一、热暴露大鼠肠系膜淋巴结DC的研究（论文文献综述）
陈前程,王红阳,董爱英,付爱双,张盼盼,戈艳蕾,朱晓颖,张倩[1]（2021）在《间歇低氧对大鼠肠道细菌移位发生及肠系膜淋巴结结构的影响》文中研究指明目的观察间歇低氧对肠道细菌移位及肠系膜淋巴结（MLN）结构的影响,探索其机制。方法将成年雄性Wister大鼠24只按照随机数字表法分为实验组及对照组各12只,实验期间两组以相同条件饲养,实验组模拟睡眠呼吸暂停给予间歇低氧处理。实验开始后第2、4周的最后1天,使用20%乌拉坦按照0.7 ml/100 g剂量麻醉大鼠,剖腹后无菌方式取MLN及距回盲瓣2 cm以上的小肠组织,HE染色观察组织微观结构,MLN无菌研磨液进行病原学培养,以ELISA法检测研磨液超氧化物歧化酶（SOD）、脂质过氧化物（MDA）及活性氧（ROS）,评估氧化应激反应程度;采集中心静脉血液检测血清二胺氧化酶（DAO）,评估肠道黏膜损伤程度。结果实验组大鼠MLN及其对应小肠肠管均有损伤,随着间歇低氧时间的延长,光镜下可见:MLN生发中心数目显着减少,体积减小,皮质髓质融合加重,面积比下降,肠管组织表现出肠上皮受损严重,通透性增高,黏膜水肿,肠绒毛高度、厚度、面积及隐窝深度明显下降等。第4周实验组大鼠MLN厌氧状态下培养出产气荚膜梭菌,证实出现肠道细菌移位。第2周对照组大鼠MLN组织的ROS、SOD及MDA含量分别为（177±9）U/ml、（5.20±0.43）U/ml及（0.95±0.22）nmol/ml,第4周对照组为（176±9）U/ml、（5.19±0.43）U/ml及（0.93±0.16）nmol/ml,组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;第4周实验组大鼠MLN组织ROS[（284±13）U/ml]、MDA[（2.30±0.34）nmol/ml]明显高于第2周[（217±21）U/ml、（1.17±0.24）nmol/ml],差异有统计学意义（P<0.05）,但SOD变化情况不明显[（5.98±0.43）、（5.99±0.43）U/ml,P>0.05];与对照组相比,实验组大鼠MLN组织ROS、SOD及MDA含量均较同周期对照组大鼠有明显升高（P<0.05）。实验组大鼠在第2、4周血清DAO水平均高于对照组（P<0.05）。提示实验组大鼠肠道黏膜损伤程度较对照组严重。结论低氧暴露可加重大鼠机体氧化应激反应的程度,随着间歇低氧时间逐渐延长,大鼠肠道黏膜出现严重损伤,肠道菌群移位加重对肠系膜淋巴结结构损伤,氧化应激进一步加重,进而影响肠道自身免疫功能的完整。
洪欣欣,刘喆滢,高经华,刘志锋[2]（2021）在《重症中暑免疫功能障碍的研究进展》文中研究指明
郑翔[3]（2019）在《补充山楂提取物对高温环境下运动大/小鼠心血管保护和热耐受能力影响的研究》文中指出目的探究高温环境下运动大/小鼠心血管系统及热耐受能力的影响,同时观察补充山楂提取物对保护高温下运动大/小鼠的心血管系统和提升热耐受能力的效果,为后续对特殊职业人群预防高温作业损伤、研制针对高温作业工人的补充剂提供基础支持。方法将60只成年SD大鼠（200-220g）和60只KM小鼠（20-22g）,随机分为高温运动组（HE组）、常温运动对照组（NEC组）、常温自由活动对照组（NAC组）、高温运动辅以高剂量山楂提取物组（HE+HHFE组）、高温运动辅以中剂量山楂提取物组（HE+MHFE组）、高温运动辅以低剂量山楂提取物组（HE+LHFE组）（n=10/组,大、小鼠各6组）。其中,大鼠的高温运动是暴露在36℃环境下进行跑台运动,上、下午各运动30min;大鼠常温运动是在室温22±1℃,湿度为50-60%下进行跑台运动,上、下午各运动30min;大鼠常温自由活动是在室温22±1℃,湿度为50-60%的饲养笼中进行自由活动。小鼠的高温运动是将小鼠置于温度为43℃,水深20cm的水中,让其游泳至力竭;常温运动是将小鼠置于温度为22℃,水深20cm的水中,让其游泳至力竭;常温自由活动是指将小鼠置于室温22±1℃,湿度为50-60%的饲养笼中正常自由活动。根据山楂提取物中的黄酮类化合物的含量及人体可摄入的花青素含量,转换为山楂提取物对大鼠的灌胃剂量为高剂量（600mg/d）、中剂量（300mg/d）、低剂量（150mg/d）,转换为小鼠的灌胃剂量为高剂量（120mg/d）、中剂量（60mg/d）、低剂量（30mg/d）。各组大鼠进行实验30天,并在第0天、10天、20天、30天用大鼠无创血压仪测量血压值;并在第30天将各组大鼠腹主静脉取血测量血清血脂;取心脏旁的主动脉血管做HE染色;取肝脏组织测量HSP70表达量。每组小鼠进行实验30天。第31天时将各组小鼠放入铁笼中,置于温度43±1℃,湿度50-60%的环境中,记录每只小鼠的死亡时间。将所有测量数据用SPSS17.0软件进行统计学分析。结果1 HE组大鼠主动脉血管内膜粗糙、内皮细胞连接松散。HE组大鼠高温运动第10天、第20天、第30天的收缩压和舒张压均高于NEC组（P<0.01）;HE组大鼠的收缩压、舒张压随时间存在变化趋势,总体呈上升趋势（P<0.05）。HE组大鼠的总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）均高于NEC组（P<0.05）,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）低于NEC组（P<0.05）;NEC组大鼠的TC、TG、LDL-C均低于NAC组（P<0.05）,HDL-C高于NAC组（P<0.05）。HE+HHFE组、HE+MHFE组大鼠的血管内膜光滑、内皮细胞排列完整紧密;HE+LHFE组大鼠主动脉血管内膜粗糙、内皮细胞连接松散。HE+HHFE组、HE+MHFE组大鼠在补充第10天、第20天、第30天的收缩压、舒张压均低于HE组（P<0.01）;HE+HHFE组大鼠在补充第10天、第20天的收缩压、舒张压均低于HE+MHFE组、HE+LHFE组（P<0.05）;HE+HHFE组大鼠在补充第30天的收缩压低于HE+MHFE组、HE+LHFE组（P<0.05）;HE+HHFE组大鼠在补充第30天的舒张压低于HE+LHFE组（P<0.05）。HE+HHFE组大鼠的TC、TG、LDL-C含量均低于HE组,HDL-C含量高于HE组（P<0.05）;HE+MHFE组大鼠的TG含量低于HE组,HDL-C高于HE组（P<0.05）;HE+LHFE组大鼠的TG含量低于HE组,HDL-C含量高于HE组（P<0.05）。2 HE组大鼠肝组织的HSP70表达量高于NEC组（P<0.05）,NEC组大鼠肝组织的HSP70表达量高于NAC组（P<0.05）。HE组小鼠的高温致死时间长于NEC组（P<0.05）,NEC组小鼠高温致死时间长于NAC组（P<0.05）。HE+HHFE、HE+MHFE、HE+LHFE组大鼠肝组织的HSP70表达量高于HE组（P<0.05）,HE+HHFE组大鼠肝组织的HSP70表达量与HE+MHFE组比较无统计学意义（P>0.05）。HE+HHFE组、HE+MHFE组大鼠肝组织HSP70表达量均高于HE+LHFE组（P<0.05）。HE+HHFE、HE+MHFE组小鼠高温致死时间高于HE组（P<0.05）,HE+HHFE组小鼠高温致死时间与HE+MHFE组比较无统计学意义（P>0.05）。结论1高温环境下运动导致大鼠主动脉血管内膜粗糙、收缩压和舒张压升高、以及TC、TG、LDL-C水平的升高和HDL-C水平的降低。补充高剂量（600mg/d）、中剂量（300mg/d）山楂提取物可以预防高温环境下运动大鼠主动脉血管内膜损伤;补充高剂量（600mg/d）山楂提取物对抑制高温环境下运动大鼠的收缩压和舒张压升高、抑制血清TC、TG、LDL-C水平升高和HDL-C水平降低的效果最好。2长期高温环境下运动会使大鼠肝组织HSP70表达量升高,高温环境下运动小鼠的高温游泳时间、高温致死时间增长。补充高剂量（600mg/d）、中剂量（300mg/d）山楂提取物可提升高温环境下运动的大鼠肝组织HSP70表达量,补充高剂量（120mg/d）、中剂量（60mg/d）山楂提取物可延长高温环境下运动小鼠的高温游泳时间和高温致死时间。图7幅;表12个;参72篇。
