调控靶点和功能。（3）在缺血再灌注损伤的体内外模型中探究Lnc RNA LOC103692885/miR-187-3p/Seipin调控轴之间的相互调控关系,并阐明其在缺血再灌注损伤中的角色。方法:（1）通过氧糖剥夺再灌注（Oxygen glucose deprivation reperfusion,OGD/R）诱导PC12细胞,体外模拟缺血再灌注损伤,并通过全转录组测序揭示正常对照组与OGD/R组中转录水平的差异;生物信息学对差异表达的基因进行GO和KEGG富集分析,并且用q RT-PCR对测序的结果进行验证。（2）生物信息学挑选出关键的miRNA即miR-187-3p,及其下游的靶基因Seipin,并用双荧光素酶报告基因实验验证两者间的结合关系。（3）大鼠大脑中动脉栓塞/再灌注（middle cerebral artery occlusion and reperfusion,MCAO/R）模型的构建,体内模拟缺血再灌注损伤。并通过q RT-PCR检测miR-187-3p的表达,通过Western blot检测Seipin的表达,通过TTC染色分析脑梗面积,通过神经功能学评分检测损伤情况。（4）在缺血再灌注损伤的体内外模型中过表达和抑制miR-187-3p,通过免疫组化、免疫荧光、q RT-PCR、Western blot,流式细胞术等分子生物学技术检测内质网应激、自噬、凋亡等相关分子的变化。（5）用自噬双标腺病毒感染OGD/R诱导的PC12细胞,然后过表达和抑制miR-187-3p,激光共聚焦观察自噬流的变化。（6）用慢病毒载体对Seipin进行过表达和敲低后,检测内质网应激、自噬、凋亡等相关分子的变化。（7）在Seipin敲低的PC12细胞,同时抑制miR-187-3p的表达,检测内质网应激、自噬、凋亡等相关分子的变化。（8）双荧光素酶报告基因实验验证miR-187-3p的上游lncRNA LOC103692885分子,在OGD/R诱导的PC12细胞、原代神经元和MCAO/R诱导的SD大鼠模型中;首先检测LOC103692885的变化,再通过将过表达lncRNA阴性对照腺病毒（overexpression negative control,OENC）和过表达lncRNA LOC103692885（OE-lncRNA）腺病毒感染PC12细胞及原代神经元,或显微注射到MCAO/R诱导的SD大鼠的海马区探索LOC103692885在体外、体内的作用。（9）在过表达LOC103692885的同时过表达miR-187-3p,检测内质网应激、自噬、凋亡等相关分子的变化。结果:（1）全转录组测序发现了OGD/R组中547个lncRNA上调和156个lncRNA下调;89个miRNA上调和66个miRNA下调;1858个m RNA上调和1095个m RNA下调;差异基因的功能富集分析发现与细胞周期、细胞死亡和应激调节等过程有关;q RT-PCR验证差异表达的基因与测序结果基本一致。（2）在体内外模拟缺血再灌注损伤的模型中:miR-187-3p高表达,Seipin蛋白低表达,脑梗面积扩大,神经功能缺损评分增加,差异具有统计学意义（p<0.05）;miR-187-3p能靶向调节Seipin的表达。（3）在OGD/R诱导的PC12细胞模型中,过表达miR-187-3p加重了内质网应激（与mimics NC组比较,上调了GRP78、p-e IF2α和CHOP关键分子,差异具有统计学意义）,阻碍了自噬流（与mimics NC组比较,自噬体形成减少,LC3-II的表达降低,差异具有统计学意义）,促进了细胞凋亡（与mimics NC组比较,Bax及Cleaved-Caspase3表达均显着升高,差异具有统计学意义）,但抑制miR-187-3p能回复以上效应;在MCAO/R诱导的大鼠模型中,过表达miR-187-3p后,与agomir NC组比较,免疫荧光检测到内质网应激指标GRP78的表达增加,降低了自噬相关指标LC3的表达,促进了细胞凋亡（Bax阳性细胞数,Cleaved-Caspase3阳性细胞数,TUNEL染色阳性细胞数均显着升高,Bcl2阳性细胞数显着降低,差异具有统计学意义）,但抑制miR-187-3p能回复以上效应。（4）对过表达Seipin的PC12细胞进行OGD/R诱导,与阴性对照组相比发现缓解了内质网应激（抑制了GRP78、p-e IF2α和CHOP关键分子的表达,差异具有统计学意义）,抑制了细胞凋亡（Bax及Cleaved-Caspase3表达均显着降低,差异具有统计学意义）;但敲低Seipin起到相反的效应,进一步检测发现自噬流受阻（LC3-II表达降低,p62表达升高）。（5）在Seipin敲低的PC12细胞,同时抑制miR-187-3p的表达,与miR-187-3p inhibitor组相比,发现内质网应激增强（上调了GRP78、p-e IF2α和CHOP关键分子的表达,差异具有统计学意义）、细胞凋亡增加（Bax及Cleaved-Caspase3表达均显着升高,差异具有统计学意义）和自噬流受阻（LC3-II表达降低,p62表达增加,差异具有统计学意义）。（6）lncRNA LOC103692885与miR-187-3p在PC12细胞中共定位,且主要定位在细胞质中。（7）双荧光素酶报告基因实验验证miR-187-3p的上游受到lncRNA LOC103692885的调控;在OGD/R诱导的PC12细胞、原代神经元和MCAO/R诱导的SD大鼠模型中过表达lncRNA LOC103692885,与阴性对照组相比,发现在体外、体内模型中过表达lncRNA LOC103692885能抑制缺血再灌注损伤诱导的过度内质网应激（抑制GRP78、pe IF2α和CHOP关键分子的表达,差异具有统计学意义）,激活自噬（上调LC3-II的表达,差异具有统计学意义）和抑制细胞凋亡（TUNEL染色阳性细胞数减少）。（8）在过表达lncRNA LOC103692885的同时过表达miR-187-3p,抑制了部分lncRNA LOC103692885的神经保护功能。结论:（1）FoxO、p53、Wnt和NF-κB等信号通路可能不同程度的参与了缺血再灌注损伤的调控;q RT-PCR验证差异表达的基因与测序结果基本一致,我们将以本次测序结果为基础,进一步探索缺血再灌注损伤的新靶点。（2）在缺血再灌注损伤中miR-187-3p通过调控ERS、自噬、细胞凋亡发挥着重要的作用。（3）在缺血再灌注损伤中Seipin参与调控ERS、自噬、及凋亡等生物学过程。（4）回复实验证明,在缺血再灌注损伤中miR-187-3p对ERS、自噬、细胞凋亡的调控依赖于Seipin的存在。（5）在Seipin敲低的PC12细胞中自噬激活剂（Rapamycin）的功能受到一定的限制,说明Seipin在自噬的激活中可能处于关键位置。（6）lncRNA LOC103692885竞争性结合miR-187-3p,减少miR-187-3p含量从而引起靶蛋白Seipin表达上调,促进Seipin发挥生物学效应:抑制过度活化的ERS、促进自噬,从而缓解细胞凋亡。
李振兴[3]（2020）在《颅脑损伤后lncRNA-TBIAT在氧化应激及细胞凋亡中的作用机制研究》文中提出研究背景创伤性颅脑损伤（Traumatic brain injury,TBI）致死、致残率高,是全球性的公共卫生问题。TBI包括原发性损伤和继发性损伤,其中继发性脑损伤与TBI后出现蛋白编码基因表达的改变、调节各种病理生理过程有关,包括神经兴奋性毒性、氧化应激、神经炎症、细胞凋亡等。虽然TBI的病理生理研究取得了快速的发展,但是其潜在的分子机制尚不完全清楚。TBI后基因组学的研究是颅脑创伤走向精准医疗的重要方向之一。近年来,长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）逐渐被发现能够在表观遗传学修饰、转录和转录后翻译等水平上与DNA、RNA和蛋白质结合,在中枢神经系统损伤中扮演着多种复杂的角色,并可能成为诊断、评估、治疗和预后的生物标志物。然而目前围绕lncRNAs与TBI的研究还相对较少,lncRNA具体参与TBI的发生发展过程也尚不完全清楚。针对lncRNAs和TBI的研究能够从基因组学角度进一步阐明继发性脑损伤的病理生理机制,也有助于研发特异性的靶向药物。研究目的（一）鉴定和筛选TBI后差异表达的lncRNAs,mRNAs和miRNAs,并进行生物信息学分析;（二）构建氧化应激神经细胞模型,明确特定lncRNAs在体外模型中的表达情况;（三）明确lncRNA-TBIAT调控神经细胞氧化应激及细胞凋亡的作用机制。研究方法（一）大鼠TBI后皮层组织lncRNAs、mRNAs和miRNAs的表达改变将16只SD大鼠随机分为TBI组（n=8）和对照组（n=8）。麻醉后,用液压打击模型装置构建大鼠TBI模型。损伤后取大鼠左侧皮层组织,其中TBI组和对照组各取4个样本抽提RNA进行高通量测序;其余样本在-80℃冰箱保存后,用于q PCR验证。取适量大鼠左侧皮层组织样品,抽取总RNA。将RNA片段化、纯化及文库质检,进行PCR扩增,使用Illumina测序仪进行测序。测序数据数据进行处理和基因组比对,鉴定lncRNAs,mRNAs和miRNAs表达谱。根据p值小于0.05且差异倍数大于2的筛选条件鉴定差异表达的lncRNAs,mRNAs和miRNAs。挑选差异表达基因进行荧光定量PCR验证是否跟测序结果一致。进一步通过GO和KEGG富集分析,对差异基因的功能进行描述。构建lncRNAs-mRNAs共表达网络、lncRNAs-miRNAs-mRNAs互作网络以及lncRNA与转录因子关联网络,综合分析差异表达的lncRNAs在TBI中的调控作用。（二）TBI后凋亡变化及特定lncRNAs在氧化应激细胞模型中的表达大鼠TBI后行Western blot检测凋亡标志蛋白的变化。用H2O2诱导大鼠神经细胞株（PC-12,Manassas,VA,USA）构建体外模型,分别设100μmol/L,200μmol/L,400μmol/L H2O2处理组。采用CCK-8实验筛选H2O2有效作用浓度。处理氧化应激模型细胞0,3,6,12,24 h后,通过试剂盒检测过氧化氢酶（CAT）、活性氧（ROS）,超氧化物歧化酶（SOD）含量,进行氧化应激水平的检测。在确定了最合适的H2O2的浓度以及处理的最佳时间后,通过q PCR检测特定的lncRNAs在氧化应激细胞模型中的表达水平。把在体内和体外均差异表达的lncRNA NONRATT017220.2命名为lncRNA-TBIAT,利用Targetscan数据库与miRTar Base数据库预测可能调控的miRNAs,以便于进一步机制验证。（三）lncRNA-TBIAT调控神经细胞氧化应激及凋亡的作用机制研究PC-12细胞用于细胞转染实验研究。设置正常对照组,阴性对照组,siRNA干扰组。转染前需准备质粒,待细胞生长达60%融合时转染siRNA-lncRNA-TBIAT。q PCR验证siRNA-lncRNA-TBIAT的干扰效果,接着CCK-8检测敲低lncRNA-TBIAT后对细胞活性的影响。利用流式细胞术检测细胞凋亡情况,接着通过荧光显微镜检测ROS水平,通过CAT和SOD活性检测试剂盒检测CAT和SOD的活性的变化。通过双荧光素酶报告和AGO2实验检测lncRNA-TBIAT是否吸附miR-124-3p。敲低lncRNA-TBIAT后检测miR-124-3p的inhibitor和mimic对氧化应激细胞模型中lncRNA-TBIAT表达调控作用、细胞活性、细胞凋亡和氧化应激的影响。利用双荧光实验,验证miR-124-3p与基因Pim-1的靶向结合,并通过Western blot实验检测miR-124-3p对Pim-1蛋白的表达的调控作用。研究结果（一）大鼠TBI后皮层组织lncRNAs、mRNAs和miRNAs的表达根据为p<0.05且差异倍数大于2的筛选差异条件,筛选出的差异lncRNA数量为464,其中上调和下调的基因数量分别是249和215。检测到的差异基因mRNAs数量为537个,其中上调和下调的基因数量分别是467和70。所检测到的差异miRNA数量为25,其中上调和下调的基因数量分别是5和20。各挑选了6个lncRNA、mRNA和miRNA进行定量q PCR分析,表达趋势与测序结果一致。GO和KEGG通路分析差异性的基因可能与JAK-STAT信号通路以及氧化应激、炎症反应等多种病理生理过程有关。根据差异表达的lncRNAs,miRNAs和mRNA构建了lncRNAs-mRNAs共表达网络、lncRNAs-miRNAs-mRNAs互作网络以及lncRNA与转录因子关联网络,表明了差异表达的lncRNAs通过不同方式在TBI中的调控作用。（二）TBI后细胞凋亡变化及特定lncRNAs在氧化应激细胞模型中的表达根据TBI后大鼠皮层组织不同时间Western blot检测结果,Caspase1、Caspase3、Cleaved-Caspase3、Bax的表达水平整体趋势呈时间依赖性升高。200μmol/L浓度的H2O2对PC-12细胞活性的影响显着,且24 h时没有对细胞造成过量损伤凋亡。所以选择200μmol/L的H2O2构建氧化应激细胞模型。氧化应激模型细胞的CAT、SOD水平随时间的增长逐步降低,ROS荧光强度显着增高,说明氧化损伤的程度增加。q PCR检测了lncRNA NONRATT017220.2（命名为lncRNA-TBIAT）等lncRNA在细胞模型组表达升高,与测序结果一致。lncRNA-TBIAT靶基因为Pim-1,根据GO和KEGG功能富集的结果,lncRNA-TBIAT与JAK-STAT通路有关,因而我们预测lncRNA-TBIAT可能与TBI后的氧化应激有关。根据Targetscan数据库和miRTar Base数据库预测结果,miR-124-3p可能是lncRNA-TBIAT及Pim-1调控的miRNA。（三）lncRNA-TBIAT通过miR-124-3p/Pim-1调控神经细胞氧化应激及凋亡敲低lncRNA-TBIAT后,siRNA-LncRNA-TBIAT组的lncRNA-TBIAT的表达水平显着降低,细胞活性显着降低,细胞凋亡率显着增加,ROS水平显着提高,CAT和SOD的活性均减弱。双荧光素酶报告和AGO2实验证实lncRNA-TBIAT可以吸附miR-124-3p。敲低lncRNA-TBIAT后,miR-124-3p inhibitor组细胞活性提高,细胞凋亡率下降,氧化应激水平下降;而miR-124-3pmimic组的细胞活性降低,细胞凋亡率增加,氧化应激水平增加。过表达miR-124-3p后miR-124-3p表达水平显着增加,基因Pim-1表达水平显着降低。利用双荧光实验,验证miR-124-3p与基因Pim-11的靶向结合。Western blot实验验证了过表达miR-124-3p抑制了PC-12细胞中的Pim-1蛋白的表达水平。研究结论TBI后脑皮层组织有明显的ln RNAs,mRNAs和miRNAs表达谱改变。本研究筛选并确定了目的基因lncRNA-TBIAT,发现其对神经细胞的氧化应激损伤可能具有保护性作用,抑制lncRNA-TBIAT会引起氧化应激细胞模型细胞活性降低、氧化应激加重,细胞凋亡率增加。LncRNA-TBIAT是通过吸附miR-124-3p调节Pim-1的表达在氧化应激和细胞凋亡中发挥调控作用的。
席秋江[4]（2020）在《Cathepsin B通过Bid与JNK信号通路形成信号回路对大鼠脑缺血再灌注细胞凋亡的影响》文中研究表明目的:组织蛋白酶B（Cathepsin B）是溶酶体内主要组织蛋白酶之一,而C-Jun氨基末端激酶（C-Jun N-terminal kinase,JNK）是Rho相关卷曲螺旋形成的蛋白激酶（Rho-associated coiled-coil forming,ROCK）下游的蛋白,在缺血再灌注介导细胞凋亡过程中,这两种蛋白起着非常重要的作用。探讨大鼠脑缺血再灌注中Cathepsin B与JNK信号通路的关系,阐明大鼠脑缺血再灌注中溶酶体介导神经细胞凋亡的机制。方法:将10-12周龄,体重在240-280克的健康雄性SD鼠随机分成假手术组、模型组（M组）、Cathepsin B抑制剂（CBI）组、JNK抑制剂（JNKI）组。采用改良Longa线栓法制作大脑中动脉（middle cerebral artery,MCA）缺血再灌注的动物模型。模型组、CBI和JNKI干预组大鼠分别于缺血2小时后设七个再灌注时间点:0min、15min、30min、2h、6h、12h和24h。各大组之间的比较选择Cathepsin B、JNK、Bid三种蛋白表达峰值时间点进行比较。CBI组在模型复制前1h脑室灌注Cathepsin B抑制剂CA-074ME（10μg/5μl1%DMSO）;JNKI组在模型复制前半小时侧脑室注入JNK抑制剂ZSP600125（30μg/5μl1%DMSO）。而假手术组和模型组分别给予5μl1%DMSO作为对照。采用TTC染色法观察及分析上述时间点脑组织缺血梗死情况;采用Tunel法检测受损脑组织细胞凋亡;采用Westernblot检测Cathepsin B、JNK和Bid等蛋白在脑缺血再灌注损伤时的表达水平;采用免疫共沉淀检测Cathepsin B、JNK和Bid的相互作用,用免疫荧光双标检测与分析Cathepsin B、JNK和Bid两两间蛋白表达的相关性和共定位关系。结果:1.TTC染色结果显示,缺血再灌注24小时后假手术组无明显的脑组织缺血梗死病灶,呈红色;而模型组可见明显的缺血梗死病灶,可见大片的缺血区域,呈苍白色,与假手术组相比较,具有显着统计学差异（P<0.001）;与假手术组相比较,缺血再灌注24小时后CBI组和JNKI组均可见缺血区域,呈苍白色;而与模型组相比较,CBI组和JNKI组的梗死灶体积均明显减少,差异均具有显着统计学意义（P<0.001,P<0.001）。2.Tunel染色结果显示,假手术组脑组织内未见或仅见少量凋亡细胞,模型组的大脑缺血侧视前区,从缺血再灌注开始可见大量的凋亡细胞,且凋亡细胞随着再灌注时间延长而增加,再灌注12h达到顶峰,与假手术组相比较,模型组缺血再灌注时细胞凋亡显着增加,具有显着统计学差异（P<0.05）,但模型组再灌注12h和24h凋亡指数相比无统计学差异。与模型组相比较,CBI组和JNKI组均可减少缺血再灌注24小时的凋亡细胞,且均具有统计学差异（P<0.05,P<0.05）。