郭金霞[4]（2018）在《高温联合紫外线暴露对大鼠脾脏Bcl-6mRNA表达及血清IL-21、CXCL13水平的影响》文中研究说明目的采用免疫毒理学方法分析SD大鼠在高温（38±1）℃、紫外线（72μW/cm2）以及高温联合紫外线环境中连续暴露2个月与4个月后,大鼠体重变化量、主要脏器系数、血清细胞因子IL-21与CXCL13水平以及脾脏Bcl-6mRNA表达量的变化。探讨高温、紫外线同一时间暴露对大鼠免疫系统的影响是否存在交互作用以及作用特点;初步探究高温、紫外线暴露对大鼠生发中心的影响,为今后相关研究提供一定的实验依据。方法（1）向宁夏医科大学实验动物中心购买体重介于80100g的SPF级SD大鼠112只（大鼠合格证编号:SYXK（宁）2011-0001）,雌雄各半;在相对湿度60%80%、温度2023℃的环境中适应性饲养一周后,随机分成为对照组、高温组、紫外线组、联合组（高温+紫外线组）,每组28只,雌雄各半,普通大鼠饲料喂养,自由饮用蒸馏水。（2）高温组和紫外线组分别在温度为38±1℃,湿度为40%50%的高温环境和310nm,72uW/cm2的中波紫外线环境中每天暴露2h（12:0014:00）,每周暴露7d;联合组同时采用高温和紫外线暴露。非染毒时间各实验组大鼠在正常光线、相对湿度60%80%、温度2023℃的环境中喂养。密切观察各组大鼠的生长状况,每周定时称量并记录每组大鼠体重。（3）连续暴露2个月与4个月后,从各实验组分别随机选取14只大鼠,雌雄各半（总计56只）,进行样本的采集和免疫指标的测定。结果（1）实验期间,高温组与联合组大鼠普遍出现出汗、聚集、死亡等情况;紫外线组与联合组个别大鼠眼角和背部皮肤出现瘀斑。（2）高温联合紫外线分别暴露2个月与4个月后,联合组雄性大鼠最终体重、体重增长量均低于对照组、高温组以及紫外线组（P<0.05）。（3）三种不同暴露方式连续暴露2个月后,各暴露组与对照组相比较,雄性大鼠肝脏系数（联合组除外）以及肺脏系数明显增大（P<0.05）;联合组肝脏系数小于高温组与紫外线组（P<0.05）。暴露4个月时,雄性大鼠紫外线组和联合组脾脏系数以及高温组胸腺系数均小于对照组,而紫外线组与联合组肝脏系数大于对照组（P<0.05）;高温组脾脏系数大于联合组,而胸腺与肝脏系数小于联合组（P<0.05）。高温组与紫外线组雌性大鼠肝脏系数与对照组相比较均增大（P<0.05）。（4）除2个月紫外线组外,其他暴露组大鼠血清IL-21水平与对照组相比较均明显下降（P<0.05）;不同暴露时间,4个月紫外线组与联合组大鼠血清IL-21水平均低于2个月组（P<0.05）;无论2个月还是4个月,高温组和紫外线组大鼠血清IL-21水平均高于联合组（P<0.01）。（5）2个月联合组、4个月高温组与紫外线组大鼠血清CXCL13水平与对照组相比较均有所降低（P<0.05）;不同暴露时间,2个月暴露组（除联合组外）大鼠血清CXCL13水平明显低于4个月暴露组（P<0.05）;2个月高温组与紫外线组大鼠血清CXCL13水平高于联合组,但4个月高温组与紫外线组大鼠血清CXCL13水平低于联合组（P<0.05）。（6）三种不同的暴露方式连续暴露2个月时,4个不同处理组间大鼠脾脏Bcl-6mRNA相对表达量差异无显着性（P>0.05）;暴露4个月后,各暴露组大鼠脾脏Bcl-6mRNA表达量较对照组均呈低表达,但仅高温组和紫外线组差异有显着性（P<0.05）。结论（1）高温与紫外线同时暴露对大鼠体重与免疫器官的影响存在性别差异。（2）高温或紫外线暴露不同时间对大鼠血清IL-21与CXCL13水平的影响存在时间效应关系。（3）高温联合紫外线暴露对大鼠血清IL-21与CXCL13水平的影响存在交互作用。（4）高温或紫外线单独暴露4个月可降低大鼠脾脏Bcl-6mRNA表达水平,但二者联合以及2个月暴露均无此现象。（5）高温与紫外线联合暴露对大鼠免疫系统存在一定的影响。
余群,翁锡全,王丽平[5]（2016）在《高温高湿环境运动时机体变化探析》文中指出采用文献资料法,探讨在高温高湿环境下运动时机体机能的变化以及高温高湿环境运动对免疫机能的影响,旨在为高温高湿环境下运动,合理制定科学的运动处方提供新的研究思路。
李相玲[6]（2014）在《不同分子量的枸杞多糖提取分析及对细胞迁移的影响》文中研究表明目的：枸杞多糖是枸杞发挥抗肿瘤、抗氧化、免疫调节等作用的重要活性成分,但是由于枸杞多糖空间结构复杂,活性中心多样,分子量庞大等原因使其口服后产生的相关的免疫调节机制作用的研究进展缓慢。本研究采用水提醇沉法提取枸杞多糖后经膜透析得到五个不同分子量段的枸杞多糖产物,并对其主要组成成分及单糖组成进行分析。同时,在研究不同分子量的枸杞多糖对免疫抑制小鼠模型中淋巴细胞归巢受体的表达情况等前提下,本研究进一步采用体外实验对各级多糖进行活性筛选后针对多糖对不同细胞系细胞的增殖及迁移作用进行研究,确定枸杞多糖有效的分子量段和其对细胞迁移的影响。淋巴细胞的归巢再循环是保证机体免疫力的重要途径之一,而细胞迁移是淋巴细胞归巢再循环得前提。同时,细胞迁移是肿瘤细胞“归巢”到特定器官的肿瘤迁移得以实现的基础。本研究通过体内外实验考察枸杞多糖对细胞迁移的影响,为枸杞多糖在工业生产中获得更有效的产品,和在免疫研究及治疗肿瘤方面的开发提供依据。方法：为研究中药水提物的活性,我们选用了小鼠免疫抑制模型。由于中药传统口服的给药方式,决定了肠道黏膜免疫在中药免疫调节作用中的重要角色。前期的研究发现中药多糖能促进免疫抑制小鼠派氏结数目的增多及变大。故本实验首先对免疫抑制模型进行复制。免疫抑制剂诱导的免疫抑制模型是较常用的动物造模方法,但由于文献报道中得给药方法,剂量,时间等相差太大,故本实验首先对环磷酰胺和地塞米松对小鼠免疫抑制程度进行了研究,并首次对两者引起的肠道粘膜免疫的抑制作用进行研究。之后通过对各类中药多糖对DTH免疫抑制小鼠的免疫调节及归巢分子的影响的研究结果选定枸杞作为后续实验的供试品,并进行枸杞多糖的分级提取及提取物的成分分析。通过动物实验探讨了不同分子量段的枸杞多糖对小鼠在体细胞迁移的影响后,为进一步探讨枸杞多糖对细胞迁移的影响而进行体外细胞实验,以便进一步研究枸杞多糖对细胞迁移的影响。主要实验方法操作如下。1、免疫抑制模型的复制：选用环磷酰胺和地塞米松两种免疫抑制剂,从整体免疫和肠道粘膜局部免疫,以及DTH模型小鼠的肠道派氏结和耳后淋巴结中淋巴细胞活化比例为主要观察指标,并结合脏器指数和小鼠DTH反应能力,观察不同剂量的免疫抑制剂的作用效果,选择合适的小鼠免疫抑制模型用于后续研究。2、多糖的筛选：硫酸-苯酚法检测各多糖样品中多糖的含量；通过动物实验检测香菇,枸杞,四君子汤,茯苓,羧甲基茯苓,苦瓜多糖对免疫抑制小鼠DTH的免疫调节作用；通过流式细胞仪检测肠系膜淋巴结中淋巴细胞黏附分子及归巢检测来筛选目的供试品。3、通过水提法及酶法相比较,最后确定枸杞多糖的分级提取及成分分析的方法为：采用水提后,不同孔径的透析膜过滤得到不同的分子量的水提物后再进行醇沉的方法得到分子量不同的产物进行成分分析。煅烧法检测灰分含量；烘培法检测水分含量；硫酸苯酚法检测总多糖；HBAH检测还原性多糖；Bradford法检测蛋白含量；SDS-PAGE分析蛋白的条带及多糖的纯度。四硼酸钠硫酸法检测糖醛酸的含量；HPLC检测多糖中单糖的含量,并对各组分包括蛋白质进行成分对比分析。4、枸杞多糖对正常小鼠及免疫抑制小鼠淋巴细胞迁移的影响。BALB/c小鼠腹部注射环磷酰胺后灌服枸杞多糖一周,通过胸腺脾脏脏器指数、肠道派氏结个数及肝静脉血和派氏结中淋巴细胞比例等来观察枸杞多糖对健康小鼠的免疫增强作用。通过对灌服多糖的免疫抑制小鼠肠道淋巴细胞的迁移分子的流式检测来观察多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的恢复作用。5、枸杞多糖对肿瘤细胞增殖及迁移的影响：MTT法检测细胞的增殖,并对细胞浓度,贴壁时间等因素进行实验研究；DNA梯度条带检测细胞凋亡。细胞伸展,贴壁实验,划痕实验及Trans-well实验则对细胞的迁移进行研究。结果：1、各浓度的环磷酰胺和地塞米松都有一定的免疫抑制作用,其中以环磷酰胺100mg/kg和地塞米松40mg/kg在给药后48h即可对小鼠脏器指数、派氏结数目、DTH反应及DTH反应下小鼠耳后淋巴结和肠道派氏结中淋巴细胞比例和活化均有显着抑制作用,与对照组比较具有统计学意义。地塞米松对小鼠脏器指数和肠道派氏结数目具有显着抑制作用,但对小鼠DTH反应及DTH反应条件下T细胞活化的抑制作用不明显,且地塞米松诱导的脏器缩小明显,影响组织的摘取和原代细胞的分离培养。