3.Western blot结果显示,与假手术组相比较,在缺血再灌注模型组的脑组织中Cathepsin B蛋白表达增加,且在15min和6h时出现两个时间点的表达高峰。在缺血再灌注模型组中,缺血再灌注30min即检测到JNK3蛋白表达增加,再灌注6h时JNK3蛋白表达至高峰水平,再灌注12h、24h开始呈下降趋势。模型组脑组织中Bid蛋白表达也明显增加,且其表达早于Cathepsin B蛋白,缺血再灌注15min时即可检测到Bid蛋白表达增多,再灌注2h时至高峰水平,随后逐渐下降。4.与模型组相比,在Cathepsin B、JNK3与Bid蛋白表达高峰相对应时间点,CBI组脑组织中Cathepsin B、JNK3与Bid蛋白表达均明显减少,差异均具有统计学意义（P<0.05,P<0.05,P<0.05）。5.Western blot结果也显示,在Cathepsin B、JNK3与Bid蛋白表达高峰相对应时间点,与模型组相比较,JNKI组脑组织中JNK3蛋白表达增加受易抑制,具有统计学差异（P<0.05）。JNKI组中Cathepsin B和Bid蛋白表达增加也受到抑制,与模型组相比较,均具有统计学差异（P<0.05,P<0.05）。6.Cathepsin B与Bid免疫荧光双标结果显示,假手术组可见少量Cathepsin B与Bid表达,且两者主要共定位于同一神经元。与假手术组相比,缺血再灌注组模型组中,Cathepsin B与Bid蛋白共定位表达在再灌注6h显着增多。JNK3与Bid免疫荧光双标结果显示,在假手术组可见少量JNK3与Bid表达,且两者共定位于同一神经元,但缺血再灌注组模型组与假手术组相比,JNK3与Bid蛋白共定位表达且明显增多。进一步分别以Cathepsin B抗体与JNK3抗体为诱饵蛋白行免疫共沉淀,结果表明Cathepsin B与Bid、JNK3与Cathepsin B、JNK3与Bid之间存在共沉淀。结论:1.采用改良Longa线栓法可以成功复制MCA缺血再灌注模型。2.在缺血再灌注损伤过程中,可以观察到Cathepsin B、JNK3和Bid等蛋白表达增加,而采用Cathepsin B抑制剂CA-074ME和JNK抑制剂SP600125后,大脑缺血再灌注损伤减轻,细胞凋亡下降,大鼠神经功能得部分恢复,表明,Cathepsin B和JNK3参与脑组织缺血再灌注损伤的形成,Cathepsin B-JNK3-bid-溶酶体-Cathepsin B信号回路可能是细胞凋亡的新信号通路。3.免疫共沉淀和免疫荧光结果显示,Cathepsin B、JNK3和Bid三者存在相互作用。4.组织蛋白酶B抑制剂与JNK特异性抑制剂对组织蛋白酶B和JNK3蛋白均有抑制作用,对减少细胞凋亡和改善神经功能有重要作用。Cathepsin B-JNK3-bid-溶酶体-Cathepsin B信号回路可能是细胞凋亡的新信号通路。
许位[5]（2020）在《新型AMPA受体拮抗剂对大鼠脑梗死再灌注损伤的脑保护作用的实验研究》文中认为目的探讨新型AMPA受体拮抗剂对大鼠脑梗死再灌注损伤的脑保护作用及其作用的治疗时间窗。方法选取90只SD雄性大鼠,体重250～300g。采取改良Longa线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion）模型。实验组分为:假手术组（Sham组）15只,模型组（MCAO组）15只,他仑帕奈组（Talampanel,TAL组）60只,其中治疗组（TAL组）又分为四个亚组即:TAL0h组、TAL1h组、TAL3h组、TAL5h组,各组15只。Sham组将大鼠成功麻醉后不插入线栓至右侧大脑中动脉,只将其分离;MCAO组将大鼠成功麻醉后将线栓插入至右侧大脑中动脉,堵塞血管,60min后撤线栓恢复血流,Sham组和MCAO组均经尾静脉给予等量生理盐水。成功制备MCAO模型后,TAL组大鼠分别在血流复灌注后0h、1h、3h和5h经尾静脉注射他仑帕奈（12mg/kg）。在MCAO制备成功后的第1h内,维持大鼠核心体温在36-37℃。24h后对各组大鼠进行神经功能损伤评分;TTC染色检测脑梗死体积;HE染色观察海马CA1区神经元的形态变化;免疫组化染色检测各组大鼠梗死周围区半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的表达及梗死皮质区神经元的存活数量。结果1各组大鼠脑梗死病灶体积及神经功能缺损比较:Sham组大鼠神经功能表现正常,未出现神经缺损症状,未见脑梗死病灶。TAL各治疗亚组及MCAO组大鼠均出现不同程度的神经功能缺损症状,不同大小的脑梗死病灶可见于右侧大脑中动脉供血区。与MCAO组相比,TAL各治疗亚组中神经细胞受损程度明显有所减轻,神经功能损伤评分及脑梗死体积明显降低（P<0.05）。其中,TAL各治疗亚组中,0h组、1h组、3h组相比于5h组,神经缺损评分及梗死病灶体积有明显降低（P<0.05）。2HE染色观察大鼠海马CA1区神经元:Sham组中,形态完整,神经元细胞紧密排列,胞质透明,核仁清晰可见;其中TAL各治疗亚组和MCAO组中海马CA1区神经细胞排列紊乱,胞核固缩甚至坏死,组织间均出现不同程度的水肿变性,与MCAO组相比,在TAL各治疗亚组中,组织水肿及神经元细胞变性程度明显减轻。3免疫组化:在各组实验大鼠中,Sham组大脑皮质区可见大量存活神经元,排列致密,只可见极少量的细胞表达caspase-3。而在MCAO组中,缺血半暗区细胞凋亡数量显着增加,可见大量细胞caspase-3表达阳性,同时脑梗死皮质区神经元数量显着减少。而TAL各治疗亚组相比于MCAO组,缺血半暗区细胞表达caspase-3的数量明显减少,梗死皮质区存活神经细胞的数量均增加明显,差异均具有统计学意义（P<0.05）,在TAL各治疗亚组,相比于TAL5h组,0h组、1h组及3h组凋亡细胞数减少明显,同时梗死皮质区存活神经元数量明显增加,其结果均具有统计学差异（P<0.05）。结论1 AMPA受体拮抗剂他仑帕奈对大鼠脑缺血再灌注损伤有一定的脑保护作用,能够减少神经功能缺损评分及脑梗死体积,降低神经元caspase-3的表达。2当缺血再灌注后5h时给药,他仑帕奈对大鼠脑组织缺血复灌引起的损伤脑保护作用明显减弱。图10幅;表4个;参137篇。
杨方方[6]（2020）在《獐牙菜苦苷对SH-SY5Y细胞OGD/R损伤的保护作用及其作用机制研究》文中进行了进一步梳理目的:查阅参考獐牙菜苦苷与脑缺血再灌注损伤的相关文献,建立人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y缺氧缺糖/复氧（OGD/R）损伤模型,研究獐牙菜苦苷对OGD/R损伤的SH-SY5Y细胞的潜在神经保护作用及作用机制。另建立獐牙菜苦苷高效液相色谱分析方法并对其进行方法学考察,研究其溶解性和稳定性的影响因素,为深入开发利用獐牙菜苦苷提供实验基础和药理基础。方法:1.构建人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的OGD/R模型并随机分为:正常组（Control）、OGD/R损伤模型组（Vehicle）、OGD/R损伤+STM组（120、60、30μM）共计5组;2.用CCK-8法检测不同浓度（30μM,60μM和120μM）的STM作用于SH-SY5Y细胞24小时后的细胞毒性;利用CCK-8法检测各组SH-SY5Y细胞的细胞活力;3.用Annexin V/PI法测定各组凋亡细胞的比例;4.采用JC-1探针检测各组细胞线粒体膜电位（MMP）的变化;5.采用DCFH-DA染色法检测各组细胞内活性氧（ROS）生成水平;6.观察獐牙菜苦苷对SH-SY5Y细胞OGD/R损伤的影响,采用Western blot方法对细胞内TLR4/PARP1/NF-κB通路相关蛋白的表达水平进行测定;7.采用高效液相测定STM在Hank’s平衡盐溶液中的溶解性与稳定性,为STM的体内吸收与代谢研究奠定基础。结果:1.结果显示,未经处理的对照组和的STM预处理组的细胞活力无统计学意义,表明本研究中选择的STM（30,60和120μM）浓度不具细胞毒性;2.CCK-8检测显示,OGD/R组细胞活力明显低于对照组（p<0.01）,STM（30、60、120μM）预处理组细胞活力明显高于OGD/R组;3.细胞经OGD/R处理后存活率下降,STM（30、60、120μM）预处理可使缺氧缺糖4h、复氧24h的SH-SY5Y细胞活力增加（p<0.01）;4.OGD/R降低了SH-SY5Y细胞的ΔΨm,STM（30、60、120μM）预处理使损伤细胞的ΔΨm明显升高;5.OGD/R显着提高了SH-SY5Y细胞内的ROS水平。STM（30、60和120μM）预处理抑制了OGD/R诱导的细胞内ROS的产生,减少了细胞凋亡;6.OGD/R主要诱导TLR4、MyD88、NF-κB p65和PARP1在细胞中的表达,STM预处理可降低TLR4、MyD88、NF-κB p65和PARP1的表达;7.STM在pH=3、pH=5和pH=7.4的HBSS溶液环境中稳定性良好,而在pH=9和pH=11的碱性环境中稳定性较差,光照和温度对STM稳定性无明显影响。结论:STM能够减轻OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞损伤,与减少细胞ROS水平和抑制细胞凋亡有关;STM在碱性HBSS溶液环境稳定性较差。