故本实验选择环磷酰胺腹腔注射100mg/kg给药48h后造成的免疫抑制模型进行实验。2、硫酸-苯酚法检测各样品中多糖含量：香菇52.0%,枸杞60.4%,四君子汤24.03%,茯苓84.9%,羧甲基茯苓86.8%,苦瓜水提物83.8%。香菇,枸杞,四君子汤,茯苓,羧甲基茯苓,苦瓜等水提物对环磷酰胺抑制的DTH小鼠免疫调节作用及淋巴细胞归巢受体的表达的结果发现,各类水提物对免疫抑制模型小鼠均有一定的免疫增强作用,但作用的侧重点并不相同。其中枸杞多糖对其免疫调节及淋巴细胞归巢受体的表达作用效果比较明显,且价格低廉。故本实验选用枸杞作为本实验的供试品。3、枸杞多糖的分级提取和成分分析：由于不同酶的作用条件及作用环境不同,在探讨不同工业酶对枸杞提取方面的研究时本人发现：由于酶的作用温度比较低,所以在PH4.5-8之间酶对枸杞原材料的的提取率是比高温提取要低的。不同PH值得水溶液对多糖中还原性糖的提取没有差异。蛋白的含量随着PH值得提高有上升的趋势,但总体差异不大。说明提取物中蛋白质含量较少。故最终决定选择传统的水提醇沉法,水提液通过不同孔径膜透析得到不同分子量段的透析液,在进行醇沉,得到相关的不同分子量的产品NO.1-NO.5。4、不同分子量产品的成分分析：通过化学分析手段对NO.1-NO.5的成分进行分析,结果发现在醇沉的基础上再进行醇沉所得到的NO.2号产品中的灰分,蛋白和粗脂肪等杂质的含量很低。而通过一次醇沉得到的NO.1,NO.3,NO.4和NO.5产品中,各灰分,粗脂肪等含量接近,但蛋白质含量以NO.4最低为0.11%,NO.1的最高,达到2.04%。在比较各产品的总糖,还原性糖和糖醛酸时,我们发现NO.2的各种糖类含量最高,尤其总糖含量为66.88%,远远高于其他类产品；其次是NO.4为55.8%。在HPLC分析中,以葡萄糖,木糖,纤维二糖,来苏糖为标准品,分析结果显示NO.1-NO.5的单糖成分,NO.1单糖成分含量很少,只含有葡萄糖和木糖且含量很低,另外几种产品单糖的成分及含量都相近；NO.2与NO.4的单糖的含量最为接近,且各单糖含量略高于其他产品。5、小剂量的不分子量段的枸杞产品,在给药14天后,并不能抵抗环磷酰胺对小鼠的免疫抑制作用所导致的胸腺、脾脏脏器指数的降低,及派氏结数目的减少等。但肝静脉血中,B淋巴细胞的比例有所恢复,同时肝静脉血中淋巴细胞的黏附分子的表达增多。但派氏结中淋巴细胞的比例及黏附分子的表达与Cy组比较并没有差异性。大剂量枸杞多糖NO.4能明显改善免疫抑制小鼠的整体免疫和肠道黏膜免疫,给予多糖后,胸腺脾脏指数增加,肠道淋巴细胞细胞比例恢复。同时派氏结中淋巴细胞归巢受体表达增加,但肝静脉血中细胞黏附分子的表达并没有变化。同时,研究表明给予环磷酰胺后,肝脏及派氏结中淋巴细胞表达黏附分子的比例与正常组相比有增加的趋势,虽然这种趋势无统计学意义。6、枸杞多糖对肿瘤细胞增殖的影响：本研究筛选了宫颈癌细胞Hela,肺癌细胞A549,成纤维细胞L929等三种在研究报道中应用较多的细胞系进行研究,发现在0.8mg/ml时,各类细胞对多糖产品的敏感性并不相同,以Hela) L929) A549。通过研究发现在细胞浓度为3×103细胞／孔时,贴壁时间在2-6h时,NO.4产品对细胞的抑制作用明显。细胞浓度过高,或者贴壁时间过长,都会影响到样品对细胞的抑制作用。当细胞浓度达到3×104时,只有5mg/ml的NO.4才会对hela细胞有一定的抑制作用,低于此浓度的枸杞多糖并没有表现出明显的抑制作用。这说明枸杞多糖对细胞的作用具有一定的有效浓度,过高和过低都会影响到其作用效果,并且不同分子量的五个样品对肿瘤细胞的抑制作用也不相同,以Hela细胞为研究对象,通过时间和计量筛选实验得出NO.4>NO.2>NO.5>NO.3>NO.1。同时,本实验探索了NO.4对Hela细胞的增殖抑制作用：DNA梯度条带说明NO.4对细胞具有直接杀死的作用,即通过诱导细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖。但此作用并不排除细胞毒性作用,因为对L929也有此作用,但并没有凋亡条带的产生。7、为了证明NO.4是否具有细胞毒性,小鼠脾脏,胸腺,即肠道派氏结原代细胞进行细胞毒性实验,发现NO.4并没有杀死细胞,相反具有保护原代细胞死亡的作用。8、为了进一步研究枸杞多糖对细胞迁移的影响,本研究选用低剂量,高细胞浓度进行细胞抑制实验。发现在6孔板中,0.8mg/ml的枸杞多糖NO.1-NO.5对细胞浓度为2×105细胞/孔,培养24h后的抑制率及DNA条带显示其作用并不明显。故,本实验部分应用此条件进行细胞迁移实验。结果发现NO.4能明显抑制Hela细胞的伸展,黏附,及迁移。结论：1,环磷酰胺和地塞米松高剂量腹腔注射一次后,能明显的抑制小鼠整体和肠道局部粘膜免疫。且环磷酰胺的抑制结果优于地塞米松,更利于免疫抑制模型的建立。2,PH 5-7的水溶液对枸杞的提取率最高。水提醇沉法对枸杞多糖的分分子量段提取时,各组分中所含的成分种类差别并不大。但是每一组分的成分含量会有所差别,其中分子量段为20nm-8kDa之间的NO.4多糖含量最高。还原性糖和蛋白质多糖复合物的比例接近1：1,糖醛酸的含量最高。所含其他杂质,如脂肪,灰分相对其他产物较少。3,香菇,枸杞,四君子汤,茯苓,羧甲基茯苓,苦瓜等水提物对环磷酰胺抑制的DTH小鼠免疫及派氏结中淋巴细胞归巢受体的表达均有不同程度的促进作用,但是整体看来香菇多糖和枸杞多糖的效果要优于其他水提物。4,枸杞多糖的分子量段为20nm-8kDa之间的产品的免疫调节作用较强,但此作用与给药剂量和给药时间的关系密切。同时,NO.4能促进PPs中淋巴细胞的迁移。5,枸杞多糖的中间分子量段的产品NO.4能很好的抑制Hela细胞和成纤维细胞L929的增殖,此作用对A549影响不大。说明不同细胞系对枸杞多糖的敏感性不同。同时能抑制Hela细胞和成纤维细胞L929的伸展,贴壁和迁移,并且以NO.4的抑制迁移程度最好。说明枸杞多糖对肿瘤细胞的作用具有选择性且与分子量的大小有关系。总之,中间分子量段的枸杞多糖具有较高的生物活性,且此活性不仅与多糖的含量有关,也与其中其他成分和单糖组成及比例有关。
朱敬松[7]（2014）在《间充质干细胞移植对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的影响》文中研究表明多发性硬化（multiple sclerosis，MS）是常见的以中枢神经系统脱髓鞘为主要特征的自身免疫性疾病（autoimmune disease，AID），患者表现为中枢神经系统炎性脱髓鞘及相应的神经系统运动障碍。实验性自身免疫性脑脊髓膜炎（experimental autoimmune encephalomyelintis，EAE）是自身免疫性MS的模型，也被称为实验性变应性脑脊髓膜炎（experimental allergicencephalomyelintis，EAE），其临床表现、病理特征和免疫异常等均与人类MS极其类似，故EAE常被用于研究MS病理进展机制和观察判断MS治疗方案的有效性。大量MS免疫病理研究证实髓磷脂蛋白抗原被CD4+T细胞识别，诱导自身免疫应答。免疫细胞被异常活化并迁移进入CNS，在CNS与表达自身髓磷脂蛋白抗原的细胞相互作用，通过一系列炎症因子最终导致中枢神经系统脱髓鞘病变。中枢神经系统的脱髓鞘病变与效应性T细胞过度活化、炎症细胞在CNS浸润、前炎症细胞因子和介质的产生高度相关。Th1和Th17产生的细胞因子如干扰素-γ（interferon，IFN-γ）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF-α）、白细胞介素-2（interleukin2，IL-2）和IL-17能加速疾病进展，甚至IFN-γ能诱导脱髓鞘和神经元损伤。Th2细胞和CD4+CD25+调节性T细胞（regulatory Tcells，Treg）能抑制自身免疫反应，通过产生细胞因子IL-10、转化生长因子-β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）、IL-4限制疾病进展。有研究表明EAE小鼠Treg细胞数量和免疫抑制功能均降低，给EAE小鼠输入功能性Treg细胞能改善其病理状况。间充质干细胞（Mesenchymal stem cell，MSC）是骨髓中除造血干细胞外的成体干细胞，广泛存在于骨髓和肝脏等多种组织。MSCs具有多潜能、自我更新和潜在的多向分化能力。MSCs能分化成各种中胚层起源的组织，如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等。MSCs很容易获得，具有强大的潜在体外扩增能力，且免疫原性弱，因此MSC作为组织再生的种子细胞具有良好的临床应用前景。MSCs也被发现具有显着的免疫调节活性，能抑制T细胞、B细胞和NK细胞增殖，能诱导产生Tregs，也能抑制抗原提呈细胞（antigen presenting cell，APC）成熟及其功能。上述各种研究报道表明，MSCs在治疗自身免疫病方面有潜在的应用前景，但有关机制仍不十分清楚，本研究旨在通过探讨MSCs移植对EAE小鼠体内免疫器官中Treg数量、Foxp3、IL-10、TGF-β的影响，揭示MSCs对人类自身免疫病MS治疗的机制。材料与方法1、实验动物：选择68周龄雌性C57BL/6J小鼠用于EAE模型制作；选择雄性C57BL/6J小鼠做为同基因MSCs移植细胞来源，选择雄性Balb/c小鼠做为异基因MSCs移植细胞来源。2、免疫原的制备：选择髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（myelin oligodendrogliaglycoprotein， MOG）的MOG35–55多肽（氨基酸序列为MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK）做抗原，等体积与完全弗氏佐剂（completeFreund adjuvant，CFA）充分混匀制成油包水样乳剂，即为免疫原。3、EAE模型的制作和神经功能评分：通过给C57BL/6J小鼠多点多次注射免疫原，诱导小鼠成为EAE模型。每日观察小鼠运动、饮食等，记录小鼠症状、体征、体重变化，参照Kono等的评分标准进行神经功能评分。免疫原致敏14-20d，凡评分≥1分者可作为EAE模型。4、小鼠MSCs的分离和培养：用PBS冲洗C57BL/6J和BALB/c小鼠胫、腓骨，获得骨髓细胞，溶解红细胞后，将106/ml骨髓细胞置MSC培养液5%CO237℃孵育。72h去除非粘附细胞，待贴壁细胞融合至80%90%培养瓶壁时，用胰蛋白酶消化，洗涤后加入MSC培养液继续传代培养至1015d。给每只实验鼠尾静脉注射细胞总数为106MSCs。MSC扩增培养液：高糖DMEM（Dulbecco modified Eagles medium，Gibco产品），热灭活10%胎牛血清，50μg/mL gentamycin，2mM L-glutamine，100μMnon-essential amino acids，10mM HEPES，55μM2-Mecaptoethanol。5、MSCs移植：将40只C57BL/6J小鼠分为4组，每组10只。A、B、C组为EAE诱导组，符合EAE神经功能评分条件。在EAE诱导后第2022d，A组小鼠经尾静脉注射106（200μL）BALB/c小鼠MSCs（异基因MSCs移植组），B组EAE小鼠经尾静脉注射106（200μL）C57BL/6J小鼠MSCs（同基因MSCs移植组），C组EAE小鼠经尾静脉注射200μL PBS（为EAE对照组），D组小鼠为非EAE诱导的正常小鼠（正常对照组）。6、流式细胞术分析：在MSCs移植40d，处死小鼠，分别无菌获取胸腺、脾脏、淋巴结，通过机械研磨、裂解红细胞后制成单个核细胞悬液，利用反复离心法将细胞用含1%BSA和0.1%sodium azide的PBS洗3次，加入FITC-抗小鼠CD4mAb（0.125μg/106细胞）、APC-抗小鼠CD25mAb（0.06μg/106细胞,eBioscience产品），检测细胞膜表面CD4、CD25分子的表达，以同型抗体做对照，冰上避光孵育30min。对于细胞内存在的Foxp3检测,需要首先将细胞固定、破膜处理（用Foxp3staining buffer，eBioscience产品），再用PE-抗小鼠Foxp3mAbs （0.5μg/106细胞，eBioscience）染色。染色后细胞用流式细胞仪FACSCalibur（BD）检测。7、Real time （RT）-PCR法检测Foxp3、TGF-TGF-β1、IL-10mRNA表达：分别从MSCs移植后20d、40d、60d各组小鼠中摘取胸腺、脾脏和淋巴结，制成单细胞悬液，分别于107个胸腺细胞、脾脏细胞和淋巴结细胞中加入Trizol试剂（Invitrogen产品）提取总RNA，用RT Kit（Takara产品）反转录成cDNA，用SYBR green I real time PCR Kit （Takara）试剂盒进行Foxp3、TGF-TGF-β1和IL-10mRNA检测。8、CD4+CD25+调节性T细胞对CD4+CD25-效应T细胞增殖的抑制作用：采用CD4+CD25+细胞分选试剂和免疫磁珠法分选出正常小鼠CD4+CD25-T细胞，经CD3单抗和CD28单抗活化在含IL-2的培养基中，与CD4+CD25+T细胞共培养，MTT法检测细胞增殖。即：将正常对照组小鼠的CD4+CD25-细胞100μL加入到各包被孔中，每孔分别正常对照组、EAE组、异基因MSCs移植组、同基因MSCs移植组的CD4+CD25+T细胞100μL，设3个复孔，置5%CO2饱和湿度37℃培养24h。每孔加入MTT（5mg/mL）20μL，继续培养4h。小心吸去培养孔中上清，每孔加入二甲亚砜100μL，反复吹打使细胞裂解，用酶标分析仪570nm记录各孔吸光度值（A值）。9、统计学分析：实验数据用均值±标准差表示，利用SPSS13.0进行统计学分析，统计结果p<0.05为有限制性差异。结果1、MSCs体外培养、增殖特征：初分离的骨髓单个核细胞在倒置显微镜下呈现为小球形，诱导培养34d后部分细胞贴附于培养瓶壁，形状似纺锤形，有较强折光性。培养至710d，绝大多数细胞贴附于瓶壁，并逐渐生长形成分散的或条索状聚集状态，细胞体积显着增大。细胞被继续传代培养，将反复传34代的MSCs用于细胞移植。2、MSCs移植改善EAE小鼠临床评分每日观察和记录各组小鼠EAE一般情况和神经功能评分，结果显示：EAE诱导14d，EAE组小鼠出现显着异常表现，85%EAE诱导小鼠出现神经功能评分增加，达到2分以上，部分小鼠出现尾部瘫痪、弓背，部分小鼠表现为后肢无力、甚至瘫痪，也有部分小鼠在5d内直接发展到前肢无力。异基因MSCs移植组和同基因MSCs移植组，神经功能评分显着降低，并随时间延长，神经功能评分降低更加明显，在一周内神经功能评分迅速达到最低值，MSCs移植后神经功能持续改善，维持20d以上。经统计学分析显示：异基因MSCs移植组与EAE对照组相比有显着差异，p<0.01；同基因MSCs移植组与EAE对照组相比有显着差异，p<0.01；异基因MSCs移植组与同基因MSCs移植组相比，无显着差异，p>0.05。3、MSCs移植影响EAE小鼠脾脏、淋巴结、胸腺CD4+CD25+Foxp3+T细胞的数量在MSCs移植20d，无菌获取胸腺、脾脏、肠系膜和腋窝淋巴结，制备单细胞悬液，用荧光标记抗体和流式细胞术分析胸腺、脾脏和淋巴结中CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比例。结果显示：脾脏中的CD4+CD25+Foxp3+T细胞，EAE组显着低于正常对照组（p=0.032）、异基因MSCs移植组（p<0.01）和同基因MSCs移植组（p=0.018）。淋巴结中的CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例，EAE组也显着低于正常对照组、异基因MSCs移植组及同基因MSCs移植组，p值均<0.01。胸腺中的CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例，EAE组低于正常对照组(p=0.025、异基因MSCs移植组（p <0.01）及同基因MSCs移植组（p=0.036）。4、MSCs移植改变EAE小鼠胸腺、脾脏Foxp3, TGF-β1and IL-10mRNA水平分别在MSCs移植20d、40d、60d处死小鼠，摘取胸腺、脾脏、淋巴结，制备单个核细胞，从107个细胞中提取总RNA，通过RT-PCR法检测Foxp3、TGF-β1和IL-10的表达。