王守靓[7]（2020）在《右美托咪定调控大鼠脑缺血再灌注PPAR-γ-TLR4-NF-κB信号转导》文中研究表明第一部分:大鼠脑缺血再灌注模型的建立及其形态学研究目的:本部分在有效制作大鼠大脑中动脉线栓阻塞脑缺血再灌注损伤模型的基础上,试图探讨其在临床上所造成脑组织细胞损伤的具体表现,从细胞形态学分析角度为后续的炎性及细胞凋亡效应提供临床依据。材料与方法:从本学院动物管理协会选取健康SD雄性大鼠40只,平均体重（280±18）g,随机将上述SD大鼠分成两组,分别记为假手术组（Sham组）与模型组（I/R组）;具体措施为Sham组:不采取任何手术措施;I/R组:采用线栓法建立大鼠局灶性右侧脑缺血再灌注模型,缺血90分钟后拔出线栓,使得血流实现再灌注。过程中采用脑部血流仪检测大脑中动脉分布区的血流,当大鼠在插入栓线出现70%以上缺血并且维持90分钟后实现再灌注的,即为模型制作成功。具体考察指标为:HE、尼式细胞染色检测脑部组织细胞的炎性浸润情况;SEM扫描电镜检测脑部组织细胞表面破坏情况;TEM透射电镜检测脑部胞体内部细胞器等变化;线粒体膜电位分析线粒体跨膜电位的能量障碍,为下文做形态学依据。结果:模型成功性分析:Sham组大鼠整体发育良好,未出现大鼠死亡等情况;I/R组在缺血再灌注模型建立后大鼠实际存活率为85%,死亡3只,4只大鼠在解剖后脑血流图像并未出血,模型的成功率为65%。HE染色分析:Sham组在模型建立后细胞整体排列均一,数量较多,结构平整;I/R组大鼠细胞周围空隙增大,数量减少,空泡数目增多,形态规则性欠佳,组织液较多。尼式染色分析:Sham组细胞数量较多,整体均一,细胞形态正常,在整个组织分布中密度均匀;I/R组大鼠皮质组织和海马组织细胞密度稀疏,细胞出现固缩现象,体积逐渐缩小。SEM扫描分析:Sham组大鼠细胞生长模式正常,整体上排列密集,密度较大,形状规则,轮廓明显。在海马的SEM图片中,细胞之间连接性较好,微绒毛较多。I/R组大鼠细胞形态发生改变,连接性逐渐减弱,微绒毛数量逐渐减少,细胞凸起比较严重。TEM扫描分析:Sham组大鼠胞体内细胞内容物没有变化,质地均匀、生长状态良好。I/R组大鼠细胞内部出现一定程度的脂质沉淀出现,细胞呈现出明显的空泡显现。在海马组织细胞中,胞体内出现一定数量的溶酶体及吞噬体,海马组织细胞内部的线粒体及高尔基体出现肿大现象,病变程度严重。线粒体跨膜电位分析:Sham组大鼠皮质和海马组织的细胞线粒体膜电位均为红色荧光;I/R组大鼠皮质和海马组织细胞线粒体膜电位提示异常性,荧光为黄绿色,内部电位去极化现象的严重性。结论:大鼠脑缺血再灌注模型的建立对神经元细胞造成实质性伤害,细胞空隙增大、核质固缩、细胞器出现不同程度破坏;细胞数量整体上减少,存在一定程度的凋亡及坏死现象;线粒体跨膜电位异常提示细胞存在非程序性凋亡过程,为后续两部分的研究提供形态学依据。第二部分:DEX调控I/R大鼠脑免疫因子表达与细胞凋亡目的:在第一部分形态学研究的基础上,探讨大鼠脑部缺血再灌注损伤的炎性和细胞凋亡效应以及右美托咪啶对其炎性和细胞凋亡的抑制效应,以期为临床研究上提供启发和帮助,在治疗实践上提供具体策略。材料和方法:从本学院动物管理协会选取健康SD雄性大鼠40只,平均体重（276±16）g,随机将上述SD大鼠分成四组,分别记为Sham组、模型组（I/R组）、Dex1组和Dex2组;后三组大鼠均进行脑部缺血再灌注模型制作观察24小时,后期进行不同处理;具体措施为I/R组:不做药物干预,注射等量生理盐水;Dex1 组:以 DEX（10μg/kg）通过腹腔注射;Dex2 组:以 DEX（20μg/kg）通过腹腔注射;具体考察指标为炎性效应分析:免疫组化检测法分析炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α、GFAP 具体表达;ELISA 法检测炎性因子 IL-6、IL-8、TNF-α、GFAP具体含量;流式细胞仪检测细胞凋亡表达、比率;DNA倍体分析检测细胞周期;Western-Blot法检测相关蛋白Atg5、Caspase-3、Bax、Bcl-2具体浓度表达;RT-PCR法分析细胞凋亡相关蛋白Bax与Bcl-2的mRNA具体表达含量。结果:细胞炎性效应分析:（1）免疫因子分析:白细胞介素IL-6、IL-8、TNF-α及蛋白因子GFAP浓度比较:Sham组<Dex2组<Dex1组<I/R组,P<0.05,差异具有统计学意义。（2）免疫组化分析:四组大鼠浓度表达比较为:Sham组<Dex2组<Dex1组<I/R组,大鼠缺血再灌注模型建立后机体炎性反应加重,相关免疫因子浓度增加,随着右美托咪啶注射含量的增加,整体状态好转。细胞凋亡效应分析:（1）凋亡率比较:四组大鼠的神经元细胞凋亡率比较为 Sham 组（4.87%）<Dex2 组（6.45%）<Dex1 组（12.33%）<I/R 组（17.80%）,各组数据之间两两比较,P<0.05,差异具有统计学意义。（2）细胞周期分析:大鼠缺血性再灌注模型建立后大鼠脑部神经元细胞周期发生实质性改变,细胞周期的阻滞效应明显加强,细胞阻滞主要停留在G2期。右美托咪啶注射剂作用开始,神经元细胞周期的阻滞效应明显减弱,同步G2期的阻滞效应逐步减弱,比例下降为（26.55±3.89）%与（54.05±5.66）%。（3）Bax 和 Bcl-2 mRNA 的表达影响分析:Bax分析:Sham组<Dex2组<Dex1组<I/R组,Bcl-2分析:I/R组<Dex1 组<Dex2 组<Sham 组。（4）Westem-blot 分析:Caspase-3、Bax 及 Atg5等体现出了相同的浓度表达趋势,对比为Sham组<Dex2 组<Dex1组<I/R组,且两组之间比较,P<0.05,差异均具有统计学意义。抑细胞凋亡的蛋白酶分析对比关系为Shan组>Dex2组>Dex1组>I/R组,两组比较之间,P<0.05,差异具有统计学意义。结论:大鼠脑缺血再灌注模型对其细胞产生实质性伤害,神经元细胞炎性效应加强,同时细胞凋亡效应加强,细胞出现非程序性死亡过程。右美托咪啶注射剂减轻脑缺血再灌注损伤,具有抑炎性效应,对细胞凋亡起到一定的修复作用,细胞修复程度与其剂量成正相关,值得在临床上进一步研究推广。第三部分:DEX调控I/R大鼠脑PPAR-γ-TLR4-NF-κB信号转导目的:在构建大鼠脑缺血再灌注模型,模拟疾病的基础上,观察在其细胞凋亡及炎性反应过程中,信号通路PPAR-γ-TLR4-NF-κB调控脑缺血过程中的具体机制,为最终治疗缺血性再灌注损伤寻找潜在靶点做出一定的启发。材料与方法:本部分实验研究对象的选取及实验分组同第二部分。具体研究指标如下:免疫组化法检测信号通路因子TLR4、TRIF、PPAR-γ具体表达;RT-PCR检测信号通路因子TLR4、TRIF、PPAR-γmRNA具体表达;Western-Blot检测过程相关蛋白 TLR4、TRIF、NF-κB、PPAR-γ、p65、1κB、p-p65、p-1κB等浓度含量具体表达;统计分析数据,绘制TLR4/NF-KB在大鼠脑缺血模型中的具体反映调控机制。结果:免疫组化结果分析:信号因子TLR4的表达浓度上升,右美托咪啶注射后,其含量降低。PPAR-γ与TRIF的表达浓度与上述成负相关。RT-PCR结果分析:TRIF的含量上升,右美托咪啶使用后含量升高,与剂量成正相关。PPAR-γ的mRNA分析中右美托咪啶的使用促进其在脑部组织的表达含量,可以有效的抑制TLR4/NF-κB信号通路炎性因子的产生;TLR4在模型建立后含量上升,右美托咪啶使用后其含量降低,且与剂量成正相关。转录因子TLR4、TRIF、NF-κB分析:TRIF的分析中,四组比较为Sham<I/R<Dex1<Dex2,组间两两比较得出,P均小于0.05,差异具有统计学意义。免疫因子TLR4及NF-κB的蛋白含量表达体现出相同的趋势,四组比较为Sham<Dex2<Dex1<I/R组,组间两两比较,P均小于0.05,差异具有统计学意义。转录因子p65、1κB、p-p65、p-1κB分析:免疫抑制因子1kB及p65在模型建立后含量降低,组织细胞炎性反应及凋亡性加强。在右美托咪啶使用后,信号回路的免疫抑制因子含量出现不同程度上升,随着右美托咪啶注射剂量的上升其蛋白浓度表达上升,成正相关性。激活受体PPAR-γ分析:研究提示四组之间含量比较为I/R组<Sham组<Dex1组<Dex2组,组间比较差异均小于0.05,差异具有统计学意义。结论:PPAR-γ-TLR4-NF-κB信号通路在大鼠脑缺血再灌注模型脑损伤中扮演了调控角色,其可以有效增加炎性效应及加速细胞的凋亡过程;右美托咪啶可以有效起到神经保护作用,对信号通路PPAR-γ-TLR4-NF-κB中的促炎性反应及促细胞凋亡过程起到了一定的抑制作用,具有较好的临床开发性。