结果显示：Foxp3、TGF-β1和IL-10mRNA在正常对照组胸腺、脾脏和淋巴结稳定表达，EAE组小鼠Foxp3mRNA低表达，并逐渐下降至60d时间点达到最低。EAE组和正常对照组相比，上述各指标均有显着差异，p<0.01。在异基因MSCs移植20d，小鼠脾脏、淋巴结和胸腺Foxp3mRNA呈现低表达，随后逐渐增高正常水平，在异基因MSCs移植60d，与EAE组相比各器官Foxp3mRNA表达均有显着差异，p<0.01。在同基因MSCs移植组，脾脏、淋巴结、胸腺Foxp3mRNA的表达结果与异基因MSCs移植组相似，与EAE组相比各项指标均有显着差异， p<0.01。脾脏、淋巴结、胸腺TGF-β1mRNA在EAE组、MSCs异基因移植组和同基因移植组均表现为低表达（MSCs移植20d时），EAE组TGF-β1mRNA持续降低，并在60d时达到最低点，与正常对照组相比有显着差异，p<0.01。异基因移植组和同基因移植组随时间延长TGF-β1mRNA水平逐渐增加至正常水平，与EAE组相比有显着差异，p<0.01。IL-10mRNA在脾脏、淋巴结和胸腺中的表达水平有相似的趋势，异基因移植组、同基因移植组与EAE组相比，均有显着差异，p<0.01。5、CD4+CD25+T细胞（Treg）对CD4+CD25-T细胞（Teff）增殖的抑制作用EAE组小鼠CD4+CD25+T细胞对CD4+CD25-效应T细胞增殖的抑制作用显着降低，与正常对照组相比，P<0.01;同基因MSCs移植组与异基因MSCs移植组CD4+CD25+T细胞对CD4+CD25-效应T细胞增殖作用显着增强，与EAE组相比有显着差异，P<0.01;同基因MSCs移植组与异基因MSCs移植组相比，无显着差异，P>0.05。结论本研究利用MOG多肽注射小鼠成功诱导了实验性自身免疫性脑脊髓膜炎（EAE）小鼠模型，并通过注射骨髓间充质干细胞（MSCs）使EAE小鼠神经功能评分降低，使胸腺、脾脏和淋巴结中CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率增加和Foxp3、TGF-β1和IL-10mRNA表达水平增加。说明MSCs移植能预防EAE进展，并可成为临床治疗MS的手段，其中MSCs移植所致CD4+CD25+Foxp3+T细胞、Foxp3、TGF-β1和IL-10在EAE小鼠免疫器官表达增加可能是MSCs移植治疗疾病的重要机制。
戴四发[8]（2012）在《谷氨酰胺和γ-氨基丁酸对肉鸡抗热应激和肉品质的影响及机理探讨》文中指出本文通过体内试验研究了循环热应激（30-34℃）对肉鸡生长性能、屠宰性能、胴体性状、血清生化指标、肌肉品质、骨骼肌中G1n和GABA代谢、HSP70、AMPK信号通路相关指标的影响及外源性Gln和GABA的添加效果和互作效应,探讨了可能存在的机理,分析了骨骼肌部分指标与肌肉品质间的相关性。并进一步通过体外试验探讨了热应激条件下家禽骨骼肌细胞HSP70、AMPK问的调控关系及外源性Gln、GABA的干预作用,为氨基酸用于家禽抗热应激提供理论基础。1.体内试验：按照2因素2水平（2×2）加正对照组（PC组）的实验设计进行。选择健康的10日龄（d）健康AA公鸡360只,在适温条件下,常规饲养至21d时随机分为5组（每组6重复,每重复12只）。其中,四个热应激组（2×2）在22-42d进行循环热应激处理（每日9：00-14：00,温度从30℃升至34℃,14：00-18：00温度从34℃降至30℃,其他时间平均23℃左右）,在基础日粮中分别添加Gln（0、5g/kg）和GABA （0、100mg/kg）。PC组在适温条件饲养（约23℃）,饲喂基础日粮。于28、35、42d进行生长性能分析,并分别从各重复组抽取3只接近平均体重的样鸡用于屠宰性能、胴体品质、血清生化指标、肌肉品质、骨骼肌中Gin和GABA代谢、HSP70、AMPK信号通路相关组分的分析,对部分指标与肌肉品质之间的相关性进行分析,结果如下：1.1循环热应激降低了22-42d肉鸡增重（WG）和采食量（FI）,42d时的屠体重（CW）、半净膛重（HEW）、全净膛重（EW）、胸肌重（BMW）、胸肌率（BMY）、腿肌重（LMW）、腹脂重（AFW）、腹脂率（AFY）、肌间脂肪宽（IFW）、皮下脂肪厚（SFT）；增加了肉鸡料重比（F/G）和腿肌率（LMY）。日粮添加5g/kg Gln增加了22-42d热应激肉鸡WG、FI、CW、HEW、EW、BMW、BMY、LMW、AFW、AFY、 IFW、SFT;降低了F/G,对LMY有降低趋势。日粮添加100mg/kg GABA增加了22-42d热应激肉鸡WG、FI、EW、BMW、BMY、AFW、AFY、SFT;对CW、HEW、IFW有增加趋势。两种氨基酸在影响循环热应激肉鸡WG、FI、F/G、EW、EY、BMW、 BMY、AFW、AFY、IFW和SFT方面存在协同效应。在影响生产性能方面,Gln的作用具有较好的持续性,GABA在第1周时作用较强,随后明显减弱。1.2循环热应激降低了28d、35d、42d肉鸡血清TP、葡萄糖、甘油三酯、Gin、Glu、T4、Ins水平、ALP活性,22d、35d血清GABA水平；增加了22d、35d、42d肉鸡血清CS、GN水平、GOT、GPT、LDH、CK、NOS活性。日粮添加5g/kg Gln增加了22d、35d、42d热应激肉鸡血清TP、Gln、Ins水平,降低了血清甘油三酯、CS、GN水平、GOT、CK、NOS活性。日粮添加100mg/kg GABA增加了22d、35d、42d热应激肉鸡血清TP、Gln、GABA、T3水平、ALP活性,对甘油三酯、Gln、T4、 CS、Ins、GN水平、GOT、GPT、LDH、CK、NOS活性的影响存在明显的时间特异性。两种氨基酸在影响循环热应激肉鸡血清TP、甘油三酯、GABA、Gln、T3、T4、 Ins、GN水平、ALP、LDH和CK活性方面存在明显的协同效应,在影响转氨酶（GOT、 GPT）和NOS方面仅在第1周时较显着。1.3循环热应激增加了28、35、42d肉鸡胸肌pH、L*、水分、CP、CF、CA、 TL、F、MFDS,腿肌pH、L*、CA, DL、SF、MFDS;降低了肉鸡胸肌DL、CLMFDM,腿肌a*、b*、CP、CF、CL、TL、CL、MFDM。日粮添加5g/kg Gln降低了胸肌L*、SF、MFDS,腿肌L*、DL、SF、MFDS,增加了胸肌CP、CF、CA、TL、 DL、MFDM,腿肌a*、CP、CF、水分、CL、MFDM.日粮添加100mg/kg GABA降低了胸肌pH、TL、SF、腿肌pH、DL、SF,增加了胸肌a*、水分、CP、CF,腿肌a*、CF。两种氨基酸在影响循环热应激肉鸡胸肌pH、b*、水分、CP、WHC、TL、SF,腿肌pH、L*、a*、水分、CP、WHC、TL、SF方面存在明显的协同效应。此外,通过日粮Gln和GABA可以提高肌肉在冷藏过程中的色泽稳定性。1.4循环热应激降低了28d、35d、42d肉鸡胸肌、腿肌的Gln、Glu、GABA含量、Glnase、GAD活性,增加了胸肌、腿肌的GS、GABA-T活性。日粮添加5g/kg Gln增加了胸肌的Gln、Glu含量、Glnase、GAD活性,腿肌的Gln、Glu、GABA含量、GAD活性；降低了胸肌、腿肌的GS活性,对胸肌的GABA含量、GABA-T活性、腿肌的Glnase、GABA-T活性有不同程度的影响。日粮添加100mg/kg GABA增加了胸肌的Gln、Glu含量、Glnase、GAD活性,腿肌Gln含量、GAD活性；降低了胸肌的GABA-T活性、腿肌的GS活性。两种氨基酸对循环热应激肉鸡胸肌、腿肌的Gln、 GABA含量、Glnase、GS、GABA-T活性的影响存在明显的协同效应。42d肉鸡胸肌、腿肌的Gln、GABA含量、Glnase、GS活性与L*、CP、CF、CL、MFDS和MFDM间存在显着的相关性。1.5循环热应激降低了28d、35d、42d肉鸡胸肌、腿肌糖原、葡萄糖、乳酸含量,增加了胸肌、腿肌的AMP/ATP、AMPK含量、AMPK活性、HSP70含量、AMPKa2mRNA、HSP70mRNA表达量。日粮添加5g/kg Gln增加了胸肌、腿肌的HSP70含量、HSP70mRNA表达量、胸肌的葡萄糖、腿肌的糖原；降低了胸肌、腿肌的AMP/ATP、 AMPK含量、AMPK活性。日粮添加100mg/kg GABA增加胸肌的糖原、葡萄糖、腿肌的葡萄糖、乳酸,降低了胸肌、腿肌的AMP/ATP、AMPK活性、腿肌的HSP70含量、HSP70mRNA表达量。两种氨基酸对循环热应激肉鸡胸肌的葡萄糖、乳酸、腿肌的糖原、乳酸、胸肌和腿肌的AMP/ATP、AMPK活性、HSP70mRNA表达量存在明显的协同效应。42d肉鸡胸肌和腿肌的糖原、葡萄糖、乳酸与水分、CP、CF, AMP/ATP. AMPK含量、AMPK活性与L*、水分、CP、CF、WHC、DL、CL、MFDS和MFDM间,HSP70含量与WHC、TL、DL间存在较为显着的相关性。2.体外试验：研究热应激影响家禽骨骼肌细胞HSP70、AMPK的调控关系及外源性Gln. GABA的干预作用。以1-2×106个/mL密度的成肌细胞进行试验。处理后置于37℃水浴中进行3h修复,收集细胞供分析。2.1热应激条件下HSP70表达与AMPK活性变化时差性分析共5组,每组6重复,基础培养基培养3h后进行热应激处理（42℃和45℃,0-120min）。结果表明：热应激提高了细胞的HSP70表达量和AMPK活性,以45℃处理的提高速度更快,程度更大,且以AMPK活性的变化速度快于HSP70表达量的变化。2.2HSP70表达与AMPK活性问的调控关系分析（1）QD抑制HSP70表达试验：共7组,每组6重复。用添加浓度为0-50umol/L的QD的基础培养基预培养3h,进行42℃和45℃、30min的热应激处理。结果表明：QD对HSP70表达的抑制作用存在明显的温度特异性,仅45℃时表现显着。同时,45℃时的AMPK活性具有不同程度的增加,显示HSP70能在一定程度上抑制/AMPK活性。（2）AICAR激活AMPK试验：共7组,每组6重复。用添加浓度为0-0.5mmol/L的AICAR的基础培养基培养3h处理。结果表明：AICAR能有效激活适温条件下的骨骼肌细胞AMPK活性,但对HSP70的表达量无影响。2.3Gln、GABA对细胞HSP70与AMPK的影响各取5组,每组6重复。在基础培养基中分别添加0-20mmol/L Gln和0-0.8mmol/L GABA预培3h后,进行45℃,30mmin热应激处理。结果表明：Gln能有效增加热应激条件下骨骼肌细胞的HSP70表达量,同时抑制AMPK活性的增加。GABA能在一定程度上抑制AMPK活性的增加,但对HSP70表达量无影响。2.4Gln、GABA对极端热应激骨骼肌细胞成活率的影响各取3组,每组6重复。分别用添加0、10、20mmol/L Gln和0、0.4、0.8mmol/L GABA的基础培养基预孵3h后,采用48℃高温处理3h、6h,分析细胞成活率。结果表明：添加10、20mmol/L Gln提高了热应激处理3h、6h后的骨骼肌细胞成活率；添加0.4、0.8mmol/L GABA对细胞成活率无明显影响。根据研究结果可以得出结论：（1）本研究采用的30-34℃循环热应激对22-42d肉鸡生长性能、胴体性状、血清主要代谢物、激素和代谢酶等生化指标产生了显着的负面影响,也显示了机体对热应激的适应性。日粮添加5g/kg Gin、100mg/kg GABA能有效缓解循环热应激对上述指标带来的负面作用,同时表现出了明显的协同效应和时间特异性。（2）从物质代谢角度分析,循环热应激显着影响了血清和骨骼肌中的Gln、Glu、 GABA水平,以及三种氨基酸间的代谢酶。通过日粮添加5g/kg Gln、100mg/kg GABA可以有效改善循环热应激条件下肉鸡骨骼肌中Gln、GABA的代谢状况,同时表现出了一定的协同效应和骨骼肌组织差异性。（3）循环热应激明显造成了肉鸡机体的低能量状态,激活了骨骼肌中AMPK信号通路,促进了骨骼肌中HSP70转录和表达。通过日粮添加5g/kg Gln、100mg/kg GABA可以改善机体的能量状况,抑制骨骼肌AMPK信号通路,且表现出了一定的协同效应。同时说明,Gin的这种积极作用可能在一定程度上与促进HSP70表达有关,而GABA的改善作用与HSP70无关,可能与其神经系统和生理调控方面功能有关。（4）循环热应激对胸肌、腿肌的化学组成和肉品质指标产生了显着的负面影响。通过日粮中添加5g/kg Gln、100mg/kg GABA对于缓解热应激对这些指标带来的负面影响具有积极作用,其中的机制与骨骼肌中Gin代谢变化、（?）AMPK信号通路激活状况、HSP70表达量的变化有密切关系,且表现出了一定的协同效应和骨骼肌组织差异性。（5）通过体外骨骼肌细胞试验证明,热应激能激活肌细胞AMPK信号通路,促进HSP70的表达。热应激细胞中HSP70的表达可在一定程度上抑制AMPK信号通路的激活,起到保护细胞作用。在适温条件下细胞中AMPK的激活并不能导致HSP70表达量的变化。同时证明,外源性Gln、GABA均能抑制热应激骨骼肌细胞AMPK信号通路,但仅有Gln能有效保护热应激细胞,其作用与促进HSP70表达密切相关。
朱童[9]（2010）在《高温气候对烫伤大鼠免疫功能影响的实验研究》文中进行了进一步梳理目的:观察高温环境下烫伤大鼠外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞活性及炎性介质IL-6、IL-10、TNF-α的变化,了解高温气候对烫伤大鼠免疫功能的影响。方法:健康SD大鼠72只,雌雄各半,体重（200±20）g,随机分成四组:A组（常温饲养+烫伤+常温饲养,n=18）、B组（常温饲养+烫伤+高温饲养,n=18）、C组（高温习服+烧伤+常温饲养,n=18）和D组（高温习服+烧伤+高温饲养,n=18）。实验动物适应性饲养一周后,A、B组继续常温下饲养10天,C、D组置于人工气候箱内[温度为（38±1）℃;相对湿度为（55±5）%],1 h/d,连续10d,观察并记录大鼠基础体温和热暴露后直肠温度变化,待大鼠习服高温。第11天各组大鼠脱毛、麻醉,造成30%TBSAⅢ度烧伤,烫伤后A、C组继续常温下饲养,B、D组高温下饲养。观察各组大鼠生存状况并于伤后第1、3、7天各取6只无菌条件下活体采取下腔静脉血5ml,2ml用EDTA抗凝管装后送流式细胞仪室检测T淋巴细胞亚群、NK细胞活性和CD25+T淋巴细胞,3ml离心后ELISA检测炎性介质IL-6、IL-10、TNF-α。结果:1.高温习服组大鼠热暴露前后直肠温度的变化:大鼠在高温环境下,受热后直肠温度明显高于受热前,差异具有显着性（P<0.05或P<0.01）;第9天直肠温度降低至热暴露前水平,与热暴露前比较差异无显着性（P>0.05）,说明大鼠对高温环境已适应。2.各组大鼠生存情况的观察:A、C、D组大鼠实验过程中无死亡发生,B组伤后置于高温环境中饲养,120min后多数大鼠出现呼吸急促、烦躁不安等表现。4h后开始出现死亡,伤后1d已死亡15只,至伤后2d全部死亡。3.各组大鼠免疫功能的比较:（1）A、B组大鼠免疫活性;B组与A组比较,CD3+变化不大（P>0.05 ）,CD4+ T淋巴细胞、CD4+/CD8+、CD25+T淋巴细胞、NK细胞活性均明显下降（P<0.05或P<0.01）,CD8+T淋巴细胞明显升高（P<0.01）。（2）A、C组伤后各时相点大鼠免疫活性; C组与A组比较,伤后各时相点CD3+变化不大（P>0.05 ）,伤后1天CD8+T淋巴细胞明显升高（P<0.01）,伤后7天CD4+ T淋巴细胞明显下降（P<0.05）,伤后1、7天CD4+/CD8+、CD25+T淋巴细胞、NK细胞活性均明显下降（P<0.05或P<0.01）。（3）C、D组伤后各时相点大鼠免疫活性: D组与C组比较,伤后各时相点CD3+、CD4+/CD8+、CD25+T淋巴细胞均明显降低,CD8+T淋巴细胞明显升高（P<0.05或P<0.01）。伤后1天CD4+ T淋巴细胞明显下降（P<0.05）,伤后1、3天NK细胞活性均明显下降（P<0.05或P<0.01）。（4）B、D组伤后1天大鼠免疫活性;D组与B组比较,CD4+ T淋巴细胞、CD4+/CD8+、CD25+T淋巴细胞、NK细胞活性变化不大（P>0.05 ）,CD3+、CD8+T淋巴细胞明显减少（P<0.05或P<0.01）。4.各组大鼠IL-6、IL-10、TNF-α炎性介质的比较:（1）B组与A组比较,IL-6、IL-10、TNF-α明显升高（P<0.01）。（2）C组与A组比较,伤后1天IL-6、IL-10、TNF-α明显升高（P<0.01）,伤后3、7天无明显变化（P>0.05 ）。（3） D组与C组比较,伤后各时相点IL-6、IL-10、TNF-α明显升高（P<0.01）。（4）D组与B组比较,伤后1天IL-6、IL-10、TNF-α明显降低（P<0.01）。结论:1.伤前及伤后的高温应激均严重损害大鼠的细胞免疫功能,扩大其炎性反应。2.伤前热习服可减轻这种损害,提高大鼠耐高温能力。3.高温、烧伤的复合应激较烧伤单因素对大鼠细胞免疫功能的损害和炎性反应的影响更为严重。