张一帆[8]（2020）在《地黄苦苷对MCAO所致大鼠缺血再灌注损伤的影响及机制探究》文中指出实验目的:缺血性脑卒中（cerebral ischemic stroke）是一种由脑部的血液供应障碍所引起的局限性脑组织损伤的临床疾病,该病特征是大脑供血不足,脑组织缺氧缺糖,最终导致毁灭性和不可逆性的脑损伤。过氧亚硝酸离子（ONOO-）介导的线粒体自噬激活是缺血性脑卒中的重要致病机制。我们前期的研究表明,ONOO-介导Drp1募集到受损线粒体,导致线粒体过度线粒体吞噬,加重脑缺血再灌注损伤,而ONOO-介导的线粒体吞噬激活可能是改善缺血性脑卒中预后的重要治疗靶点。地黄作为中医临床常用药物,被广泛运用于脑卒中患者的医治和临床研究,地黄苦苷（Rehmapicroside,Reh）是地黄的有效单体成分之一,Reh对缺血性脑卒中的作用及其机制尚缺乏相关文献研究。因此,本实验采用采用氧葡萄糖联合剥夺/再灌注（oxygen and glucose deprivation and reoxygenation,OGD/RO）模型和大鼠大脑中动脉缺血（Middle cerebral artery occlusion,MCAO）再灌注损伤模型,从抑制ONOO-介导线粒体自噬激活的角度,探究Reh对缺血性脑卒中的作用及其可能的机制,为缺血性脑卒中治疗药物的研究提供可靠的实验依据。实验方法:1、对PC12细胞进行2小时缺氧缺糖干预后,恢复氧糖条件诱发再灌注损伤。实验分组如下:空白对照组（Ctrl）,ODG/RO模型组,ODG/RO+Reh 25 μ M组（Reh 25）,ODG/RO+Reh 50 μM组（Reh 50）,ODG/RO+Reh 100 μ M组（Reh 100）。再灌注期间,各剂量Reh组给予相应浓度的受试药物Reh。对诱发缺氧缺糖损伤的PC12细胞进行MTT实验,Werstern Blot检测线粒体自噬和凋亡相关蛋白,Het和HK Yellow-AM染色等实验。2、运用UPLC系统评估Reh与ONOO-直接作用。样品分组如下:分为Reh 500μM对照组、Reh 500 μM+ONOO-1mM 组与 Reh 500 μM+ONOO-4mM 组。所有分析物的储存液用甲醇制备,各组取100 μL样品至UPLC系统中。3、对雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠进行MCAO手术,致使大脑中动脉缺血2小时再灌注22小时的损伤。动物分组如下:假手术对照组（Sham）、MCAO模型组（MCAO）、MCAO+Reh 2.5mg/kg 组（Reh-2.5mg）、MCAO+Reh 5mg/kg 组（Reh-5mg）、MCAO+Reh 1Omg/kg组（Reh-10mg）和MCAO+PDC 3mg/kg组（PDC）。再灌注开始时,各组分别经腹腔注射相应剂量的受试药物,Sham组与MCAO组则腹腔注射等体积的溶剂（生理盐水）。4、于缺血2小时再灌注22小时后,对SD大鼠进行mNSS神经功能评分;采用TTC染色法观察梗死面积;采用Western Blot、线粒体分离实验、免疫沉淀法检测缺血再灌注损伤脑侧的蛋白表达情况;采用免疫荧光化学染色法检测线粒体自噬、Drp1硝基化的生物学情况。实验结果:（1）Reh能够直接清除ONOO-;（2）Reh能够降低OGD/RO损伤的PC12细胞中O2-和ONOO-的表达,上调 Bcl-2,下调 bax、caspase-3 和 cleaved caspase-3,下调 PINK1、Parkin、SQSTM1/p62,降低LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ的比例;（3）Reh可以抑制缺血再灌注大鼠大脑中3-NT的形成、Drp1硝基化、NADPH氧化酶与iNOS的表达;（4）Reh可以阻止缺血再灌注大鼠大脑中PINK1、Parkin和Drp1向线粒体的转位,进而抑制线粒体自噬的激活;（5）Reh改善了 MCAO所致缺血再灌注损伤大鼠的梗死面积和神经功能缺损评分。实验结论:实验结果显示Reh对脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用,其潜在的神经保护机制可能是通过抑制ONOO-介导的线粒体自噬激活,Reh可作为对抗脑缺血再灌注损伤的潜在候选药物,具有进一步开发研究的价值。
阴雪妍[9]（2020）在《腺苷预处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤后脑内TNF-α和NF-κB表达的影响》文中进行了进一步梳理背景脑卒中已成为当前我国首位致残致死类疾病,其中缺血性脑血管病更是严重影响国民健康、生活。尽早恢复脑的血供、氧供对降低致残致死率意义非凡,然而,在血供、氧供恢复后可能出现更严重的损伤,即脑缺血-再灌注损伤,它的发生主要包括钙超载、炎症反应等损伤机制,其中炎症反应机制广受关注,作为调节炎症因子转录并引起靶基因表达增加的NF-κB成为研究热点。脑缺血药物预处理是指在脑再灌注损伤之前预先用药物诱导机体形成神经保护,以避免或减轻不可逆性损伤。腺苷作为机体重要的内源性活性物质,其信号传导是通过调节炎症反应、缺血性组织损伤和组织重构实现的。大量实验证实腺苷预处理能有效减轻大鼠脑血-再灌注损伤引起的神经功能缺损症状,完善其脑保护作用的分子机制研究对腺苷早日安全有效应用于临床预防脑缺血-再灌注损伤具有重要意义。目的通过观察腺苷预处理对脑缺血-再灌注损伤后大鼠脑内TNF-α和NF-κB的影响,探讨腺苷对大鼠脑缺血-再灌注损伤的分子保护机制。方法Sprague-Dawley大鼠60只随机分为假手术组（即用F组表示）、经腺苷预处理的大鼠脑缺血-再灌注组（即用AP组表示）和大鼠脑缺血-再灌注组（即用IR组表示）共3组,每组按照缺血-再灌注后2h、6h、24h、48h四个时间点随机分5只。采用MCAO法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型。通过对以上3组脑缺血-再灌注48h后的大鼠脑组织行头颅MRI、HE染色以及对以上60只大鼠进行神经功能缺损评分,应用积分光密度软件系统通过免疫组织化学方法观察大鼠脑组织中TNF-α和NF-κB的平均积分光密度值来进一步验证腺苷预处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤的脑保护作用,探讨腺苷对大鼠脑缺血-再灌注损伤的分子保护机制。结果1.F组大鼠术后无神经功能缺损体征,AP组和IR组大鼠术后均出现明显神经功能缺损体征。AP组和IR组大鼠神经功能缺损评分显着高于F组,AP组大鼠经神经功能缺损评分结果提示分数明显比IR组低,且以上实验结果P<0.05,提示差异都具有统计学意义。2.F组大鼠术后MRI中T1WI、T2WI均未见明显异常,AP组和IR组大鼠脑梗死体积显着高于F组,AP组大鼠脑梗死体积显着低于IR组,IR组测量的脑梗死体积为（168.80±17.584）mm3,AP组测量的脑梗死体积为（66.80±7.694）mm3,差异具有统计学意义（P<0.05）。3.光镜下48h F组大鼠海马区神经细胞排列整齐,神经元结构完整,核染色较淡,尼氏体丰富,神经基质无水肿;IR组神经元呈现坏死改变,结构模糊,胞体肿胀,细胞核和细胞浆界限不清,其周围出现宽大透亮区。在缺血梗死区域旁边的脑组织发生肿胀,神经胶质细胞显着增多,部分神经细胞出现细胞裂解、凋亡。AP组的HE染色改变与IR组相似,但比IR组较轻,细胞结构及组织层次相对完整。4.AP组和IR组术后大鼠脑组织中TNF-α和NF-κB的表达显着高于F组,AP组术后大鼠脑组织中TNF-α和NF-κB的表达显着低于IR组,统计学结果P<0.05,说明差异具有统计学意义。结论腺苷预处理可通过减少大鼠缺血-再灌注损伤后脑内TNF-α和NF-κB的表达来减轻神经细胞损伤,达到其脑保护作用。
吴芳芳[10]（2019）在《环状RNA TLK1调控缺血性脑卒中神经损伤及其机制研究》文中研究指明研究背景缺血性脑卒中是常见的神经系统疾病,是导致永久性残疾的主要原因。临床治疗,如溶栓治疗,往往受到狭窄治疗时间窗的限制,并且长期疗效不佳。脑缺血后神经元损伤的程度是决定预后的主要因素,因此,拯救受损神经元的治疗选择十分必要。然而,据报道迄今只有少数治疗药物可以缓解卒中后的神经功能缺损,因而迫切需要寻找能够降低神经元损伤的新型治疗方法。环状RNA（circular RNA,circRNA）是新近发现的内源性非编码RNA,其特征在于由反向剪接产生的共价闭合的连续环。许多circRNA在大脑中高表达,尽管其生理功能尚未完全确定,但研究发现circRNA参与神经发育以及多种神经系统疾病。本课题组前期研究发现,circHECTD1通过调节星形胶质细胞活化加重缺血性脑损伤;此外,过表达circDLGAP4改善了卒中后血脑屏障的完整性。然而,circRNA在缺血性脑卒中相关神经元损伤中的潜在作用仍然未知。本课题组前期circRNA表达谱芯片结果发现,circTLK1在缺血皮层组织中表达上调;但circTLK1是否参与调控缺血性脑损伤,特别是神经元损伤,尚未确定。因此,本研究首先探讨circTLK1在成年小鼠短暂性大脑中动脉闭塞（transient middle cerebral artery occlusion,tMCAO）再灌注后对神经损伤的调控作用,其次探讨circTLK1调控缺血性神经元损伤的分子机制,进一步基于临床急性缺血性脑卒中（acute ischemic stroke,AIS）患者血样分析circTLK1表达变化,探讨circTLK1作为脑缺血神经损伤的生物标志的潜力,为阐明circRNA在脑缺血损伤中的功能提供新的理论支持,有助于深入理解缺血性脑卒中病理生理的调控机制,为今后寻找基于circRNA的缺血性脑卒中生物标志物和治疗靶点奠定基础。第一章circTLK1在缺血性脑卒中神经损伤中的作用目的:探讨circTLK1在成年小鼠短暂性大脑中动脉闭塞后神经损伤中的作用,研究circTLK1在氧糖剥夺诱导的神经元损伤中的作用,为circRNA在缺血性脑卒中相关神经元损伤中的调控作用提供新的实验证据。方法:（1）在整体水平,利用干扰慢病毒、神经元特异性干扰腺相关病毒等工具,在小鼠tMCAO再灌注模型后,通过改良神经功能缺损评分、圆筒试验、粘附-移除试验等行为学检测方法进行脑缺血后小鼠神经功能评估;通过2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色、磁共振成像、免疫组化染色等方法测定脑缺血后小鼠脑梗死体积或脑萎缩体积;运用高尔基染色技术观察脑缺血后小鼠皮层梗死周围区的神经元的树突形态学以及树突棘数目;运用免疫印迹检测皮层组织凋亡相关蛋白或突触相关蛋白的表达变化。（2）在离体细胞水平,利用原位杂交技术观察circTLK1的细胞定位;利用原代皮层神经元制备氧糖剥夺/再灌注（Oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）模型,结合干扰慢病毒、细胞活力检测、免疫荧光染色等方法评估神经元损伤、神经元树突和树突棘形态学以及轴突长度;运用免疫印迹检测原代神经元的凋亡相关蛋白或突触相关蛋白的表达变化。结果:（1）circTLK1在tMCAO小鼠缺血皮层和血浆中表达升高;（2）敲低circTLK1表达可减少tMCAO小鼠的脑梗死体积;（3）敲低circTLK1可改善tMCAO小鼠的神经功能缺损和长期功能预后;（4）脑缺血后下调脑内circTLK1可显着改善tMCAO小鼠神经功能缺损和躯体感觉功能障碍;（5）神经元特异性干扰circTLK1可改善tMCAO小鼠的神经功能缺损,减少脑萎缩体积;（6）在离体水平,敲低circTLK1可改善OGD/R诱导的神经元细胞活力降低,减少凋亡蛋白表达;（7）在离体水平,敲低circTLK1可改善OGD/R诱导的突触相关蛋白表达降低,增加OGD/R后神经元树突总长度和树突复杂性,增加神经元轴突长度和树突棘密度。结论:circTLK1与小鼠脑缺血后的神经损伤有关,并且参与调控氧糖剥夺再灌注引起的神经元损伤。第二章circ TLK1调控缺血性脑卒中神经损伤的机制研究目的:研究circTLK1调控缺血性脑卒中神经元损伤的分子机制。方法:（1）结合生物信息学分析软件预测以及课题组前期mRNA芯片数据,筛选出能够同时与circ TLK1和靶基因2,3,7,8-四氯二苯并-对-二恶英-诱导性聚（ADP-核糖）聚合酶（2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin（TCDD）-inducible poly（ADP-ribose）polymerase,TIPARP）相互作用的mi RNAs;利用亲和分析实验、荧光素酶报告基因实验和q PCR实验等技术,验证mi RNA与circ TLK1的相互作用,以及mi RNA与TIPARP的相互结合。（2）在整体水平,利用神经元特异性干扰腺相关病毒下调TIPARP在脑内表达水平,通过改良神经功能缺损评分、圆筒试验、粘附-移除试验等行为学检测方法进行脑缺血后小鼠神经功能评估;通过磁共振成像测定脑缺血后小鼠脑梗死体积和脑萎缩体积;运用免疫印迹检测皮层组织的凋亡相关蛋白或突触相关蛋白的表达变化。（3）利用转录组测序技术分析TIPARP参与调控缺血性脑卒中神经损伤的潜在机制。结果:（1）circ TLK1通过与mi R-335-3p结合调节下游靶蛋白TIPARP;（2）circ TLK1/mi R-335-3p轴通过下游靶蛋白TIPARP加重神经元损伤;（3）神经元特异性敲低TIPARP可改善t MCAO小鼠神经功能缺损和躯体感觉功能障碍,减少脑萎缩体积,减少凋亡蛋白表达,改善脑缺血诱导的突触相关蛋白表达降低;（4）转录组测序分析结果发现,t MCAO复灌后24小时,在t MCAO+AAV-SYN-sh RNA-TIPARP组和t MCAO+AAV-SYN-sh RNACon组之间的存在516个差异基因;通过生物信息学分析发现这些差异表达基因在参与细胞过程、信号传导途径和神经系统相关的通路中富集;（5）t MCAO复灌后28天的转录组测序分析结果发现,t MCAO+AAV-SYN-sh RNA-TIPARP组和t MCAO+AAV-SYNsh RNA-Con组之间存在192个显着差异表达基因;通过生物信息学分析发现显着差异表达基因富集在参与神经病学、信号传导途径和免疫学调节的生物学过程中富集。结论:circ TLK1/mi R-335-3p/TIPARP轴参与脑缺血性损伤,特别是神经元损伤。上调的circ TLK1与mi R-335-3p结合并充当内源性mi R-335-3p海绵,抑制mi R-335-3p活性以增加mi R-335-3p靶基因TIPARP的表达,导致神经元损伤,进而导致神经功能缺陷。第三章circTLK1在急性缺血性脑卒中患者血浆中表达上调目的:研究circ TLK1在急性缺血性脑卒中患者血浆中的表达变化。方法:（1）对71名（男性59名,女性12名）AIS患者和71名性别年龄匹配的健康对照者的血浆样本通过实时q PCR检测circ TLK1表达水平。（2）根据缺血性脑卒中病因学分型标准,将AIS患者分为:大动脉粥样硬化性卒中（large-artery arteriosclerosis,LA）,小动脉闭塞性卒中或腔隙性卒中（small-artery occlusion,SA）以及心源性脑栓塞三个亚型,分析各亚型患者血浆的circ TLK1表达水平变化。（3）根据影像学检查资料,将AIS患者按照梗死部位分为:皮层梗死、皮层下梗死和幕下梗死三类,分析各类患者血浆的circ TLK1表达水平变化。（4）通过接收者操作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线和ROC曲线下的面积（area under curve,AUC）评估血浆circ TLK1水平的诊断价值。Pearson相关性检验用于评估circ TLK1和LA患者的脑梗死体积之间的相关性。结果:（1）circ TLK1在AIS患者血浆中表达上调;（2）LA和SA患者的血浆circ TLK1水平较对照组显着升高;（3）皮层梗死和皮层下梗死的AIS患者的血浆circ TLK1水平显着增加,但幕下脑梗死患者的血浆circ TLK1水平没有显着改变;（4）通过ROC曲线分析,发现血浆circ TLK1的AUC为0.868,灵敏度为0.789,特异性为0.915;（5）进一步回归分析显示,AIS患者的脑梗死体积越大,血浆circ TLK1表达越高（r=0.7197,p=0.0017）。结论:circ TLK1在急性缺血性脑卒中患者的血浆中表达上调,血浆circ TLK1水平与LA患者脑梗死体积相关。
二、线粒体在缺血再灌注继发的神经元细胞凋亡中的作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、线粒体在缺血再灌注继发的神经元细胞凋亡中的作用（论文提纲范文）
（1）牛黄及其有效成分对神经血管单元的保护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 上篇文献综述 |
| 综述一 缺血性中风背景下的神经血管单元 |
| 1. 缺血性中风的研究现状 |
| 2. 神经血管单元的组成 |
| 3. 在正常和低氧条件下的生理学 |
| 4. 缺血性脑卒中的实验模型 |
| 5. 基于神经血管单元的治疗策略 |
| 6. 参考文献 |
| 综述二 中药抗缺血性脑卒中的研究进展 |
| 一. 植物药 |
| 1.1 人参 |
| 1.2 栀子 |
| 1.3 姜黄 |
| 1.4 丹参 |
| 1.5 黄芪 |
| 1.6 川芎 |
| 1.7 地黄 |
| 1.8 黄连 |
| 二. 动物药 |
| 2.1 牛黄 |
| 2.2 麝香 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 下篇 实验研究 |
| 实验一 “神经血管单元”体外模型的建立以及缺氧/复氧模型的建立 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 实验二 牛黄及其有效成分对单独培养的神经元、星形胶质细胞、内皮细胞的细胞毒性 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 牛黄及其有效成分对脑神经血管单元的保护作用 |