朱童,詹剑华[10]（2010）在《高温环境热应激研究进展》文中认为
二、热暴露大鼠肠系膜淋巴结DC的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、热暴露大鼠肠系膜淋巴结DC的研究（论文提纲范文）
（3）补充山楂提取物对高温环境下运动大/小鼠心血管保护和热耐受能力影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第1章 实验研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 材料 |
| 1.1.2 方法 |
| 1.1.3 数据的处理和统计分析 |
| 1.1.4 质量控制 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 高温环境对运动大鼠心血管的影响 |
| 1.2.2 高温环境对运动大/小鼠热耐受能力的影响 |
| 1.2.3 补充不同剂量山楂提取物对保护高温环境下运动大鼠心血管的作用效果 |
| 1.2.4 补充不同剂量山楂提取物对高温环境下运动大/小鼠热耐受能力作用效果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 高温环境对运动大鼠心血管的影响及山楂提取物干预效果 |
| 1.3.2 高温环境对运动大鼠大/小鼠热耐受能力的影响及山楂提取物干预效果 |
| 1.4 结论 |
| 参考文献 |
| 第2章 综述 山楂提取物及高温环境对心血管和热耐受能力影响的研究进展 |
| 2.1 山楂的成分分析 |
| 2.1.1 山楂的营养成分 |
| 2.1.2 山楂的生物活性成分 |
| 2.2 山楂提取物对心血管的保护作用 |
| 2.3 山楂提取物及其对热耐受的作用 |
| 2.4 高温环境对机体的心血管和热耐受的影响 |
| 2.4.1 高温环境对心血管系统的影响 |
| 2.4.2 高温与热耐受能力研究 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 学位论文数据集 |
（4）高温联合紫外线暴露对大鼠脾脏Bcl-6mRNA表达及血清IL-21、CXCL13水平的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 2.研究方法 |
| 3.统计学方法 |
| 结果 |
| 1.一般状态 |
| 2.体重变化 |
| 3.脏器系数变化 |
| 4.血清IL-21与CXCL13变化 |
| 5.大鼠脾脏Bcl-6mRNA表达量的变化 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 综述一 高温、紫外线暴露对免疫系统的不良影响 |
| 综述二 Bcl-6基因与相关因子(IL-21、CXCL13)的研究现状 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 个人简介 |
| 开题、中期及学位论文答辩委员组成 |
（5）高温高湿环境运动时机体变化探析（论文提纲范文）
| 1 温湿环境下运动时机体机能的变化 |
| 1.1 大气湿度对运动时机体机能影响 |
| 1.2 大气温度对运动时机体机能影响 |
| 1.3 高温高湿环境运动时对机体机能影响 |
| 2 高温高湿环境下运动对免疫机能的影响 |
| 2.1 运动对免疫机能影响 |
| 2.2 热应激对机体免疫功能影响 |
| 2.3 高温高湿环境下运动对机体免疫机能影响 |
| 3 小结 |
（6）不同分子量的枸杞多糖提取分析及对细胞迁移的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 研究背景与立题依据 |
| 1.1 枸杞多糖的研究进展 |
| 1.1.1 枸杞多糖的提取分离与分析的研究 |
| 1.1.2 枸杞多糖的生物活性研究 |
| 1.1.3 枸杞多糖的免疫及抗肿瘤作用 |
| 1.1.4 多糖的构效关系研究 |
| 1.1.5 枸杞多糖的毒理学和不良反应 |
| 1.1.6 肠道粘膜免疫 |
| 1.1.7 淋巴细胞的归巢与再循环 |
| 1.1.8 细胞迁移 |
| 1.2 立题依据 |
| 1.2.1 研究假设 |
| 1.2.2 研究目的和意义 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一章 免疫抑制模型的复制 |
| 1 试剂、材料和仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 环磷酰胺和地塞米松对BALB/c小鼠整体免疫系统的抑制作用 |
| 2.2 环磷酰胺和地塞米松对BALB/c小鼠肠道粘膜免疫的抑制作用 |
| 2.3 环磷酰胺和地塞米松对DTH小鼠免疫的抑制作用 |
| 第二章 中药的选择 |
| 1 试剂、材料和仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验操作 |
| 2.2 数据处理 |
| 2.3 实验结果 |
| 第三章 枸杞多糖的分离提取及成分分析 |
| 第一节 枸杞多糖的分离提取 |
| 3.1 枸杞多糖的分离提取 |
| 3.1.1 材料与方法 |
| 3.1.2 不同PH水溶液对枸杞多糖产率的影响 |
| 3.2 工业酶celluclean对枸杞多糖提取的影响 |
| 3.3 不同分子量段枸杞多糖的分级提取 |
| 3.4 讨论 |
| 第二节 枸杞多糖的成分分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂及溶液 |
| 1.2 硫酸-苯酚比色法检测枸杞多糖含量 |
| 1.2.1 实验方法 |
| 1.2.2 结果 |
| 1.3 枸杞多糖还原性糖的分析 |
| 1.3.1 实验方法 |
| 1.3.2 结果 |
| 1.4 枸杞多糖粗脂肪的分析 |
| 1.4.1 实验方法 |
| 1.4.2 结果 |
| 1.5 枸杞多糖糖醛酸的分析 |
| 1.5.1 实验方法 |
| 1.5.2 结果 |
| 1.5.3 稳定性实验、精密度实验、重现性实验 |
| 1.5.4 标准曲线的制作 |
| 1.5.5 样品含量测定 |
| 1.6 枸杞多糖蛋白质的含量 |
| 1.6.1 蛋白质含量测定 |
| 1.6.2 SDS-PAGE |
| 1.7 枸杞多糖的HPLC单糖组成测定 |
| 1.7.1 实验操作 |
| 1.7.2 实验结果 |
| 1.8 讨论 |
| 第四章 动物在体实验 |
| 1. 试剂、材料和仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 免疫增强作用 |
| 2.2 免疫调节作用 |
| 2.3 脏器指数 |
| 2.4 肝门静脉血中T,B淋巴细胞的比例及表达α4β 7的比例 |
| 2.5 派氏结中T,B淋巴细胞的比例及α4β7的表达 |
| 2.6 统计分析 |
| 2.7 实验结果 |
| 2.8 讨论 |
| 第五章 体外实验筛选活性成分 |
| 第一节 细胞抑制作用 |
| 1 试剂、材料和仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 不同分子量的枸杞多糖对Hela的抑制作用 |
| 2.2 枸杞多糖NO.4对Hela细胞贴壁时间的考察 |
| 2.3 枸杞多糖NO.4对Hela细胞不同细胞浓度的抑制作用 |
| 2.4 不同浓度的枸杞多糖NO.4对Hela的抑制作用 |
| 2.5 不同分子量段枸杞多糖对L929和A549的抑制作用 |
| 2.6 多糖细胞毒性试验 |
| 2.7 细胞凋亡作用的考察 |