| 1. 实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验四 不同配伍组分对脑神经血管单元的保护作用 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 试验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验五 牛磺酸和熊去氧胆酸对神经血管单元的作用机制 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 试验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验六 牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 试验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）LncRNA LOC103692885/miR-187-3p/Seipin轴调控内质网应激、自噬在脑缺血再灌注损伤中的分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 基于生物信息学方法探索脑缺血再灌注损伤中关键基因的筛选 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 miR-187-3p在缺血再灌注损伤中的表达与功能研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 lncRNA LOC103692885 在缺血再灌注损伤中的表达与功能研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第四部分 Lnc RNA LOC103692885/miR-187-3p/Seipin调控轴在缺血再灌注损伤中的机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 LncRNA与缺血性脑卒中损伤机制之间的关系 |
| 参考文献 |
| 作者简介及攻读学位期间科研成果 |
| 致谢 |
| 学位论文数据集 |
（3）颅脑损伤后lncRNA-TBIAT在氧化应激及细胞凋亡中的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 创伤性颅脑损伤后大鼠皮层组织lncRNAs、m RNAs和 mi RNAs的表达改变 |
| 一、引言 |
| 二、材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 TBI后细胞凋亡变化及特定lncRNAs在氧化应激细胞模型中的表达 |
| 一、引言 |
| 二、材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 lncRNA-TBIAT通过miR-124-3p/Pim-1 调控神经细胞氧化应激及凋亡的机制 |
| 一、引言 |
| 二、材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述 长链非编码 RNA 在中枢神经系统损伤中的作用 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研工作情况说明 |
| 致谢 |
（4）Cathepsin B通过Bid与JNK信号通路形成信号回路对大鼠脑缺血再灌注细胞凋亡的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 溶液配制 |
| 2.2.2 实验动物 |
| 2.2.3 实验分组 |
| 2.2.4 大脑中动脉缺血再灌注动物模型的复制 |
| 2.2.5 动脉模型复制成功的判断标准 |
| 2.2.6 大鼠大脑侧脑室的灌注给药处理 |
| 2.2.7 TTC染色 |
| 2.2.8 TUNEL法检测细胞凋亡 |
| 2.2.9 Western blot检测蛋白表达 |
| 2.2.10 免疫共沉淀法 |
| 2.2.11 免疫荧光双标 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 大鼠造模的成功率以及神经功能的缺损情况 |
| 3.2 TTC染色法检测缺血再灌损伤变化 |
| 3.3 大脑局限性缺血再灌注过程中凋亡的变化 |
| 3.4 大脑局限性缺血再灌注过程中的相关蛋白表达的变化。 |
| 3.5 使用干预剂后大脑局限性缺血再灌注过程中相关蛋白表达变化。 |
| 3.6 大脑局限性缺血再灌注过程中Cathepsin B与 Bid、JNK3与Bid的存在共定位表达 |
| 3.7 大脑局限性缺血再灌注过程中Cathepsin B、JNK3与Bid存在相互作用 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 动物模型的评价 |
| 4.2 缺血再灌注与凋亡 |
| 4.3 组织蛋白酶B与细胞凋亡的关系 |
| 4.4 JNK信号通路激活和细胞凋亡关系 |
| 4.5 Cathepsin B调控Bid与 JNK信号通路,参与细胞凋亡 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（5）新型AMPA受体拮抗剂对大鼠脑梗死再灌注损伤的脑保护作用的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略表 |
| 引言 |
| 第1章 实验研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要实验试剂及药品 |
| 1.1.3 主要仪器和器材 |
| 1.1.4 主要试剂的配置 |
| 1.1.5 实验动物分组和处理 |
| 1.1.6 制备模型方法 |
| 1.1.7 神经功能评分 |
| 1.1.8 脑梗死体积测定 |
| 1.1.9 制备石蜡切片 |
| 1.1.10 HE染色海马CA1区脑组织 |
| 1.1.11 免疫组织化学检测caspase-3 阳性细胞及皮质区存活神经元数量 |
| 1.1.12 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 大鼠脑梗死体积比较 |
| 1.2.2 大鼠Longa评分比较 |
| 1.2.3 大鼠海马区神经元形态变化 |
| 1.2.4 大鼠梗死周围区Caspase-3 阳性细胞情况比较 |
| 1.2.5 大鼠梗死皮质区神经元存活情况 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 第2章 综述 脑缺血再灌注损伤相关机制及治疗进展 |
| 2.1 脑缺血再灌注损伤发病机制 |
| 2.2 缺血性脑卒中的药物治疗及其机制 |
| 2.2.1 抗兴奋性毒性剂 |
| 2.2.2 自由基清除及抗氧化剂 |
| 2.2.3 抗炎剂 |
| 2.2.4 抗细胞凋亡剂 |
| 2.2.5 多效制剂 |
| 2.2.6 组合剂 |
| 2.3 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间研究成果 |
（6）獐牙菜苦苷对SH-SY5Y细胞OGD/R损伤的保护作用及其作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 细胞培养与OGD/R模型的建立 |
| 1.材料 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 2.方法 |
| 2.1 SH-SY5Y细胞株的培养 |
| 2.2 OGD/R模型的建立及实验分组 |
| 3.结果 |
| 4.结论 |
| 5.讨论 |
| 第二部分 獐牙菜苦苷对SH-SY5Y细胞OGD/R损伤的保护作用 |
| 1.材料 |
| 1.1 试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 2.方法 |
| 2.1 CCK-8 法测定细胞存活率 |
| 2.2 Annexin V/PI法测定细胞凋亡情况 |
| 2.3 JC-1 法测定细胞线粒体膜电位的变化 |
| 2.4 DCFH-DA探针测定细胞内ROS水平 |
| 3.统计学处理 |
| 4.结果 |
| 4.1 STM对 SH-SY5Y细胞存活率的影响 |
| 4.2 STM对 OGD/R诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响 |
| 4.3 STM对 SH-SY5Y细胞OGD/R损伤线粒体膜电位的影响 |
| 4.4 STM对 SH-SY5Y细胞OGD/R损伤ROS的影响 |
| 5.结论 |
| 6.讨论 |
| 第三部分 獐牙菜苦苷基于TLR4/PARP1/NF-κB信号途径对SH-SY5Y细胞OGD/R损伤的保护机制研究 |
| 1.材料 |