| 2.8 数据处理 |
| 2.9 实验结果 |
| 2.10 讨论 |
| 第二节 多糖对细胞迁移的影响 |
| 1 试剂、材料和仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞浓度和给药剂量 |
| 2.2 细胞粘附实验 |
| 2.3 划痕法测定细胞迁移 |
| 2.4 细胞伸展实验 |
| 2.5 趋化小室法测定细胞迁移 |
| 2.6 统计分析 |
| 2.7 结果 |
| 2.8 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文 |
| 致谢 |
| 附件1:统计学处理合格证明 |
（7）间充质干细胞移植对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的影响（论文提纲范文）
| 英文缩略词表（Abbreviation） |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 实验性自身免疫性脑脊髓膜炎小鼠模型的建立及其CD4~~+CD25~~+Foxp3~~+T 细胞的检测 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 同基因、异基因骨髓间充质干细胞移植对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎模型脾脏、淋巴结和胸腺 CD4~+T 细胞的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 论文创新点 |
| 综述一 调节性 T 细胞与自身免疫病研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 间充质干细胞与自身免病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简历 |
| 在学期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（8）谷氨酰胺和γ-氨基丁酸对肉鸡抗热应激和肉品质的影响及机理探讨（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要缩略词中英文对照 |
| 上篇 文献综述 |
| 第一章 应激和热应激 |
| 1 应激的概述 |
| 2 热应激对动物机体的影响 |
| 3 应激与热休克蛋白70 |
| 4 应激与腺苷酸活化蛋白激酶 |
| 第二章 谷氨酰胺与抗应激研究进展 |
| 1 谷氨酰胺在机体中的来源与分布 |
| 2 谷氨酰胺的生理学作用 |
| 3 谷氨酰胺与骨骼肌蛋白质代谢 |
| 4 谷氨酰胺与热休克蛋白HSP70 |
| 5 谷氨酰胺与AMPK信号通路 |
| 6 谷氨酰胺在动物生产中的应用 |
| 第三章 γ-氨基丁酸研究进展 |
| 1 γ-氨基丁酸在机体中的分布及其受体 |
| 2 γ-氨基丁酸在机体中的代谢 |
| 3 γ-氨基丁酸的生理学作用 |
| 4 γ-氨基丁酸在营养保健中的应用 |
| 5 在动物生产中的应用 |
| 6 谷氨酰胺和γ-氨基丁酸的相关性及研究问题的提出 |
| 下篇 试验研究 |
| 第一章 Gln和GABA对热应激肉鸡生长性能、屠宰性能和胴体性状的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 Gln和GABA对热应激肉鸡血清生化指标的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 Gin和GABA对热应激肉鸡骨骼(?)化学组成和肉品质的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 Gln和GABA对热应激肉鸡骨骼肌Gln和GABA代谢的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五章 Gln和GABA对热应激肉鸡骨骼肌HSP70、AMPK信号通路和相关组分的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第六章 热应激影响肉鸡骨骼肌细胞HSP70、AMPK的关系探讨及Gln、GABA的干预作用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 本文主要创新点及有待进一步研究的关键问题 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
（9）高温气候对烫伤大鼠免疫功能影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 引言 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验试剂 |
| 2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验动物与方法 |
| 2.4 时相点及取材 |
| 2.5 观察指标与方法 |
| 2.6 统计方法 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 高温习服组大鼠热暴露前后直肠温度的变化 |
| 3.2 各组大鼠生存情况的观察 |
| 3.3 各组大鼠 T 淋巴亚群，NK 细胞活性及 CD25+T 淋巴细胞表达变化 |
| 3.4 各组大鼠 IL-6,IL-10,TNF-α炎性介质变化 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 高温环境对烫伤大鼠生存的影响 |
| 4.2 高温环境对烫伤大鼠的细胞免疫功能的影响 |
| 4.3 热习服适当改善高温环境下烫伤大鼠的细胞免疫功能 |
| 4.4 高温环境对烫伤大鼠炎性介质的影响 |
| 第5章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 攻读研究生期间的成果 |
| 附带综述 |
（10）高温环境热应激研究进展（论文提纲范文）
| 1 高温环境因素的不利影响 |
| 2 热应激、热衰竭与热休克 |
| 2.1 热应激 |
| 2.2 热衰竭 |
| 2.3 热休克 |
| 3 高温环境下热应激对生理反应的影响 |
| 3.1 体温调节 |
| 3.2 心血管系统 |
| 3.3 消化系统 |
| 3.4 呼吸功能与能量代谢 |
| 3.5 神经内分泌系统 |
| 3.6 泌尿系统 |
| 3.7 免疫系统 |
| 3.8 水盐代谢 |
四、热暴露大鼠肠系膜淋巴结DC的研究（论文参考文献）
- [1]间歇低氧对大鼠肠道细菌移位发生及肠系膜淋巴结结构的影响[J]. 陈前程,王红阳,董爱英,付爱双,张盼盼,戈艳蕾,朱晓颖,张倩. 中华结核和呼吸杂志, 2021(01)
- [2]重症中暑免疫功能障碍的研究进展[J]. 洪欣欣,刘喆滢,高经华,刘志锋. 中华急诊医学杂志, 2021(01)
- [3]补充山楂提取物对高温环境下运动大/小鼠心血管保护和热耐受能力影响的研究[D]. 郑翔. 华北理工大学, 2019(01)
- [4]高温联合紫外线暴露对大鼠脾脏Bcl-6mRNA表达及血清IL-21、CXCL13水平的影响[D]. 郭金霞. 宁夏医科大学, 2018(10)
- [5]高温高湿环境运动时机体变化探析[J]. 余群,翁锡全,王丽平. 辽宁体育科技, 2016(02)
- [6]不同分子量的枸杞多糖提取分析及对细胞迁移的影响[D]. 李相玲. 广州中医药大学, 2014(07)
- [7]间充质干细胞移植对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的影响[D]. 朱敬松. 郑州大学, 2014(01)
- [8]谷氨酰胺和γ-氨基丁酸对肉鸡抗热应激和肉品质的影响及机理探讨[D]. 戴四发. 南京农业大学, 2012(12)
- [9]高温气候对烫伤大鼠免疫功能影响的实验研究[D]. 朱童. 南昌大学, 2010(05)
- [10]高温环境热应激研究进展[J]. 朱童,詹剑华. 职业与健康, 2010(09)