| 1.1 试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 2.方法 |
| 3.统计学处理 |
| 4.结果 |
| 5.结论 |
| 6.讨论 |
| 第四部分 獐牙菜苦苷在Hank’s平衡盐溶液中的溶解性与稳定性研究 |
| 1.材料 |
| 1.1 药品 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 2.方法 |
| 2.1 HPLC分析方法建立 |
| 2.2 助溶剂和增溶剂的选择 |
| 2.3 溶解性和稳定性实验 |
| 3.结果 |
| 3.1 pH值对STM在 HBSS中溶解性和稳定性的影响 |
| 3.2 温度对STM在 HBSS中溶解性和稳定性的影响 |
| 3.3 光照对STM在 HBSS溶液中的稳定性的影响 |
| 4.结论 |
| 5.讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 发表论文 |
| 致谢 |
（7）右美托咪定调控大鼠脑缺血再灌注PPAR-γ-TLR4-NF-κB信号转导（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一部分 大鼠脑缺血再灌注模型的建立及其形态学研究 |
| 研究背景 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 DEX调控I/R大鼠脑免疫因子表达与细胞凋亡 |
| 研究背景 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 DEX调控I/R大鼠脑PPAR-γ-TLR4-NF-κB信号转导 |
| 研究背景 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录、附图表 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 外文论文1 |
| 外文论文2 |
（8）地黄苦苷对MCAO所致大鼠缺血再灌注损伤的影响及机制探究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 现代医学研究概况 |
| 第二节 中医研究概况 |
| 一、病因病机 |
| 二、辨证论治 |
| 第三节 线粒体在缺血性脑卒中和再灌注损伤中的多重作用 |
| 一、脑缺血级联涉及线粒体功能和ROS |
| 二、脑缺血的线粒体依赖性凋亡蛋白 |
| 三、PGC-1α在脑缺血ROS保护机制和线粒体生物起源中的作用 |
| 四、脑缺血时细胞死亡和细胞存活中的线粒体动力学 |
| 五、线粒体自噬在脑缺血中的关键作用 |
| 六、线粒体在脑缺血免疫中的新作用 |
| 七、小结 |
| 第四节 缺血性脑卒中和再灌注损伤实验模型研究进展 |
| 一、人类缺血性脑卒中 |
| 二、缺血性脑卒中模型普遍问题 |
| 三、缺血性脑卒中的体外模型 |
| 四、缺血性脑卒中的啮齿动物模型 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 地黄苦苷对OGD/RO诱导PC12神经细胞损伤模型的作用 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、小结 |
| 第二节 地黄苦苷与ONOO~-的直接作用 |
| 一、材料和方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、小结 |
| 第三节 地黄苦苷对MCAO诱导缺血再灌注损伤大鼠模型的影响 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、小结 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（9）腺苷预处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤后脑内TNF-α和NF-κB表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 实验材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述:腺苷预处理治疗脑缺血再灌注损伤炎症因素相关研究综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）环状RNA TLK1调控缺血性脑卒中神经损伤及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩写词表 |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 1 非编码RNA |
| 1.1 microRNA |
| 1.2 lncRNA |
| 1.3 circRNA |
| 2 非编码RNA与脑卒中 |
| 2.1 缺血性脑卒中的病理生理过程 |
| 2.2 microRNA与缺血性脑卒中 |
| 2.3 lncRNA与缺血性脑卒中 |
| 2.4 circRNA与缺血性脑卒中 |
| 3 展望 |
| 第一章 circTLK1 在缺血性脑卒中神经损伤中的作用 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.2.1 实验材料 |
| 1.2.2 实验方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 circTLK1 在脑缺血后动物整体水平表达升高 |
| 1.3.2 circTLK1 对脑缺血所致脑梗死的影响 |
| 1.3.3 circTLK1 对脑缺血所致神经功能障碍的影响 |
| 1.3.4 circTLK1 对脑缺血所致长期功能预后的影响 |
| 1.3.5 脑缺血后下调脑内circTLK1 对卒中小鼠神经功能障碍的影响 |
| 1.3.6 circTLK1 对氧糖剥夺所致原代皮层神经元损伤的影响 |
| 1.3.7 靶向下调神经元中circTLK1 对脑缺血所致神经功能障碍的影响 |
| 1.4 讨论 |
| 第二章 circTLK1 调控缺血性脑卒中神经损伤的机制研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 circTLK1 通过与miR-335-3p结合调节TIPARP |
| 2.3.2 circTLK1/miR-335-3p轴通过靶向TIAPRP调控神经元损伤 |
| 2.3.3 靶向下调神经元中TIPARP对脑缺血所致神经功能障碍的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 circTLK1 在急性缺血性脑卒中患者血浆中表达上调 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 circTLK1 在急性缺血性脑卒中患者血浆中表达上调 |
| 3.3.2 血浆circTLK1 水平与患者脑梗死体积的相关性分析 |
| 3.4 讨论 |
| 全文总结与展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
四、线粒体在缺血再灌注继发的神经元细胞凋亡中的作用（论文参考文献）
- [1]牛黄及其有效成分对神经血管单元的保护作用研究[D]. 杜欣. 北京中医药大学, 2021(02)
- [2]LncRNA LOC103692885/miR-187-3p/Seipin轴调控内质网应激、自噬在脑缺血再灌注损伤中的分子机制研究[D]. 任真奎. 贵州医科大学, 2021(02)
- [3]颅脑损伤后lncRNA-TBIAT在氧化应激及细胞凋亡中的作用机制研究[D]. 李振兴. 中国人民解放军海军军医大学, 2020(02)
- [4]Cathepsin B通过Bid与JNK信号通路形成信号回路对大鼠脑缺血再灌注细胞凋亡的影响[D]. 席秋江. 南昌大学, 2020
- [5]新型AMPA受体拮抗剂对大鼠脑梗死再灌注损伤的脑保护作用的实验研究[D]. 许位. 华北理工大学, 2020(02)
- [6]獐牙菜苦苷对SH-SY5Y细胞OGD/R损伤的保护作用及其作用机制研究[D]. 杨方方. 湖北中医药大学, 2020(11)
- [7]右美托咪定调控大鼠脑缺血再灌注PPAR-γ-TLR4-NF-κB信号转导[D]. 王守靓. 山东大学, 2020(08)
- [8]地黄苦苷对MCAO所致大鼠缺血再灌注损伤的影响及机制探究[D]. 张一帆. 广州中医药大学, 2020(06)
- [9]腺苷预处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤后脑内TNF-α和NF-κB表达的影响[D]. 阴雪妍. 新乡医学院, 2020(12)
- [10]环状RNA TLK1调控缺血性脑卒中神经损伤及其机制研究[D]. 吴芳芳. 东南大学, 2019